李玉泉

吉林省白山市中心血站檢驗(yàn)科，吉林白山134300

核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)血液病毒的比較分析

李玉泉

吉林省白山市中心血站檢驗(yàn)科，吉林白山134300

目的探析核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)血液病毒的臨床效果。方法選取2013年7月—2016年7月該血站檢驗(yàn)科血液樣本500例為研究對(duì)象，分別給予核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)，并且計(jì)算與對(duì)比兩種檢測(cè)方法的陽(yáng)性率。結(jié)果在HBV（乙型肝炎病毒）檢測(cè)中，核酸檢測(cè)陽(yáng)性率為3.0%（15/500），同酶聯(lián)免疫檢測(cè)的1.2%（6/500）進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；在HCV（丙型肝炎病毒）檢測(cè)中，核酸檢測(cè)陽(yáng)性率為1.8%（9/500），同酶聯(lián)免疫檢測(cè)的1.6%（8/ 500）進(jìn)行比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；在HIV（人類免疫缺陷病毒）檢測(cè)中，核酸檢測(cè)陽(yáng)性率為0.4%（2/500），同酶聯(lián)免疫檢測(cè)的1.8%（9/500）進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論在血液病毒檢測(cè)中，核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)各具優(yōu)勢(shì)，存在一定的互補(bǔ)性，因此，可結(jié)合實(shí)際情況，給予兩者聯(lián)合應(yīng)用，以此提高血液病毒檢測(cè)準(zhǔn)確性。

血液病毒；核酸檢測(cè)；酶聯(lián)免疫檢測(cè)

輸血是HBV、HCV、HIV傳染的主要途徑，加強(qiáng)血液的抗體檢驗(yàn)或抗原檢驗(yàn)，可以有效減少甚至避免輸血中病毒的傳染?，F(xiàn)今，解決病毒傳染“窗口期”是血液篩查技術(shù)的重要所在[1]。隨著PCR探針、病毒核酸提取自動(dòng)化的不斷發(fā)展，在血液篩查檢測(cè)中核酸檢測(cè)應(yīng)用越來(lái)越普遍。相較于酶聯(lián)免疫檢測(cè)而言，其“窗口期”更短，減少了假陽(yáng)性。為了更好地落實(shí)血液病毒檢測(cè)工作，對(duì)該血站檢驗(yàn)科2013年7月—2016年7月抽檢的500例血液樣本進(jìn)行分析，探究核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)的應(yīng)用效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2013年7月—2016年7月該血站檢驗(yàn)科血液樣本500例為研究對(duì)象，其中女性220例，男性280例；最小年齡是19歲，最大年齡是62歲，平均為（42.1± 4.4）歲。每份血液樣本均放置于5 mL、7 mL的真空抗凝管中，保存在2~8℃的冰箱中。其中5 mL真空抗凝管中的血液樣本在3h內(nèi)予以血漿分離，之后給予核酸檢測(cè)；7 mL真空抗凝管中的血液樣本在24 h內(nèi)予以血漿分離，之后給予酶聯(lián)免疫檢測(cè)。

1.2方法

1.2.1核酸檢測(cè)在室溫條件下，離心處理5 mL真空抗凝管中的血液樣本，離心時(shí)間為20 min，并且保存在2～8℃的冰箱中。在血液樣本常規(guī)檢查合格之后，置于加樣儀樣品條架上，按照一級(jí)分配試劑程序予以操作。具體如下：向A號(hào)96孔深孔板中加入600 μL結(jié)合液與50 μL磁珠，向B號(hào)96孔深孔板中加入100 μL洗脫液及100 μL的A、B洗液，裂解血液樣本，并且在操作過(guò)程中注意防范污染。裂解血液樣本之后，利用核酸提取儀從A號(hào)96孔深孔板、B號(hào)96孔深孔板中提取核酸，同時(shí)配備擴(kuò)增核酸的反應(yīng)液。根據(jù)血液樣本量，按照四級(jí)核酸擴(kuò)增程序，向八聯(lián)管中加入提取核酸后的結(jié)合液，并且置于PCR儀上予以擴(kuò)增，詳細(xì)記錄結(jié)果，挑出呈現(xiàn)陽(yáng)性的血液樣本，之后給予拆分實(shí)驗(yàn)，從而對(duì)血液樣本陽(yáng)性率予以確定。

1.2.2酶聯(lián)免疫檢測(cè)在室溫條件下，離心處理7 mL真空抗凝管中的血液樣本，離心時(shí)間為20 min，并且保存在2～8℃的冰箱中。在完成離心處理后，利用全自動(dòng)加樣儀予以自動(dòng)加樣，并且采用全自動(dòng)酶免分析儀進(jìn)行分析，詳細(xì)記錄檢測(cè)結(jié)果。

1.3觀察指標(biāo)

對(duì)兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行觀察與記錄，通過(guò)對(duì)比，探析核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)的應(yīng)用效果。

1.4統(tǒng)計(jì)方法

將觀察數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS 19.0版統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件中予以分析，用百分比的形式表示檢測(cè)陽(yáng)性率，并進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1對(duì)比HBV的核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)

在HBV檢測(cè)中，核酸檢測(cè)陽(yáng)性率為3.0%，同酶聯(lián)免疫檢測(cè)的1.2%進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.940，P<0.05），見(jiàn)表1。

表1　HBV的核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)結(jié)果對(duì)比[n（%）]

2.2對(duì)比HCV的核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)

在HCV檢測(cè)中，核酸檢測(cè)陽(yáng)性率為1.8%，同酶聯(lián)免疫檢測(cè)的1.6%進(jìn)行比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.060，P>0.05），見(jiàn)表2。

表2　HCV的核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)結(jié)果對(duì)比[n（%）]

2.3對(duì)比HIV的核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)

在HIV檢測(cè)中，核酸檢測(cè)陽(yáng)性率為0.4%，同酶聯(lián)免疫檢測(cè)的1.8%進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.504，P<0.05），見(jiàn)表3。

表3　HIV的核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)結(jié)果對(duì)比[n（%）]

3　討論

目前，病毒標(biāo)記物檢測(cè)的內(nèi)容主要為病毒抗原、抗體的檢測(cè)，從病毒進(jìn)入機(jī)體至能夠檢測(cè)到病毒抗原或者抗體的過(guò)程，稱之為病毒感染的“窗口期”[2]。在血液檢測(cè)現(xiàn)行方法中，血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)的“窗口期”相對(duì)較長(zhǎng)，對(duì)于處在“窗口期”的血液病毒檢測(cè)而言，其結(jié)果均呈陰性，而事實(shí)上血液中已經(jīng)存在病毒，并且具有一定的復(fù)制能力，所以，怎樣縮短病毒檢測(cè)“窗口期”，有效檢測(cè)到血液病毒，成為了專業(yè)研究的重點(diǎn)內(nèi)容。

在血液病毒檢驗(yàn)中，核酸檢測(cè)得到了廣泛應(yīng)用，因?yàn)槠潇`敏度與特異性較高，使其檢測(cè)效果更好，有效提高了醫(yī)療質(zhì)量。盡管核酸檢測(cè)優(yōu)勢(shì)明顯，但其對(duì)血液樣本、檢測(cè)環(huán)境及操作人員技術(shù)水平的要求較高，倘若檢測(cè)前無(wú)法確保血液樣本的質(zhì)量，那么也就無(wú)法確保核酸檢測(cè)的效果，致使檢測(cè)失敗，出現(xiàn)漏檢[3]。因此，為了有效提高血液病毒檢測(cè)準(zhǔn)確性，一定要加強(qiáng)核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)的互補(bǔ)。

在HBV檢測(cè)中，核酸檢測(cè)陽(yáng)性率為3.0%，同酶聯(lián)免疫檢測(cè)的1.2%進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.05）。此研究結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[4]十分相似。通過(guò)總結(jié)分析可知，致使出現(xiàn)漏檢的原因主要有：①乙肝酶聯(lián)免疫檢測(cè)的“窗口期”較長(zhǎng)：在HBV漏檢中，乙肝酶聯(lián)免疫檢測(cè)的“窗口期”較長(zhǎng)是主要原因，通常而言，HBV的“窗口期”在0.5～3.0個(gè)月之間，少數(shù)情況下可達(dá)到4.0～5.0個(gè)月[5]。②存在HBV變異株：HBV-S基因變異造成病毒衣殼抗原決定簇改變，進(jìn)而引起相應(yīng)的抗體變化，易造成漏檢。③隱匿性HBV感染：因?yàn)榧竟?jié)因素的影響，導(dǎo)致HBV感染存在一定的隱匿性，易出現(xiàn)漏檢。在實(shí)際檢測(cè)中，兩種檢測(cè)方法均存在一些漏檢的弱陽(yáng)性情況，各具優(yōu)劣勢(shì)，所以，在實(shí)踐應(yīng)用中，可充分考慮實(shí)際情況，給予兩種檢測(cè)互補(bǔ)，以此提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。

在HCV檢測(cè)中，核酸檢測(cè)陽(yáng)性率為1.8%，同酶聯(lián)免疫檢測(cè)的1.6%進(jìn)行比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。此研究結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[6]十分相似。由此可以看出，在血液病毒檢測(cè)中，核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)均存在著一定的不足，應(yīng)重視兩種檢測(cè)方法的互補(bǔ)，以此增強(qiáng)血液病毒檢測(cè)質(zhì)量。

在HIV檢測(cè)中，核酸檢測(cè)陽(yáng)性率為0.4%，同酶聯(lián)免疫檢測(cè)的1.8%進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。此研究結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[7]十分相似。由此可以看出，核酸檢測(cè)血液HIV的陽(yáng)性率明顯低于酶聯(lián)免疫檢測(cè)，考慮到酶聯(lián)免疫檢測(cè)的假陽(yáng)性較高，可采用兩種檢測(cè)方法聯(lián)合應(yīng)用的方案，以此避免血液浪費(fèi)，提高檢測(cè)效果。在該次檢測(cè)中，核酸檢測(cè)未出現(xiàn)漏檢情況，原因可能為：①血站檢測(cè)規(guī)章制度較為完善，并且質(zhì)控措施落實(shí)到位。②達(dá)到了100%的自愿無(wú)償獻(xiàn)血，減少了惡意獻(xiàn)血對(duì)血液樣本質(zhì)量的干擾。③二次酶聯(lián)免疫檢測(cè)得到了充分落實(shí)。④HIV酶聯(lián)免疫檢測(cè)的“窗口期”相對(duì)較短，進(jìn)一步確保了血液樣本的質(zhì)量。然而有關(guān)文獻(xiàn)研究顯示，因?yàn)榧毙园滩《靖腥菊叩牟〕讨?，血清中P24抗原減少、抗體增加，導(dǎo)致出現(xiàn)“第2窗口期”，其抗原、抗體濃度要比試劑檢測(cè)限值低，進(jìn)而致使出現(xiàn)漏檢現(xiàn)象[8]。隨著血液樣本量的不斷增加，在進(jìn)行核酸檢測(cè)的時(shí)候，不排除出現(xiàn)漏檢的情況。為了有效控制艾滋病毒感染，必須重視HIV抗原、抗體的檢測(cè)，從而盡早發(fā)現(xiàn)感染者，以此對(duì)其進(jìn)行有效控制，避免傳播。在進(jìn)行檢測(cè)的時(shí)候，一定要加強(qiáng)核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)的聯(lián)合應(yīng)用，以此最大限度地提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。

當(dāng)然，在血液病毒檢測(cè)中，核酸檢測(cè)也不是絕對(duì)可靠的，無(wú)法用核酸檢測(cè)完全代替酶聯(lián)免疫檢測(cè)，因?yàn)楹怂釞z測(cè)易受到眾多因素的干擾，導(dǎo)致檢測(cè)假陽(yáng)性率較高。所以，在血液病毒檢測(cè)中，核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)各具優(yōu)勢(shì)，存在一定的互補(bǔ)性，因此，可結(jié)合實(shí)際情況，給予二者聯(lián)合應(yīng)用，以此提高血液病毒檢測(cè)準(zhǔn)確性。

綜上，為了減少輸血感染，提高醫(yī)療用血安全性，一定要重視核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)聯(lián)合應(yīng)用。

[1]吳寶軍.核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)血液病毒的對(duì)比分析[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2015,14(7):115-116.

[2]鐘萬(wàn)芬,唐小勇.HBsAg和抗-HCV酶聯(lián)免疫檢測(cè)與血液病毒核酸篩查技術(shù)之間的相關(guān)性分析[J].肝臟,2015,5(11): 876-878.

[3]周麗君,郭偉鵬,譚湘濤,等.病毒核酸檢測(cè)對(duì)降低輸血傳播疾病殘余風(fēng)險(xiǎn)的分析研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014,4(2): 214-217.

[4]于志軍,鄧雪蓮,高慧卉,等.血清學(xué)檢測(cè)與核酸檢測(cè)在獻(xiàn)血者血液篩查中的相關(guān)性研究[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2014,21(5): 532-534.

[5]潘水莉,李群娟,李培訓(xùn),等.1例固定獻(xiàn)血者HBsAg酶聯(lián)免疫法檢測(cè)無(wú)反應(yīng)性而病毒核酸檢測(cè)有反應(yīng)性引發(fā)的思考[J].中外女性健康研究,2015,9(18):30.

[6]關(guān)飛舜,石星亮.血清學(xué)檢測(cè)聯(lián)合核酸檢測(cè)在血液中心的應(yīng)用價(jià)值[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘:連續(xù)型電子期刊,2016, 16(20):7,9.

[7]張金,曹馨勻,李秋英,等.血液篩查中核酸檢測(cè)與ELISA聯(lián)合應(yīng)用的研究[J].甘肅科學(xué)學(xué)報(bào),2014,26(6):59-61.

[8]陜柏峰,王斌,韓文,等.核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法在血液篩查中的對(duì)比研究[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2015,6(12):1306-1307.

Analysis of Comparison of Nucleic Acid Detection and Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Blood Virus

LI Yu-quan
Department of Clinical Laboratory,Blood Center of Baishan,Baishan,Jilin Province,134300 China

Objective To study the clinical effect of nucleic acid detection and enzyme-linked immunosorbent assay for blood virus.Methods 500 cases of blood samples in the department of clinical laboratory in our blood station from July 2013 to July 2016 were selected as the research objects and tested by the nucleic acid and enzyme-linked immunosorbent assay,and the positive rate of two test methods was calculated and compared.Results In the test of HBV,the difference in the positive rate between the nucleic acid detection and enzyme-linked immunosorbent assay had statistical significance, [3.0%(15/500)vs 1.2%(6/500)]（P<0.05）,in the test of HCV,the difference in the positive rate between the nucleic acid detection and enzyme-linked immunosorbent assay had no statistical significance[1.8%(9/500)vs 1.6%(8/500)]（P>0.05）,and the difference in the positive rate of HIV between the nucleic acid detection and enzyme-linked immunosorbent assay had statistical significance[0.4%(2/500)vs 1.8%(9/500)](P<0.05).Conclusion In the test of blood virus,the nucleic acid detection and enzyme-linked immunosorbent assay each have advantages and have a certain complementarity,therefore,we can use the two at the same time to improve the accuracy of the blood virus test according to the actual condition.

Blood virus;Nucleic acid detection;Enzyme-linked immunosorbent assay

R7

A

1672-5654（2016）11（a）-0045-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.31.045

李玉泉（1968.2-），女，吉林白山人，本科，研究方向：血站檢驗(yàn)。

（2016-08-03）