兔出血癥病毒新毒株RHDV2的流行與控制綜述

王芳+陳萌萌+宋艷華+范志宇+胡波+魏后軍+仇汝龍+徐為中+薛家賓

摘要：兔出血癥病毒（RHDV）可引起兔病毒性出血癥（RHD）。RHD是一種急烈性、高度致死性兔傳染病，給家兔養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。2010年，研究人員在法國兔場發(fā)現(xiàn)一種新型兔出血癥病毒RHDV2。與經(jīng)典RHDV不同，該毒株能夠感染幼齡家兔，甚至跨物種感染野兔，并突破經(jīng)典RHDV疫苗的免疫防線，迅速在世界范圍內(nèi)流行。目前我國還未有RHDV2的報(bào)道，但隨時(shí)面臨發(fā)生該疫情的風(fēng)險(xiǎn)。本文綜述RHDV2的病原學(xué)、流行病學(xué)特征、臨床癥狀、診斷和防控等方面的研究進(jìn)展，旨在提高對RHDV2的認(rèn)識(shí)，加強(qiáng)對RHDV2的監(jiān)測，提前做好防控措施。

關(guān)鍵詞：兔出血癥病毒；新毒株；跨物種；風(fēng)險(xiǎn)；防控

中圖分類號(hào)： S852.65 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2016）09-0001-03

兔出血癥病毒（rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV）感染家兔可引起兔病毒性出血癥（rabbit hemorrhagic disease，RHD），俗稱兔瘟，該病傳染性強(qiáng)、死亡率高，是一種以急性肝壞死為主要特征的烈性傳染病，嚴(yán)重危害我國養(yǎng)兔業(yè)。 RHDV一般感染成年家兔，屬于杯狀病毒科兔病毒屬，該屬的成員還有歐洲野兔綜合癥病毒（European brown hare syndrome virus，EBHSV）和非致病性兔類病毒（non-pathogenic lagovirus，NP-LV）[1]。NP-LV包含非致病性的兔杯狀病毒（rabbit calicivirus，RCV）[2]和一些類似RCV或在系統(tǒng)發(fā)育上與RCV接近的兔杯狀病毒，如MRCV株[3]。1984年，該病最先在中國公開報(bào)道[4]，其后，1986年在歐洲意大利暴發(fā)[5-6]，并以此為源頭傳遍整個(gè)歐洲并波及全球。

從首次報(bào)道RHDV到現(xiàn)在的30年里，RHDV持續(xù)發(fā)生遺傳變異。1998年Capucci等報(bào)道了RHDV發(fā)生抗原變異，并將變異株命名為RHDVa[7]，次年，德國也報(bào)道了該變異株[8]。研究者們根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，將RHDV毒株分為不同的基因組（分別命名為G1～G6，G6也稱RHDVa）[9]。然而2010年，le Gall-Recule等在法國兔場發(fā)現(xiàn)了1株兔出血癥病毒新毒株，命名為RHDVb或RHDV2。該變異毒株RHDV2與經(jīng)典的G1～G6型在遺傳特性上有很大的差異，免疫經(jīng)典毒株RHDV不能產(chǎn)生很好的交叉免疫保護(hù)作用，導(dǎo)致RHDV2在家兔和野兔中跨物種傳播[5]。在接下來的幾年里，該毒株蔓延到意大利[6]、西班牙[10]、葡萄牙[11]、英格蘭和威爾士[12]、蘇格蘭[13]、德國[14]，并于2014年年底和2015年年初在歐洲大陸以外的亞速爾群島被檢測到[14]，RHDV2取代經(jīng)典RHDV的趨勢正在擴(kuò)大。2015年，Hall等報(bào)道在澳大利亞首都直轄區(qū)也檢測到RHDV2，該毒株與葡萄牙和亞速爾群島報(bào)道的變異毒株類似[15]。2016年，Martin-Alonso等指出RHDV2很有可能會(huì)從加那利群島傳播至非洲北部[16]。由此可見，RHDV2的流行趨勢正在世界范圍內(nèi)逐步擴(kuò)大。雖然迄今為止在中國還未有檢測到該毒株的報(bào)道，但是隨時(shí)面臨發(fā)生該疫情的風(fēng)險(xiǎn)。因此，我們應(yīng)該加強(qiáng)對變異毒株RHDV2的認(rèn)識(shí)，把握國內(nèi)流行情況，提前做好防范措施。

1 病原特性

RHDV2是單股正鏈RNA病毒，無囊膜，呈正二十面體對稱結(jié)構(gòu)，直徑為32～44 nm。RHDV2的全序列已提交至GenBank，并命名為RHDV-N11，基因全長7 447 bp，5′非編碼區(qū)9 nt，3′非編碼區(qū)69 nt長于經(jīng)典RHDV。RHDV2基因組包含2個(gè)開放閱讀框（ORF1和ORF2）。ORF1（10～7 044 bp）的翻譯產(chǎn)物經(jīng)過加工切割后至少形成8個(gè)成熟的蛋白質(zhì)分子，分別是非結(jié)構(gòu)蛋白NSP1（2A）、NSP2（2B）、NSP3（2C核苷酸水解酶）、NSP4（3A）、NSP5（3B VPg）、NSP6（3C 蛋白酶）、NSP7（3D RNA復(fù)制酶）和衣殼蛋白VP1[17]。

RHDV2和RHDV同屬于杯狀病毒科兔病毒屬成員，RHDV2與高致病性RHDV一樣，可引起家兔病毒性出血癥。兩者的基因同源性雖然高達(dá)82.4%[5]，但是系統(tǒng)發(fā)生樹分析結(jié)果表明RHDV2與引起相同癥狀的RHDV親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，而與非致病性的RCV親緣關(guān)系更近[6]。因此研究者推測，RHDV2很可能是從非致病的兔病毒屬成員演變而來的。另外，毒力差異分析表明RHDV2對野兔的感染率和致死率明顯低于家兔[18]，這可能是因?yàn)榧彝檬荝HDV2的天然宿主。

2 流行病學(xué)特征

易感動(dòng)物：與經(jīng)典RHDV只感染成年家兔不同，RHDV2感染宿主范圍更廣，不但能夠感染成年家兔，還能感染幼齡家兔以及歐洲野兔（Cape Hares 品種）[5]。RHDV2對各物種的感染敏感性不同，其中最易感的還是家兔，所以家兔應(yīng)該是RHDV2的天然宿主。

傳染源：感染RHDV2的兔是主要的傳染源，包括感染病死和帶毒未死的兔。

傳播途徑：杯狀病毒可通過受污染的水和食物經(jīng)糞-口傳播，病毒可以結(jié)合呼吸道和消化道上皮細(xì)胞HBGA受體進(jìn)入宿主身體。例如近來研究較透徹的杯狀病毒科人諾如病毒就是通過與HBGA結(jié)合之后進(jìn)入宿主體內(nèi)[19]。已有研究證明RHDV2可與HBGA的口袋位置P2區(qū)結(jié)合，這與諾如病毒GⅡ型結(jié)合HBGA的方式相似，然而RHDV結(jié)合的是HBGA的P1區(qū)[20]。這種不同的結(jié)合方式可能導(dǎo)致它們的易感宿主不完全相同。經(jīng)典RHDV可直接通過接觸感染動(dòng)物分泌物、排泄物，或間接通過污染的水、食物、飼養(yǎng)設(shè)備等造成感染[21]。目前關(guān)于新毒株RHDV2傳播途徑的報(bào)道很少，但可以肯定的是間接接觸在該毒株傳播過程中起著重要的作用。

3 臨床癥狀

與經(jīng)典毒株RHDV相同，RHDV2引起的兔病毒性出血癥以實(shí)質(zhì)器官出血、瘀血為主要特征。然而，RHDV2和RHDV引起的疾病癥狀在持續(xù)時(shí)間、死亡率和亞急性或慢性感染等方面都存在差異，其中亞急性和慢性感染較多地出現(xiàn)在RHDV2感染過程中[5]。在疾病病理方面，RHDV引起的病變已被詳細(xì)描述[22-23]，然而關(guān)于RHDV2感染后病變發(fā)展特點(diǎn)的研究資料仍然有限。尸檢RHDV2感染致死的兔發(fā)現(xiàn)在心臟、氣管、胸腺、肺、肝臟、腎臟和腸道等多處有出血現(xiàn)象（圖1-A）并伴有黃疸[10]。RHDV2感染的病理特征為胸腔和腹腔有豐富的血液樣滲出物，肝臟灰白腫大（圖1-B）[24]，肺臟出血，氣管充、出血，小腸腸道絨毛有局灶性壞死[10]。

4 診斷

RHDV的檢測方法主要包括臨床檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查[26]。一般先通過流行病學(xué)、臨床癥狀、剖檢病變等臨床檢查對發(fā)病癥狀進(jìn)行觀察，然后通過利用血凝、血凝抑制試驗(yàn)，ELISA 試驗(yàn)以及分子生物學(xué)等試驗(yàn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查來最終確診。

4.1 臨床觀察

尸檢病死兔，觀察有無兔出血癥的經(jīng)典癥狀：氣管彌漫性出血，鼻腔及氣管充滿血樣泡沫，肺腫大出血，腎瘀血并有出血點(diǎn)，心臟瘀血、心包膜有點(diǎn)狀出血，肝灰白腫大出血、脾臟腫大等。雖然RHDV與RHDV2感染的臨床特征可能不同，但病理特性很類似[5]，這給兩者的區(qū)分帶來一定困難，因此通過對發(fā)病癥狀的臨床觀察，僅能對疾病作出初步診斷，最終還是需要實(shí)驗(yàn)人員通過實(shí)驗(yàn)室分子生物學(xué)等技術(shù)手段來進(jìn)行確診。

4.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

近年來，隨著免疫學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)日臻完善，兔病毒性出血癥的診斷方法有了長足的發(fā)展，可通過血清學(xué)和分子生物學(xué)等方法很好地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。目前，較多采用快速且重復(fù)性好的間接ELISA法檢測RHDV，然而利用RHDV2的衣殼蛋白為包被抗原建立的ELISA檢測方法不能區(qū)分RHDV和RHDV2的感染，此方法還需要改進(jìn)[27]。近來研究人員已通過建立特異性探針實(shí)時(shí)定量PCR快速檢測RHDV2，該方法可用于鑒別診斷RHDV2，監(jiān)測病毒載量和疾病進(jìn)程，評(píng)價(jià)疫苗效果[27]。目前筆者所在實(shí)驗(yàn)室依據(jù)RHDV2衣殼蛋白的變異區(qū)已建立區(qū)分RHDV2與RHDV的RT-PCR法。盡管如此，目前針對RHDV2建立的檢測方法還很單一，仍需要研究者進(jìn)一步建立快速、有效、便捷的診斷方法。

5 防控

疫苗接種是防控該病的有效措施，然而經(jīng)典RHDV疫苗對RHDV2不能產(chǎn)生很好的交叉免疫保護(hù)，所以需要研發(fā)有效的疫苗來預(yù)防RHDV2引起的新型兔瘟的發(fā)生。近來，西班牙的Montbrau等研究報(bào)道了變異毒株RHDV2的滅活苗ERAVAC，并通過攻毒保護(hù)試驗(yàn)證明該疫苗安全有效[28]。另外，對該病的預(yù)防須考慮切斷傳播途徑，尤其是要注意RHDV2感染范圍廣，飼養(yǎng)過程中需避免與帶毒兔接觸。與此同時(shí)，科研人員應(yīng)加快RHDV2疫苗的研發(fā)。如果暴發(fā)新型兔瘟，應(yīng)采取緊急預(yù)防措施，如免疫滅活苗來控制疫情，防止該病的傳播。

6 結(jié)語

RHDV2自2010年首次在法國被報(bào)道以來，迅速從歐洲大陸傳播開來，逐步在世界范圍內(nèi)流行。RHDV2不僅傳播速度快、潛伏期長，而且感染宿主的范圍較經(jīng)典毒株更廣，因此該毒株一旦流行，將對養(yǎng)兔業(yè)產(chǎn)生十分嚴(yán)重的危害甚至?xí)斐蓺缧缘拇驌?。雖然我國目前還未見RHDV2的報(bào)道，但對該新毒株的關(guān)注不容忽視。當(dāng)下我們應(yīng)該建立快速、特異、靈敏的RHDV2診斷方法，全面掌握國內(nèi)RHDV毒株的流行情況。一旦發(fā)現(xiàn)RHDV2在中國流行，相關(guān)部門應(yīng)迅速采取措施，緊急防控，控制傳染源，切斷傳播途徑，避免傳播范圍的擴(kuò)大，減少兔場的經(jīng)濟(jì)損失，保障養(yǎng)兔業(yè)健康發(fā)展。

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