李仕偉，林艷麗，瞿 衛(wèi)，王自正

（南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院 南京臨床核醫(yī)學(xué)中心，江蘇 南京210006）

·研究報(bào)告·

探討EB病毒抗體對鼻咽癌篩查和療效的臨床價(jià)值

李仕偉，林艷麗，瞿 衛(wèi)，王自正

（南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院 南京臨床核醫(yī)學(xué)中心，江蘇 南京210006）

鼻咽癌； EB病毒； VCA-IgA； EA-IgG； NA1-IgA

EB病毒（epstein-barr virus，EBV）屬皰疹病毒科，為線形雙鏈DNA病毒，人類是 EBV唯一天然宿主。EBV在口咽部上皮細(xì)胞內(nèi)增殖，然后感染淋巴細(xì)胞。據(jù)報(bào)道，我國95%以上人群在3～5歲時(shí)已感染了EBV［1］。這些被感染的B淋巴細(xì)胞大量進(jìn)入血液循環(huán)而造成全身性感染，并可長期潛伏在人體淋巴組織中，當(dāng)機(jī)體免疫功能低下時(shí)，潛伏的 EBV活化形成復(fù)發(fā)感染。鼻咽癌與 EBV感染的關(guān)系十分密切，絕大多數(shù)鼻咽癌患者中均具有較高的抗EBV抗原的抗體［2］。故我們檢測 EBV相關(guān)抗原的抗體（VCA-IgA、EA-IgG和NA1-IgA）對鼻咽癌患者和正常人組進(jìn)行檢測，其結(jié)果如下：

資料與方法

1 一般資料

收集2014年3月至2015年6月對已確診鼻咽癌患者59例，其中（男45例，女19例），年齡37～75歲。采用鼻咽癌2008分期以鼻咽鏡活檢鼻咽組織明確病理檢查結(jié)果為診斷依據(jù)，鼻咽癌 EBV攜帶者以抽血血清中的抗體陽性為確診依據(jù)，具體標(biāo)準(zhǔn)：VCA-IgA、EA-IgG和NA1-IgA稀釋度1∶10。并在治療后進(jìn)行三項(xiàng)抗體復(fù)查。同期體檢健康者 50例為照組，男34例，女16例；年齡22～70歲。

2 方法

采用酶聯(lián)免疫法。VCA-IgA、EA-IgG和NA1-IgA的測定實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，放置室內(nèi)溫（18～25℃）平衡30分鐘，取1包洗液用500mL純化水溶解后備用，將恒溫箱或水浴箱設(shè)備溫度調(diào)整37℃，待溫度穩(wěn)定后使用。實(shí)驗(yàn)步驟：取出一定量的包被孔，編號。設(shè)空白對照1孔、陰性和陽性對照各 2孔，用微量加樣器加入陰性對照和陽性對照各 100μL／孔，其余孔加入樣品稀釋液100μL，再分別加入10μL待檢樣本，置37℃溫育30分鐘。洗板6次。最后在吸水紙上拍干。每孔加入酶結(jié)合物100 μL（空白孔不加），貼上板貼。置37℃溫育 20分鐘。再洗板 6次，最后在加入底物液、顯色液各 50μL，輕輕混勻，置 37℃避光反應(yīng) 10分鐘，每孔加入終止液50μL，振蕩混勻后立即測試結(jié)果。用 BIO-RAD MOGEL680酶聯(lián)免疫分析儀450nm單波長檢測或用450／（620～630）nm雙波長測定各孔的吸光值。依據(jù)試劑盒說明書，VCA-IgA、EA-IgG和 NA1-IgA有效判斷：陰性對照 OD值不高于0.12，陽性對照不低于0.400。CUT OFF值 ＝0.1＋陰性對照平均OD值（該值不足0.05時(shí)，按0.05計(jì)算）。樣本OD值大于CUT OFF值為陽性，否則為陰性。

3 統(tǒng)計(jì)分析

結(jié) 果

59例鼻咽癌患者 EB病毒抗體三項(xiàng)檢測結(jié)果比較見表1。

表1 59例鼻咽癌患者 EB病毒抗體三項(xiàng)檢測結(jié)果與正常對照組比較（±s）

表1 59例鼻咽癌患者 EB病毒抗體三項(xiàng)檢測結(jié)果與正常對照組比較（±s）

注：治療前與正常人比較，P＜0.01；治療前與治療后比較，P＞0.05

項(xiàng)目 正常人 治療前治療后1月 3月 6月VCA-IgA 0.024±0.014 2.141±0.041 1.894±0.06 4 1.07±0.023 1.092±0.014 5 1.784±0.021 1.784±0.021 EA-IgG 0.023±0.017 2.014±0.312 1.845±0.210 1.891±0.121 1.715±0.019 NA1-IgA 0.025±0.019 1.347±0.061 1.121±0.03

討 論

WHO腫瘤分類將鼻咽癌分為三種類型：Ⅰ型鱗狀細(xì)胞癌、Ⅱ型為非角化癌、Ⅲ型為未分化癌。后兩者均可歸為未分化癌。其中，臨床上最常見是鱗狀細(xì)胞癌。

目前認(rèn)為有三個(gè)最主要的因素可能參與鼻咽癌的發(fā)生過程：①遺傳因素，如不正常的人類白細(xì)胞抗原（human leucocyte igen，HLA）基因；②病毒因素，如EB病毒早期感染和長期反復(fù)感染，導(dǎo)致鼻咽部上皮永生化，并使其進(jìn)一步惡化。③環(huán)境因素，吸煙等［3］，體外實(shí)驗(yàn)表明［4］，香煙煙霧提取物促進(jìn) EBV復(fù)制，吸煙不僅可以增加個(gè)人鼻咽癌患病率而且可以在健康男性的血清中參與 EBV的激活。

從表1中59例鼻咽癌患者檢測 EBV三項(xiàng)抗體研究表明，鼻咽癌患者同時(shí)伴有一種或多種的抗體存在，我們檢測EBV三項(xiàng)抗體中以VCA-IgA早期抗原免疫球蛋白A抗體（VCA-IgA）陽性率高達(dá)81.6%～93.0%，治療前與正常對照組50例檢測 EBV三項(xiàng)抗體OD值相比較（P＜0.01），治療后一月至半年，患者抗體的滴度雖有下降，但治療前與治療后比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明EBV血清學(xué)檢測不能準(zhǔn)確預(yù)測鼻咽癌患者的治療效果和預(yù)后。其原因是鼻咽癌患者雖經(jīng)治療，但有90%以上的人感染EBV病毒并且持續(xù)存在，這是因?yàn)?EBV可以在有免疫的機(jī)體內(nèi)通過相關(guān)免疫逃避作用機(jī)制而長期潛伏［5］。

綜上所述，EBV抗體三項(xiàng)可作鼻咽癌高危人群的早篩，當(dāng)血清學(xué)檢測呈陽性，觸診頸部淋巴結(jié)腫大由可疑是鼻咽癌，若發(fā)現(xiàn)臨床鼻咽鏡下有可疑變化，應(yīng)送病理科活檢，最好在鼻咽纖維鏡下作細(xì)致觀察，看有無微小病灶；若鼻咽鏡下無異常發(fā)現(xiàn)，但EBV血清學(xué)檢查滴度較高或抗體檢測陽性時(shí)，則應(yīng)定期隨防觀察，進(jìn)一步請?？漆t(yī)生檢查，早診斷、早治療，所以EB病毒的診斷鼻咽癌高危人群進(jìn)行定期篩查具有重要意義。

［1］蘇梨云.徐錦，孫家娥，等.EB病毒感染實(shí)驗(yàn)室診斷方法棎討.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2006，21（4）：513-516.

［2］Henle G，Henle W.Epstein-Barr virus-specific lgA serum antibodies as an outstanding feature of nasopharyngeal carcinoma.lnt J Cancer，1976，17：1.

［3］Chang E T，Adami H O.The enigmatic epidemiogy of nasophryngeal carcioma.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2006，15（10）：1766-1777.

［4］Xu F H，Xiong D，Xu Y F，et al An epidmiological and molecular study of the relationship between smoking，risk of nasopharyngeal carcinoma，and Epstein-Barr virus activation.J Nat Canc Inst，2012，104（18）：1396-1410.

［5］李群.EB病毒VCA-IgA和EA-IgA抗體與鼻咽癌診斷的關(guān)系.海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，13（2）：180-183.

（李 凌編輯）

10.11748／bjmy.issn.1006－1703.2016.01.034

2015-09-13；

2015-11-23

林艷麗