楊邵峰

(濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院，山東濟(jì)寧272002)

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胃癌組織TET2、ANXA2表達(dá)及意義

楊邵峰

(濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院，山東濟(jì)寧272002)

目的 探討TET癌基因家族成員2(TET2)、膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 取67例原發(fā)性胃癌患者術(shù)后癌組織標(biāo)本(病理組織檢查確診為胃腺癌)及其癌旁組織標(biāo)本(距離癌組織邊界>5 cm)。采用免疫組化法檢測(cè)TET2、ANXA2陽性表達(dá)率；分析癌組織TET2、ANXA2表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 胃癌及癌旁組織TET2陽性表達(dá)率分別為34.33%(23/67)、62.69%(42/67)，兩者比較P<0.05；ANXA2陽性表達(dá)率分別為67.15%(45/67)、31.34%(21/67)，兩者比較P<0.05。胃癌組織TET2、ANXA2陽性表達(dá)與分化程度、TNM分期有關(guān)(P均<0.05)，與患者性別、年齡、腫瘤直徑均無關(guān)(P均>0.05)。結(jié)論 胃癌組織中TET2表達(dá)降低、ANXA2表達(dá)升高，二者的表達(dá)變化參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

胃癌；TET癌基因家族成員2；膜聯(lián)蛋白A2

近年來流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，我國(guó)胃癌發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。胃癌的發(fā)生是一個(gè)多因素、多步驟的進(jìn)行性發(fā)展過程，涉及多種癌基因激活、染色體雜合缺失、抑癌基因失活等[1,2]。研究發(fā)現(xiàn)，TET癌基因家族成員2(TET2)、膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有一定相關(guān)性，但二者與胃癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系報(bào)道較少[3～6]。本研究探討胃癌組織TET2、ANXA2表達(dá)及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2014年9月～2015年9月濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院收治的原發(fā)性胃癌患者67例，均經(jīng)手術(shù)治療，術(shù)后病理組織檢查進(jìn)一步確診為胃腺癌。其中男43例、女24例，年齡30～78(54.72±7.48)歲；腫瘤直徑<5 cm 37例，≥5 cm 30例；組織分化程度為高分化10例，中分化21例，低分化36例；臨床分期Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期40例。術(shù)中分別取胃癌組織標(biāo)本及距離癌組織邊界>5 cm的癌旁組織標(biāo)本。

1.2 胃癌組織及癌旁組織TET2、ANXA2表達(dá)檢測(cè) 采用免疫組化法。胃癌和癌旁組織標(biāo)本均經(jīng)4%中性緩沖甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機(jī)切片，分別加入兔抗人TET2多克隆抗體、兔抗人ANXA2多克隆抗體(稀釋倍數(shù)均為1∶1 000)，進(jìn)行免疫組化染色，具體步驟參照試劑盒說明書。以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：TET2在胃癌組織中主要表達(dá)于細(xì)胞核，癌旁組織中主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，以出現(xiàn)棕黃色顆粒狀為陽性；ANXA2在胃癌組織中主要表達(dá)于細(xì)胞膜，癌旁組織中主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。在400倍光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)不同視野，判斷陽性表達(dá)細(xì)胞著色強(qiáng)度、計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞百分率。陽性表達(dá)細(xì)胞著色強(qiáng)度：無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細(xì)胞百分率：陽性細(xì)胞<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。以陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度與百分率的乘積判斷結(jié)果，>1為陽性，≤1為陰性。

1.3 相關(guān)性分析 采用Spearson相關(guān)分析法分析胃癌組織TET2、ANXA2表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，以及TET2、ANXA2表達(dá)的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用Fisher確切概率或χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌及癌旁組織TET2、ANXA2表達(dá) 胃癌組織TET2陽性表達(dá)率為34.33%(23/67)、ANXA2陽性表達(dá)率為67.15%(45/67)，癌旁組織分別為62.69%(42/67)、31.34%(21/67)，兩者比較P均<0.05。

2.2 胃癌組織TET2、ANXA2表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 胃癌組織TET2、ANXA2陽性表達(dá)與腫瘤分化程度、TNM分期均有關(guān)(P<0.05或<0.01)，與患者性別、年齡、腫瘤直徑均無關(guān)(P均>0.05)。見表1。

表1 胃癌組織TET2、ANXA2表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系(例)

2.3 胃癌組織中TET2與ANXA2表達(dá)的相關(guān)性 胃癌組織中TET2與ANXA2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.292，P<0.05)。

3 討論

近年來，表觀遺傳學(xué)修飾在胃癌發(fā)生過程中所扮演的角色逐漸成為研究的熱點(diǎn)。DNA胞嘧啶甲基化是表觀遺傳學(xué)的重要組成部分，在基因表達(dá)調(diào)節(jié)、X染色體失活、基因組印記和癌癥發(fā)生等方面均發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用[3]。TET蛋白家族具有調(diào)節(jié)DNA胞嘧啶甲基化的作用[4]。人TET蛋白家族共有3個(gè)成員，分別為TET1、TET2 和TET3。TET1主要在胎兒組織和干細(xì)胞中表達(dá)，TET2在造血系統(tǒng)中含量較高，TET3則在結(jié)腸和肌肉等組織中表達(dá)。有研究顯示，TET蛋白在肝癌、乳腺癌組織中表達(dá)缺失或下降[5]，其表達(dá)缺失或下降參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。在急性髓細(xì)胞樣真性紅細(xì)胞增多癥、原發(fā)性骨髓纖維化、骨髓增生異常綜合征、特發(fā)性血小板增多癥、急性髓細(xì)胞樣白血病患者機(jī)體內(nèi)均發(fā)現(xiàn)TET2基因突變[6,7]。小鼠TET2基因表達(dá)下調(diào)可導(dǎo)致造血前體細(xì)胞向單核細(xì)胞/巨嗜細(xì)胞分化過程受阻，提示TET2是一種骨髓生成必需因子，其突變?cè)斐擅富钚云茐?，?dǎo)致骨髓生成異常而引發(fā)腫瘤[8]。上述研究結(jié)果提示，TET蛋白可能一方面通過基因突變等本身結(jié)構(gòu)改變影響其在腫瘤中的表達(dá)；另一方面，可能通過調(diào)控DNA甲基化/去甲基化循環(huán)而發(fā)揮抑癌基因的作用。

膜聯(lián)蛋白(ANX)是一類在進(jìn)化上保守的鈣依賴性磷脂結(jié)合蛋白超家族，ANXA2是其中重要一員，全長(zhǎng)14 000 bp，編碼339個(gè)氨基酸，定位于人染色體15q21-q22，由13個(gè)外顯子和12個(gè)內(nèi)含子組成[9]。ANXA2廣泛表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中，參與細(xì)胞增殖、分化、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、胞吞胞吐作用、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)以及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)遷移等多種生物學(xué)行為[10]。研究發(fā)現(xiàn)，在不同腫瘤組織中ANXA2表達(dá)不盡相同，提示在不同腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中ANXA2可能發(fā)揮不同作用。張彩霞等[11]研究結(jié)果顯示，敲除ANXA2基因可抑制人結(jié)直腸癌細(xì)胞系caco2細(xì)胞的增殖與遷移能力，提示ANXA2在人結(jié)直腸癌發(fā)展過程中發(fā)揮癌基因作用。Zhong等[12]報(bào)道，在口腔上皮鱗狀細(xì)胞癌組織中ANXA2蛋白表達(dá)上調(diào)，且與腫瘤臨床分期呈負(fù)相關(guān)。Feng等[13]報(bào)道，食管癌組織ANXA2表達(dá)低于癌旁正常組織，且其表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤組織分化程度相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，TET2在胃癌組織中的陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織，ANXA2在胃癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，二者表達(dá)變化均與腫瘤分化程度、TNM分期有關(guān)，且胃癌組織中TET2與ANXA2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示TET2表達(dá)降低、ANXA2表達(dá)升高參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展；但兩種因子的作用機(jī)制及二者內(nèi)部之間的聯(lián)系機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

綜上所述，胃癌組織中TET2表達(dá)降低、ANXA2表達(dá)增加，二者的表達(dá)變化參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

[1] 石巖巖,丁士剛.胃癌病因及發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中華臨床醫(yī)師雜志(電子版),2013,9(17):19-20.

[2] 王吉恒,張占東,孔燁,等.胃癌相關(guān)基因的研究進(jìn)展[J].河南醫(yī)學(xué)研究,2013,17(1):147-150.

[3] Dahl C, Grnbk K, Guldberg P. Advances in DNA methylation: 5-hydroxymethylcytosine revisited[J]. Clin Chim Acta, 2011,412(11-12):831-836.

[4] Loenarz C, Schofield CJ. Oxygenase catalyzed 5-methylcytosine Hydroxylation[J]. Chem Biol, 2009,16(6):580-583.

[5] 郭嚴(yán),王斌,王軍,等.TET蛋白家族和5-羥甲基胞嘧啶在腫瘤發(fā)病中的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2015,21(6):1013-1015.

[6] 吳怡晨,凌志強(qiáng).TET家族DNA羥化酶與5-hmC在腫瘤中的作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào),2013,35(12):1806-1812.

[7] 王娜娜,王建業(yè),史曉紅,等.TET2 LMTK2和FAM84B基因與前列腺癌的關(guān)系[J].中華腫瘤雜志,2013,35(4):262-267.

[8] Ko M, Huang Y, Jankowska AM, et al. Impaired hydroxylation of 5-methylcytosine in myeloid cancers with mutant TET2[J]. Nature, 2010,468(7325):839-843.

[9] 謝蕊,李燕京,隋紅,等.ANXA2調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[J].臨床與病理雜志,2015,35(13):78-79.

[10] 張志棟,李勇,趙群,等.胃癌組織膜聯(lián)蛋白A2表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2015,52(10):2542-2545.

[11] 張彩霞,武浩杰,奉艷,等.ANXA2對(duì)人結(jié)直腸癌caco2細(xì)胞行為及細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)[J].中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào),2013,35(12):1741-1747.

[12] Zhong LP, Wei KJ, Yang X, et al. Increased expression of Annexin A2 in oral squamous cell carcinoma[J]. Arch Oral Binl, 2009,54(1):17-25.

[13] Feng JG, Liu Q, Qin X, et al. Clinicopathological pattern and Annexin A2 and Cd042 status in patients presenting with differentiation and lymphnode metastasis of esophageal squamous cell carcinomas[J]. Mol Binl Rep, 2012,39(2):1267-1274.

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.36.031

R735.2

B

1002-266X(2016)36-0088-03

2016-04-06)