韓 麗 白 樺 王 磊 楊 佳 劉鈞天,4 王 晶 黃 暢劉耀萌 邢 敏 潘秀頡 趙百孝

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)養(yǎng)生研究所,北京,100029; 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,北京,100029; 3 西安市中醫(yī)院,西安,710021; 4 北京中醫(yī)藥大學(xué)附屬護(hù)國寺中醫(yī)醫(yī)院,北京,100035; 5 世界中醫(yī)藥學(xué)會聯(lián)合會,北京,100101; 6 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,北京,100039)

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臨床診室濃度的艾煙暴露12周對Wistar雄性大鼠尿常規(guī)的影響

韓 麗1,2白 樺3王 磊2楊 佳2劉鈞天2,4王 晶5黃 暢2劉耀萌2邢 敏2潘秀頡6趙百孝2

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)養(yǎng)生研究所,北京,100029; 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,北京,100029; 3 西安市中醫(yī)院,西安,710021; 4 北京中醫(yī)藥大學(xué)附屬護(hù)國寺中醫(yī)醫(yī)院,北京,100035; 5 世界中醫(yī)藥學(xué)會聯(lián)合會,北京,100101; 6 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,北京,100039)

目的:觀察臨床診室濃度的艾煙暴露12周對Wistar雄性大鼠尿常規(guī)影響。方法:應(yīng)用全自動動式染毒柜,艾煙的濃度以遮光率SR表示。將Wistar雄性大鼠48只隨機分成4個艾煙濃度梯度組(n=12):對照組(C,SR 0%)、低濃度組(L,SR 0.4%)、中濃度組(M,SR 2%)、高濃度組(H SR 15%),分別為無艾煙組,1,3，9倍于臨床濃度艾煙組。暴露200 min/d,5 d/周,連續(xù)暴露12周。應(yīng)用尿干化學(xué)分析法檢測大鼠尿常規(guī)等指標(biāo)。結(jié)果:艾煙暴露各組尿的顏色、SG、PRO、GLU、BLD、URO和BIL檢查等均未見顯著改變(P>0.05)。結(jié)論:臨床診室濃度的艾煙暴露未對雄性大鼠尿常規(guī)指標(biāo)產(chǎn)生毒性影響。

艾煙;艾灸;遮光率;尿常規(guī);尿

灸法是一種中醫(yī)傳統(tǒng)療法,常與針刺一起使用,合稱“針灸”。艾灸是應(yīng)用點燃后的艾絨在體表一定的部位進(jìn)行燒、灼、熏,給人體以溫?zé)?、藥物刺激作?以防治疾病,具有確切療效[1-5]。艾煙作為具有特殊的芳香氣味的艾灸生成物,具有多種生物活性[6-10],已成為艾灸啟效的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。隨著人們對環(huán)境中霧霾的毒性的研究深入,艾煙是否安全漸漸引起爭議。由于艾煙暴露引起的毒性問題和艾灸環(huán)境中空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的缺乏,我們進(jìn)行了此項研究。尿常規(guī)是醫(yī)學(xué)檢驗“三大常規(guī)”項目之一,是很多疾病的輔助性檢驗。尿常規(guī)主要對肝、腎和胰島功能損害有一定的參考價值,本研究觀察了臨床濃度的艾煙暴露12周對雄性大鼠尿常規(guī)的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 Wistar大鼠48只,雄性,體質(zhì)量50～70 g,購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司(動物許可證號:SCXK-(京)2012-0001)。所有大鼠均用標(biāo)準(zhǔn)動物飼料喂養(yǎng),自由進(jìn)水,飼養(yǎng)環(huán)境溫度(22±2)℃,相對濕度50%～60%,保持12 h光照(8:00至20:00)和12 h黑暗(20:00至次日8:00)交替循環(huán)。大鼠先適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。按隨機數(shù)字表法將其隨機分為空白組、低濃度組、中濃度組和高濃度組,每組8只,濃度分別為0、0.4%、2%和15%。實驗過程中對動物的處置符合2006年國家科技部發(fā)布的《關(guān)于善待實驗動物的指導(dǎo)性意見》的規(guī)定。

1.2 主要實驗材料、儀器及試劑 3年陳艾條(規(guī)格:18 mm×200 mm,河南南陽漢醫(yī)艾絨有限公司);動式染毒柜(Hope-MED 8050,天津開發(fā)區(qū)合普工貿(mào)有限公司,L=95 cm,艾煙濃度用遮光率表示,濃度越低,遮光率越低);P-5L2C型便攜式數(shù)字微電腦粉塵儀(北京賓達(dá)綠創(chuàng)科技有限公司)。

1.3 實驗方法 本課題組前期對京津地區(qū)的艾灸診室內(nèi)艾煙的濃度進(jìn)行抽樣調(diào)查[11],參照抽樣濃度設(shè)置1、3、9倍于臨床濃度的艾煙,進(jìn)行試驗。試驗前,采用自動動式染毒裝置Hope-MED 8050,分別檢測不同倍數(shù)的臨床艾煙濃度對應(yīng)的遮光率值,并以此遮光率設(shè)置不同的艾煙濃度梯度,分別為低劑量組L 0.4%,中劑量組M 2%,高劑量組H 15%。對照組C 0%暴露于同一房間的空氣。暴露方法:全自動染毒柜啟動后,設(shè)置相應(yīng)的環(huán)境參數(shù)值,待艾煙濃度穩(wěn)定后一次性放入整組大鼠,每組12只,待濃度再次達(dá)到穩(wěn)定后開始計時(L和M組大約需要10 s,H組需要1 min左右),計時200 min,艾煙暴露期間大鼠自由食水。濃度設(shè)置如下,染毒柜內(nèi)環(huán)境控制:溫度控制在(24±0.2)℃,氧氣濃度保持在(21±0.2)%,200 min/d,共12周。操作順序:空白組C-低劑量組L-中劑量組M-高劑量組H。

1.4 標(biāo)本采集與指標(biāo)檢測 12周干預(yù)結(jié)束后,大鼠單籠飼養(yǎng)于大鼠代謝籠(大鼠代謝籠由鼠籠、籠內(nèi)糞便隔離層、隔離層下層濾網(wǎng)、接尿漏斗以及套在接尿漏斗口的50 mL的潔凈的EP管組成)內(nèi)24 h,在此期間大鼠尿液經(jīng)大鼠代謝籠糞便層的濾網(wǎng)向下流,經(jīng)接尿漏斗,最終收集在50 mL的潔凈的EP管內(nèi)。尿液收集后送中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗科,采用尿干試紙法檢測,尿檢項目包括:URO:Urbilinogen，BIL：Bilirubin，KET：Ketonebody，BLD：Blood，PRO：Protein，NIT：Nitrite，WBC：White Blood Cell Count，GLU:Glucose，pH：pH Value，SG：Specific Gravity.

2 結(jié)果

經(jīng)臨床濃度的艾煙12周暴露后,雄性Wistat大鼠的尿常規(guī)檢測結(jié)果見表1,從表中可見雄性大鼠的尿膽原(Urbilinogen URO),膽紅素(Bilirubin BIL),酮體(Ketonebody KET),潛血(Blood BLD)，尿蛋白(Protein PRO)，亞硝酸鹽(Nitrite NIT),白細(xì)胞計數(shù)(White Blood Cell Count WBC),維生素C(Vitamin Vit C),尿比重(Specific Gravity SG)等均未見顯著改變。M組尿液的酸堿度(pH Value pH)(7.6±0.7)較對照組(8.4±0.2)有顯著改變(P<0.01),未見劑量反應(yīng)關(guān)系,參數(shù)的變化在正常的生理波動值范圍內(nèi)(pH:4.5～8.0)。綜上,1、3、9倍于臨床濃度的艾煙暴露12周未對雄性大鼠的尿常規(guī)產(chǎn)生明顯的毒性影響。

表1 臨床診室濃度的艾煙暴露12周后

注：與對照組比較*P<0.01。

3 討論

艾灸自古沿用至今,并已經(jīng)推廣至海外。艾煙作為艾燃燒生成物與香煙、棉花等其他材料燃燒所產(chǎn)生的煙氣的成分不同,效果[12]也有所不同,其中含有大量小分子芳香烴類化合物[13],部分成分已證明具有殺菌[14]、抗炎[15]和抗氧化梅[16]損傷等作用,可能為艾煙作用的活性物質(zhì)。這提示艾絨作為灸材具有一定的不可替代性。臨床艾灸環(huán)境下艾煙濃度升高直接造成可吸入顆粒物水平的升高,使得艾煙安全性問題一再受到爭議。

本研究通過觀察暴露于不同倍數(shù)于臨床濃度艾煙中雄性Wistar大鼠尿常規(guī)指標(biāo)變化,在一定程度上為臨床診室是否安全提供參考。尿常規(guī)檢查項目。見表1。主要對肝、腎和胰島功能損害有一定的參考價值,是毒理學(xué)觀察中常用的指標(biāo),也是臨床的基礎(chǔ)檢查之一,同樣是國標(biāo)煙氣吸入實驗毒性觀察的必備指標(biāo)[18]。不少腎臟病變在早期就會出現(xiàn)PRO,因此一旦發(fā)現(xiàn)尿異常,常是腎臟或尿路疾病的第一個指征。尿中如果出現(xiàn)大量紅細(xì)胞、大量白細(xì)胞或亞硝酸鹽為生殖感染疾病的征兆,其中亞硝酸鹽為細(xì)菌的還原產(chǎn)物;同時尿比重受年齡、飲水量和出汗的影響,尿比重的高低,可以看出生殖感染疾病中的某些信息;大鼠尿內(nèi)通常會有少量蛋白質(zhì),其中雄性更多一些。本研究結(jié)果提示1、3、9倍于臨床濃度的艾煙暴露12周未對雄性大鼠的尿常規(guī)產(chǎn)生明顯的毒性影響。

盡管如此,灸診室內(nèi)的可吸入顆粒物的質(zhì)量濃度也高于中國和WHO的規(guī)定[19]。以至于有文獻(xiàn)報道[20]通過對艾灸診室的醛類物質(zhì)的調(diào)查計算出艾灸的使用癌癥風(fēng)險提高,提示一定的健康威脅。前期本課題組進(jìn)行了艾灸場所可吸入顆粒物的理化特性[21]、質(zhì)粒DNA氧化損傷[19,22]的研究結(jié)果顯示,艾燃燒所產(chǎn)生的可吸入顆粒物具有低金屬離子含量、低氧化損傷等特點,與大氣環(huán)境中的可吸入顆粒物具有顯著不同。與此同時,本課題組前期采集艾煙中的可吸入顆粒成分,進(jìn)行的高濃度的艾致突變實驗[23-24],肯定了高濃度的艾煙染毒液的毒性。John Wheeler[25]利用國際組織中的標(biāo)準(zhǔn)條件的煙草測試實驗室,對艾煙進(jìn)行了預(yù)定的機組揮發(fā)物的檢測,并根據(jù)測試結(jié)果計算出短期和長期的染毒水平,認(rèn)為正常的操作條件下,不論是揮發(fā)物還是一氧化碳都不會帶來安全威脅;靳然等[13]采用固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(SPME-GC-MS)技術(shù)對艾煙進(jìn)行定性分析,發(fā)現(xiàn)艾煙中的多數(shù)成分可用于香精香料,有少數(shù)成分在高濃度時有一定的毒性,也證實John Wheeler的結(jié)論。許煥芳[17]研究發(fā)現(xiàn)一定濃度的艾燃燒生成物接觸一定的時間可以提高SAMP小鼠的抗氧化能力,提升SOD含量,減少自由基等代謝產(chǎn)物,從而起到顯著的抗衰老的作用。兩者的結(jié)論也是一致的,艾煙具有抗氧化性也得到進(jìn)一步的論證。

因此,艾煙的毒性以及安全性均相對而言,本實驗條件下的艾煙對Wistar大鼠的尿常規(guī)未見明顯的毒性影響。把握更為準(zhǔn)確的艾煙的濃度是今后工作的方向,在艾煙濃度較高時進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪^濾或排風(fēng)設(shè)備是非常必要的。

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(2016-01-27收稿 責(zé)任編輯：王明)

The Effects of Twelve-week Moxa Smoke Exposure on Urinary Parameters in Male Wistar Rats

Han Li1，2，Bai Hua3，Wang Lei2，Yang Jia2，Liu Juntian2，4，Wang Jing5，Huang Chang2，Liu Yaomeng2，Xing Min2，Pan Xiujie6，Zhao Baixiao2

(1InstituteofHealthPreservingofTraditionalChineseMedicine,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China;2SchoolofAcupuncture-MoxibustionandTuinaDepartment,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China；3Xi′anTraditionalChineseMedicineHospital,Xi′an710021,China; 4HuguosiHospitaloftraditionalChineseMedicine,Beijing100035,China；5WorldFederationofChineseMedicineSocieties，Beijing100101，China；6ChineseMilitaryAcademyofMedicalSciences,Beijing100039,China)

Objective:To investigate the effects of the 12-week moxa smoke intervention on urinary parameters in Wistar rats.Methods:An automatic dynamic exposure device was applied for whole-body mode exposure.The moxa smoke concentration was represented by shading rate (SR:x %).Forty-eight male Wister rats were randomly divided into 4 groups (n=12/group):three moxa smoke groups according smoke concentrations (L 0.4%,M 2.0% and H 15%) and one control group (C).Three moxa smoke groups were respectively 1,3,and 9 times the clinical concentration.The exposure lasted for 12 weeks (200 min/d and 5 d/week).After the exposure,urine samples were tested by uric dry chemical analysis method.Results:Compared with C group,no statistically differences in the color,SG,PRO,GLU,BLD,URO,BIL were found in smoke-exposed groups (P>0.05).Conclusion:The 12-week moxa smoke exposure induced no smoke-related toxicity on urinary parameters in male Wistar rats.

Moxa Smoke; Moxibustion; Shading Rate; Urinary Parameters; Urine

國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(“973”計劃)項目(編號:2009CB522906);國家自然科學(xué)基金項目(編號:81373730;81403449;81574068);國家國際科技合作專項項目(編號:2011DFA31370)

R245.81

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.10.047