CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)在重癥肺炎患者中表達的意義

向 娟，吳佳妮，唐 兵

（成都市第六人民醫(yī)院重癥醫(yī)學科，四川成都610051）

CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)在重癥肺炎患者中表達的意義

向 娟，吳佳妮，唐 兵

（成都市第六人民醫(yī)院重癥醫(yī)學科，四川成都610051）

目的 探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)在重癥肺炎患者中表達的意義。方法 收集2013年5月至2015年10月我院診斷為肺炎的患者，共計80例，進一步分為重癥肺炎組28例和肺炎組52例。對照組為同期健康體檢者，共50例。對比重癥肺炎組、肺炎組和對照組入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)水平，并且分析重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)水平。結果 ①重癥肺炎組、肺炎組和對照組入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞水平、MPV及PLT結果比較有差異（P＜0.05）；重癥肺炎組、肺炎組和對照組入院時PDW、PCT結果比較無差異（P＞0.05）。②重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞水平、MPV及PLT結果比較有差異（P＜0.05）；重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時PDW、PCT結果比較無差異（P＞0.05）。結論 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞、MPV及PLT可作為反應肺炎嚴重程度的敏感指標，并且可作為評價重癥肺炎患者預后的客觀指標。

CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞； 血小板參數(shù)； 重癥肺炎

肺炎是指終末氣道、肺泡及肺間質(zhì)的炎癥，可由病原微生物、理化因素、免疫損傷、過敏及藥物所致。美國疾病預防控制中心在2013年的一份報告中提示肺炎住院患者的病死率平均為12%，入住重癥監(jiān)護室者約40%［1］。而且隨著人口老齡化、吸煙、環(huán)境的變化，該比例仍居高不下。引起肺炎患者死亡的主要因素與免疫功能低下有關，此外大氣污染、生物因子也是誘因。臨床各科都可能會遇到重癥肺炎患者，如何評價患者的免疫功能，進行早期診斷及治療是本研究的問題。血小板參數(shù)主要包括平均血小板體積（MPV）、血小板壓積（PCT）、血小板分布寬度（PDW）、血小板計數(shù)（PLT）等指標，有學者對比了輕、重癥肺炎的血小板參數(shù)后發(fā)現(xiàn)，重癥肺炎的MPV、PCT、PDW、PLT升高更為顯著，可能與內(nèi)毒素誘發(fā)的骨髓代償性增生活力有關［2］。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞不同于以往的細胞亞群等，即總體上，他們主要執(zhí)行免疫負調(diào)控功能，很多實驗結果顯示CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞表達的下降有利于感染細胞的清除。還有研究發(fā)現(xiàn)50歲以上健康老年人組外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞比例高于健康成人組，可能與免疫衰老的發(fā)生有關［3］。因此本次研究擬收集2013年5月至2015年10月我院診斷為重癥肺炎的患者，探討 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性 T細胞及血小板參數(shù)在重癥肺炎患者中表達的意義。

材料和方法

1 病例選擇

收集2013年5月至2015年10月我院診斷為肺炎的患者，共計80例，進一步分為：28例重癥肺炎組和52例肺炎組。對照組為同期健康體檢者，共50例。重癥肺炎組平均年齡48.5±12.4歲，男性18例，女性10例；肺炎組平均年齡49.7±11.5歲，男性29例，女性23例；對照組平均年齡50.4±15.4歲，男性28例，女性22例，3組人員性別，年齡無差異。

2 入選標準

①重癥肺炎參考美國胸科協(xié)會及美國感染協(xié)會2007年制定的指南［2］；肺炎符合第8版《實用內(nèi)科學》制定的標準［2］。②自愿參加試驗。③無免疫抑制劑或激素使用史。

3 排除標準

①入院前服用過抗生素。②有其他系統(tǒng)感染性。③免疫功能低下、患有惡性腫瘤。④肺血栓栓塞、肺結核者。

4 檢測方法

血樣抽取后立刻派專人送檢進行檢查。

4.1 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞測定 ①抽取肘部靜脈血，EDTA抗凝，每個標本分為2管，分別標記為染色管和對照管。染色管加入CD4-PE和CD25-FITC各10μL，另一管加入 CD4-PE和Ig G1-FITC各10μL。②加溶血劑500μL，避光10min，加入PBS液500μL離心后，放入水浴箱靜置10min，放入流式細胞儀中。計算軟件為CXP-cytometer。

4.2 血小板參數(shù)檢測 使用全自動血細胞分析儀進行檢測：MPV、PCT、PDW、PLT。

5 評價方法

①對比重癥肺炎組、肺炎組和對照組入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)水平。②分析重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)水平。

6 統(tǒng)計學處理

結 果

1 重癥肺炎組、肺炎組和對照組入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)水平

重癥肺炎組、肺炎組和對照組入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞水平、MPV及PLT結果比較有差異（P＜0.05）；重癥肺炎組、肺炎組和對照組入院時PDW、PCT結果比較無差異（P＞0.05），見表1。

表1 重癥肺炎組、肺炎組和對照組入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)水平

2 重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)水平

重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞水平、MPV及PLT結果比較有差異（P＜0.05）；重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時PDW、PCT結果比較無差異（P＞0.05），見表2。

表2 重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)水平對比

討 論

1 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性細胞的來源及功能

調(diào)節(jié)性細胞包括CD4+CD25+細胞、Tr1和Th3等多種亞型，目前研究最為廣泛的為 CD4+CD25+調(diào)節(jié)細胞［3］。CD4+CD25+調(diào)節(jié)細胞分為自然型和誘導型，前者主要在胸腺內(nèi)發(fā)育，后者是在周圍受各種抗原反復刺激誘導下產(chǎn)生［4］。人類外周循環(huán)中CD4+CD25+調(diào)節(jié)細胞在維持機體免疫內(nèi)環(huán)境的起著重要作用，主要表現(xiàn)在免疫抑制和免疫無能性兩大功能特征。前者表現(xiàn)在調(diào)節(jié)性T細胞能夠抑制CD4+和CD8+細胞的活化和增殖，后者表現(xiàn)在各種刺激原均能刺激CD4+CD25+調(diào)節(jié)細胞的增生［5］。本研究我們發(fā)現(xiàn)重癥肺炎組、肺炎組和對照組入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞水平結果比較有差異（P＜0.05）。我們分析重癥肺炎患者入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性細胞數(shù)目增多與免疫功能受損、功能下降有關。還有學者對重癥肺炎患者進行自身對照研究，結果發(fā)現(xiàn)入院時患者 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性細胞數(shù)目明顯增高，患者在接受積極治療后，出院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性細胞數(shù)目明顯降低。

2 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性細胞與免疫的關系

CD4+CD25+調(diào)節(jié)細胞數(shù)量異?；蚬δ芪蓙y時會干擾機體的免疫力，使感染不能控制。有學者曾經(jīng)分析過健康人群外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)細胞時發(fā)現(xiàn)，老人外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)細胞呈增多趨勢［6］。因此推測CD4+CD25+調(diào)節(jié)細胞與免疫下降有關。本次研究發(fā)現(xiàn)重癥肺炎組、肺炎組和對照組入院時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞水平結果比較有差異，此外在重癥肺炎組死亡患者與存活患者中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞也存在差異。我們分析重癥肺炎患者體內(nèi)免疫力下降，造成感染持續(xù)不能得到有效控制。在免疫下降過程中，表現(xiàn)為炎癥抗原刺激后使記憶效應性細胞寡克隆擴增和胸腺萎縮。當機體受到病原微生物攻擊后，免疫反應不能有效地應答［7］。同樣還有學者［8］指出在重癥肺炎患者的胸腺細胞中存在CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的積聚現(xiàn)象，而患者在接受丙種球蛋白、粒細胞集落刺激因子等有效治療后，在出院時體內(nèi)循環(huán)的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞大幅度下降［9］。由于CD4+CD25+調(diào)節(jié)細胞在發(fā)生、表型、功能等方面均與小鼠體內(nèi)的CD4+CD25+T細胞很相似，有學者［10］通過敗血癥大鼠動物實驗模型發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+調(diào)節(jié)細胞在大鼠血及氣管黏膜中顯著增多，并且能夠分泌大量抑制性的細胞因子，抑制正常細胞的增殖，可能途徑是參與編碼轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的基因調(diào)控來抑制NK細胞、B細胞的活性［11］。

此外對于近幾年來許多研究表明肺癌、胰腺癌、胃癌、結腸癌等免疫低下患者中存在外周血和腫瘤浸潤部位的CD4+CD25+調(diào)節(jié)細胞大量累積現(xiàn)象［12］。還有學者［13］發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者外周血中的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞高于良性乳腺腫物患者和健康志愿者。此外CD4+CD25+調(diào)節(jié)細胞過高，會抑制抗腫瘤免疫，使機體容易催患腫瘤等疾病［14］。

3 正常血小板參數(shù)的意義

血小板指數(shù)包括MPV、PCT、PDW、PLT等4項指標。PLT是計數(shù)血小板的數(shù)量，反映血小板生成和衰亡的動態(tài)平衡。MPV代表平均血小板體積大小，主要反映骨髓中巨核細胞的增生、代謝及血小板的生成情況，反應血小板的超微結構及功能。PDW

代表血小板體積分布寬度，是血小板體積差異程度的一個參數(shù)［14］。PCT反映單位容積的全血中血小板體積所占的比例。

4 血小板參數(shù)與肺炎的關系

本次研究發(fā)現(xiàn)重癥肺炎組、肺炎組和對照組入院時MPV及PLT水平結果比較有差異，此外在重癥肺炎組死亡患者與存活患者中MPV及PLT也存在差異。重癥肺炎患者體內(nèi)感染嚴重，菌血癥、毒血癥使血小板破壞增多，并導致產(chǎn)血小板產(chǎn)物的代償性增多，此外感染也會刺激骨髓巨核細胞產(chǎn)生血小板過多［15］。因此重癥肺炎患者體內(nèi)PLT明顯高于肺炎組和對照組。還有學者指出重癥肺炎發(fā)生后，會造成毛細血管低氧狀態(tài)，使完整的血管內(nèi)皮受到破壞，使血小板易于黏附、聚集于血管粗糙的內(nèi)壁上，導致破壞加速，從而刺激骨髓巨核細胞的增生代謝及血小板生成，使外周循環(huán)池中產(chǎn)生大量新生血小板。而MPV與骨髓中巨核細胞的增生、代謝及血小板生成密切相關，MPV顯示外周循環(huán)池中單個血小板超微結構和功能狀態(tài)。即外周血血小板破壞增加后，骨髓發(fā)生代償功能，促進成熟的巨核細胞的胞質(zhì)轉(zhuǎn)化為血小板，在此過程中使平均MPV增大。還有研究［18］指出肺炎急性期時，會使肺血管內(nèi)皮細胞合成和釋放血小板活化因子，使血小板活化增強，過度激活，而大體積血小板比小體積血小板更容易被活化。還有學者指出肺炎時低氧，病原微生物及其毒素作為始動因子可引起機體的微血管內(nèi)皮損傷，激活在血小板聚集的過程中，會導致嚴重的肺循環(huán)障礙，甚至多器官功能衰竭，加重肺炎。本次研究發(fā)現(xiàn)重癥肺炎組死亡患者與存活患者MPV比較無差異，但是重癥肺炎組與對照組MPV之間有差異，我們分析可能與本研究樣本量過少，影響研究結果。

因此，本次研究認為CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞、MPV及PLT可作為反應肺炎嚴重程度的敏感指標，并且可作為評價重癥肺炎患者預后的客觀指標。

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（潘子昂編輯）

Expression of CD4+CD25+Regulatory T Cells and Platelet Parameters in Patients with Severe Pneumonia

XIANG Juan，WU Jia-ni，TANG Bing
（Department of Critical Medicine，Chengdu Sixth People’s Hospital，Chengdu 610051，China）

Objective To investigate the significance of CD4+CD25+regulatory T cells and platelet parameters in patients with severe pneumonia.Methods A total of 80 patients with pneumonia in our hospital from May 2013 to October 2015 were collected，and further divided into 28 cases of severe pneumonia group and 52 cases of pneumonia group.The control group had 50 cases from healthy physical examination during the same period.CD4+CD25+regulatory T cells and platelet parameters were compared and analyzed.Results①CD4+CD25+regulatory T cells，MPV and PLT were different among severe pneumonia group，pneumonia group and control group（P＜0.05）.PDW and PCT showed no difference among severe pneumonia group，pneumonia group and control group（P＜0.05）.②CD4+CD25+regulatory T cells，MPV and PLT were different between died patients and alive patients with severe pneumonia.There was no difference between PDW，PCT and MPV in patients with severe pneumonia（P＞0.05）.Conclusion The study suggests that CD4+CD25+regulatory T cells，MPV and PLT can be used as a sensitive indicator of the severity of the response in pneumonia，and they can be used as an objective index to evaluate the prognosis of patients with severe pneumonia.

CD4+CD25+regulatory T cells； Platelet parameters； Severe pneumonia

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.11.018

2016-06-16；

2016-07-19

向娟，女，碩士，主治醫(yī)師。Tel：15328006823