龔麗麗，張毫，謝斌，歐陽(yáng)昕，肖愛(ài)嬌△

熱敏灸對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠大腦皮質(zhì)CD11b表達(dá)的影響

龔麗麗1，張毫1，謝斌1，歐陽(yáng)昕2，肖愛(ài)嬌1△

目的制備局灶性腦缺血性再灌注損傷大鼠模型，觀察熱敏灸對(duì)模型大鼠大腦皮質(zhì)CD11b表達(dá)的影響。方法雄性SD大鼠51只，采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為假手術(shù)組（n=10）、模型組（n=14）、艾灸組（n=27）。艾灸組根據(jù)艾灸前后尾溫變化再分為非熱敏灸組（n=13）和熱敏灸組（n=14）。應(yīng)用線栓法制備局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠模型。采用神經(jīng)功能缺失評(píng)分法觀察大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)；光照測(cè)痛儀測(cè)定大鼠的甩尾潛伏期；TTC染色法觀察大鼠的腦梗死面積；免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大腦皮質(zhì)CD11b的表達(dá)。結(jié)果術(shù)后3 d時(shí)，非熱敏灸組（9.32±1.11）s與熱敏灸組（8.69±0.51）s大鼠甩尾潛伏期均明顯短于模型組（12.21±1.04）s，以熱敏灸組縮短更為明顯；非熱敏灸組（20.59±2.25）%和熱敏灸組（13.18±3.50）%大鼠腦梗死面積小于模型組（32.22±14.20）%，以熱敏灸組縮小更為明顯；非熱敏灸組（5.40±0.58）和熱敏灸組（2.89±0.71）大鼠大腦皮質(zhì)CD11b表達(dá)低于模型組（7.83±1.60），以熱敏灸組降低更為明顯。結(jié)論熱敏灸具有改善大鼠的感覺(jué)功能、減輕大鼠腦缺血再灌注損傷的作用，減少大腦皮質(zhì)CD11b的表達(dá)、減輕炎癥反應(yīng)可能是其作用機(jī)制之一。

艾炷灸；腦缺血；再灌注損傷；抗原，CD11b；大鼠，Sprague-Dawley；甩尾潛伏期

腦血管病（cerebrovascular disease，CVD）具有較高的發(fā)病率、死亡率和致殘率。在所有的腦血管病中，尤以缺血性腦血管病（ischemic cerebrovascular disease，ICVD）發(fā)病率最高，約占腦血管病總體發(fā)病率的60%～80%［1］，現(xiàn)臨床上一般采用溶栓療法［2］等血管再通技術(shù)使缺血性腦組織重新恢復(fù)血液灌注，有時(shí)反而可加重組織的功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷，即發(fā)生腦缺血再灌注損傷。研究表明，熱敏灸對(duì)多種疾病有良好的療效［3］，其治療缺血性腦卒中也取得了較好的效果［4］。本課題組前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示熱敏灸能夠縮小腦缺血再灌注損傷模型大鼠的腦梗死面積、減輕腦缺血再灌注損傷［5-8］。然而其作用機(jī)制尚不十分清楚。近年來(lái)，許多研究表明，炎癥反應(yīng)參與了腦缺血再灌注損傷的發(fā)病過(guò)程［8-9］。小膠質(zhì)細(xì)胞（Microglia）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要免疫細(xì)胞，CD11b是該細(xì)胞活化的重要標(biāo)志物。研究報(bào)道，腦缺血再灌注數(shù)小時(shí)后，缺血側(cè)CD11b陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)明顯增加［10-11］。那么，熱敏灸減輕腦缺血再灌注損傷是否通過(guò)降低大鼠腦缺血再灌注損傷模型腦組織中CD11b表達(dá)、減輕炎癥反應(yīng)起作用還不十分清楚。本研究在前期工作的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討熱敏灸減輕腦缺血再灌注損傷的作用機(jī)制，為熱敏灸用于臨床治療缺血性卒中提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物與分組清潔級(jí)SD大鼠51只，雄性，體質(zhì)量200～220 g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為假手術(shù)組（10只）、模型組（14只）和艾灸組（27只）。模型組：行大腦中動(dòng)脈栓塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）手術(shù)，2 h后行再灌注，術(shù)后單籠飼養(yǎng)。假手術(shù)組：同模型組，但不插栓線。艾灸組：在模型組基礎(chǔ)上于再灌注次日給予艾灸“大椎”治療，1次/d，35 min/次，共3 d。根據(jù)艾灸前后尾溫差，艾灸組大鼠再分為非熱敏灸組（艾灸前后尾溫差未滿足熱敏灸組條件者，13只）和熱敏灸組（艾灸后尾溫升高，與艾灸前尾溫差超過(guò)1℃，且3次測(cè)量中2次超過(guò)者，14只）。納入標(biāo)準(zhǔn)：再灌注即刻神經(jīng)功能缺失評(píng)分為1～3分以及再灌注72 h后仍存活者。

1.1.2 主要試劑與儀器CD11b抗體（ab75476，英國(guó)abcam公司），辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG（ZB-2301，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。鼠尾光照測(cè)痛儀（YLS-12A，濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司）；冰凍切片機(jī)（CM1950，德國(guó)Leica公司）；顯微鏡及圖像分析系統(tǒng)（Leica 2000，德國(guó)Leica公司）。

1.2 方法

1.2.1 局灶性腦缺血再灌注損傷模型的制備釆用10%的水合氯醛（3 mL/kg）進(jìn)行腹腔注射達(dá)到深度麻醉后，大鼠仰臥位固定，暴露頸部，剪去頸部鼠毛，用75%乙醇消毒，行頸部正中線2 cm左右切口，用血管鉗鈍性分離左側(cè)頸部肌肉及筋膜，分出左側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈及迷走神經(jīng)等，分別用手術(shù)絲線在左側(cè)頸總動(dòng)脈近心端，頸外動(dòng)脈分叉處予以結(jié)扎，靠近頸總動(dòng)脈分叉處繞線暫不結(jié)扎死。然后將頸內(nèi)動(dòng)脈用微動(dòng)脈夾夾閉，在頸總動(dòng)脈距離頸外動(dòng)脈分叉處2～3 mm用醫(yī)用眼科手術(shù)剪剪一斜形的切口，用眼科鑷將栓線朝頭部方向經(jīng)切口處緩慢插入栓線，并輕推栓線至微動(dòng)脈夾處，將事先準(zhǔn)備的絲線適度結(jié)扎以減少或避免出血，然后將微動(dòng)脈夾取下，用醫(yī)用眼科手術(shù)鑷將栓線緩慢插入頸內(nèi)動(dòng)脈，栓線進(jìn)入深度距頸總動(dòng)脈分叉處約為18～22 mm，將頸內(nèi)動(dòng)脈分叉處的手術(shù)線系緊。術(shù)后2 h進(jìn)行再灌注，即拔出一部分栓線，但不能完全拔出。

1.2.2 艾灸取穴與方法（1）穴位選擇：以針灸傳統(tǒng)理論為依據(jù)，“大椎”內(nèi)可通行督脈，外可流走于三陽(yáng)，除能調(diào)節(jié)本經(jīng)經(jīng)氣外，還可以調(diào)節(jié)六陽(yáng)經(jīng)經(jīng)氣，瀉之可清瀉諸陽(yáng)經(jīng)之邪熱盛實(shí)、通督解痙；補(bǔ)之可壯全身之陽(yáng)、固衛(wèi)安營(yíng)［12］，所以治療腦缺血再灌注損傷取治療穴“大椎”。（2）艾灸方法：用直徑0.4 cm，長(zhǎng)10 cm艾條，距大椎穴位約2 cm處溫和灸大鼠，1次/d，35 min/次，共3 d。

1.2.3 神經(jīng)功能缺失評(píng)分于再灌注后0 h，參考Longa等［13］的5分制法對(duì)各組大鼠進(jìn)行評(píng)分。0分：無(wú)神經(jīng)損傷癥狀，活動(dòng)正常。1分：不能完全伸展右側(cè)前爪。2分：向右側(cè)轉(zhuǎn)圈。3分：向右傾倒。4分：大鼠不能自發(fā)行走，意識(shí)喪失。分值越高，動(dòng)物行為障礙將越嚴(yán)重。

1.2.4 甩尾潛伏期測(cè)定于術(shù)后2 h、1 d、3 d使用鼠尾光照測(cè)痛儀進(jìn)行測(cè)定。其基本原理是將一束光照射到鼠尾某個(gè)部位上產(chǎn)生集熱效應(yīng)，使鼠尾局部溫度升高，當(dāng)溫度升到一定程度，而產(chǎn)生疼痛。但疼痛超過(guò)動(dòng)物能忍受的痛閾時(shí)，動(dòng)物就產(chǎn)生有效的甩尾逃避，以判斷艾灸對(duì)動(dòng)物痛閾的影響。對(duì)各組大鼠進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每只大鼠測(cè)2次，取平均值。

1.2.5 大腦皮質(zhì)CD11b蛋白表達(dá)檢測(cè)采用免疫組化法進(jìn)行檢測(cè)。于腦缺血再灌注后3 d，每組3只大鼠用10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射達(dá)到深度麻醉后在冰上取腦，分離左側(cè)大腦皮質(zhì)，切取小塊置于4%多聚甲醛溶液中后固定4～6 h，然后透明、浸蠟、包埋、切片。每只大鼠取1～2片、貼片、拷片、脫蠟、水化、PBS液清洗、抗原修復(fù)、封閉、滴加兔抗鼠CD11b抗體（1∶300）、PBS液清洗、滴加辣根酶標(biāo)記山羊抗兔（1∶500）、DAB顯色、蘇木精復(fù)染等，風(fēng)干，中性樹(shù)膠封片，顯微鏡觀察和拍照。圖中棕褐色為CD11b染色陽(yáng)性細(xì)胞，用IPP算出其平均光密度。

1.2.6 腦組織梗死檢查采用TTC染色進(jìn)行檢測(cè)。于腦缺血再灌注后3 d，每組剩余大鼠用10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射達(dá)到深度麻醉后在冰上取腦，將腦放-20℃冰箱冷凍20 min，以2 mm左右間隔自前額向枕后切成5個(gè)冠狀切片，然后將腦片放入1%TTC染液中，置于37℃恒溫箱中染色20 min，用甲醛溶液進(jìn)行固定后拍照，用IPP軟件計(jì)算腦梗死面積與全腦面積的百分比。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用Dunnett-t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 神經(jīng)功能缺失評(píng)分大腦中動(dòng)脈缺血再灌注后，模型組、非熱敏灸組和熱敏灸組大鼠均出現(xiàn)各種不同程度的神經(jīng)功能障礙，如提尾時(shí)大鼠的右側(cè)前肢不能伸展，行走時(shí)會(huì)向右側(cè)旋轉(zhuǎn)或傾倒等；其神經(jīng)功能缺失評(píng)分為1～3分。假手術(shù)組大鼠無(wú)神經(jīng)功能障礙表現(xiàn)，神經(jīng)功能缺失評(píng)分為0分，見(jiàn)表1。

Tab.1Neurologic deficit scores,percentage of infarct volume and CD11b expression in four groups of rats表1 各組大鼠神經(jīng)功能缺失評(píng)分、腦梗死面積百分比和CD11b表達(dá)結(jié)果

Tab.1Neurologic deficit scores,percentage of infarct volume and CD11b expression in four groups of rats表1 各組大鼠神經(jīng)功能缺失評(píng)分、腦梗死面積百分比和CD11b表達(dá)結(jié)果

＊＊P＜0.01；a與假手術(shù)組相比，b與模型組相比，c與非熱敏灸組相比，P＜0.05

組別假手術(shù)組模型組非熱敏灸組熱敏灸組F n 10 14 13 14神經(jīng)功能缺失評(píng)分（分）0 2.26±0.63a 2.29±0.74a 2.38±0.77a 39.647＊＊n7 1 1 10 11腦梗死面積百分比（%）0 32.22±14.20a 20.59±2.25ab 13.18±3.50abc 88.782＊＊n3 3 3 3 CD11b表達(dá)1.35±0.33 7.83±1.60a 5.40±0.58ab 2.89±0.71abc 258.267＊＊

2.2 熱敏灸對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠甩尾潛伏期的影響術(shù)后2 h時(shí)，與假手術(shù)組相比，模型組、非熱敏灸組和熱敏灸組大鼠的甩尾潛伏期延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；術(shù)后1 d時(shí)，各組大鼠甩尾潛伏期均有所縮短，但與假手術(shù)組相比，模型組、非熱敏灸組和熱敏灸組大鼠的甩尾潛伏期仍然較長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；術(shù)后3 d時(shí)，模型組的甩尾潛伏期明顯長(zhǎng)于假手術(shù)組，而非熱敏灸組與熱敏灸組大鼠甩尾潛伏期均明顯短于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

Tab.2Results of tail-flick latency in four groups of rats表2 各組大鼠甩尾反應(yīng)潛伏期結(jié)果（s，）

Tab.2Results of tail-flick latency in four groups of rats表2 各組大鼠甩尾反應(yīng)潛伏期結(jié)果（s，）

＊P＜0.05；a與假手術(shù)組相比，b與模型組相比，P＜0.05

組別假手術(shù)組模型組非熱敏灸組熱敏灸組F n 甩尾潛伏期10 14 13 14 2 h 3.90±0.57 13.03±2.10a13.09±0.90a12.52±0.71a10.382＊1 d 3.73±0.48 12.91±1.60a12.95±1.28a12.01±0.95a3.757＊3 d 3.97±0.80 12.21±1.04a9.32±1.11ab8.69±0.51ab2.821＊

2.3 熱敏灸對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠腦梗死面積的影響手術(shù)后3 d，假手術(shù)組大鼠腦組織全部染成紅色，無(wú)梗死灶；模型組、非熱敏灸組和熱敏灸組大鼠左側(cè)半球有白色梗死灶，其余部分呈紅色。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，非熱敏灸組和熱敏灸組腦梗死面積均較模型組縮小，尤以熱敏灸組縮小更為明顯，見(jiàn)表1、圖1。

Fig.1The infarct areas of rat brain detected by TTC staining圖1 各組大鼠腦組織TTC染色情況

2.4 熱敏灸對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠大腦皮質(zhì)CD11b表達(dá)的影響假手術(shù)組大鼠大腦皮質(zhì)CD11b表達(dá)較少；與假手術(shù)組相比，模型組CD11b表達(dá)增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，非熱敏灸組和熱敏灸組CD11b的表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與非熱敏灸組相比，熱敏灸組CD11b的表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1、圖2。

Fig.2The expression of CD11b protein in rat cortex detected by immunohistochemical staining圖2 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大腦皮質(zhì)CD11b的表達(dá)結(jié)果（比例尺=50 μm）

3 討論

熱敏灸療法是我校陳日新教授、主任中醫(yī)師歷經(jīng)多年的臨床實(shí)踐、科學(xué)研究基礎(chǔ)上首創(chuàng)的艾灸新療法［3］，大幅度提高了臨床灸療療效。臨床觀察發(fā)現(xiàn)，與傳統(tǒng)懸灸相比，熱敏灸的灸量不同［4］。傳統(tǒng)懸灸的灸量每次每穴一般為10～15 min，或者以局部皮膚潮紅為度，往往達(dá)不到治療個(gè)體化的最佳灸量；而熱敏灸通常需要較長(zhǎng)時(shí)間，一般為30～60 min。本課題組前期實(shí)驗(yàn)觀察到，艾灸“大椎”穴35 min能顯著縮短腦缺血再灌注損傷模型大鼠的甩尾潛伏期，縮小腦梗死面積，減輕腦缺血再灌注損傷，療效優(yōu)于艾灸“大椎”穴15 min［5-8］。

艾灸“大椎”穴35 min是否都可達(dá)到明顯的效果，都屬于熱敏灸？根據(jù)陳日新教授潛心二十多年的臨床研究結(jié)果，采用懸灸法灸熱敏穴位時(shí)可表現(xiàn)出以下6種灸感現(xiàn)象［3］：（1）透熱。即灸熱從施灸處表面透向深部組織甚至五臟六腑。（2）擴(kuò)熱。即灸熱由灸點(diǎn)向四周擴(kuò)散。（3）傳熱。即灸熱由灸點(diǎn)沿著某一條線路向遠(yuǎn)處甚至病所傳導(dǎo)。（4）局部不熱或微熱，遠(yuǎn)部熱。即灸點(diǎn)不熱或微熱，但離灸點(diǎn)遠(yuǎn)處熱。（5）表面不熱或微熱，深部熱。即灸點(diǎn)表面不熱或有微熱，但灸點(diǎn)皮下深部組織等有熱感。（6）產(chǎn)生其他非熱的感覺(jué)。即灸點(diǎn)或遠(yuǎn)離灸點(diǎn)處產(chǎn)生麻、酸、脹、痛等不是熱的感覺(jué)的奇異灸感現(xiàn)象。懸灸穴位產(chǎn)生上述1種或幾種灸感就稱(chēng)為熱敏穴位，同時(shí)這些灸感傳導(dǎo)之處，病癥將有所緩解。

為此，本文在前期實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)上，依據(jù)傳熱現(xiàn)象，根據(jù)艾灸前后尾溫差將艾灸組大鼠再分為非熱敏灸組與熱敏灸組，結(jié)果顯示，熱敏灸能顯著縮短腦缺血再灌注損傷模型大鼠的甩尾潛伏期，改善大鼠的感覺(jué)功能；縮小腦梗死面積，減輕腦缺血再灌注損傷，且療效優(yōu)于非熱敏灸。上述結(jié)果表明，艾灸非熱敏穴位能產(chǎn)生一定療效，但艾灸熱敏穴位療效比艾灸非熱敏穴位的療效好，與文獻(xiàn)［14］研究結(jié)果基本一致。那么，熱敏灸如何發(fā)揮減輕腦缺血再灌注損傷？

許多研究顯示，在腦缺血再灌注引起的腦組織損傷進(jìn)展過(guò)程中，有許多相互關(guān)聯(lián)的機(jī)制在起作用，涉及的主要病理生理過(guò)程很多，如興奮性毒性、炎癥、血管通透性改變、氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡等［15］。其中，炎癥反應(yīng)促進(jìn)了繼發(fā)性腦損傷的發(fā)生，是腦缺血再灌注損傷的主要原因之一［8-9,16］。炎性細(xì)胞浸潤(rùn)是炎癥反應(yīng)的重要特征，在炎癥反應(yīng)中起了十分重要的作用。這些炎性細(xì)胞（如小膠質(zhì)細(xì)胞、白細(xì)胞）在發(fā)揮吞噬作用、免疫作用的同時(shí)，向細(xì)胞外釋放大量氧自由基、細(xì)胞因子、溶酶體酶等炎癥介質(zhì)，加重腦組織損傷，引起腦缺血再灌注損傷。本課題組前期研究觀察到：大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注后3 d，患側(cè)腦組織中出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)［8-9］，表明炎癥反應(yīng)參與了腦缺血再灌注損傷的病理過(guò)程。

小膠質(zhì)細(xì)胞是腦內(nèi)特殊的免疫活性細(xì)胞，是巨噬細(xì)胞的一種。活化的巨噬細(xì)胞在病原體等刺激下，一方面可發(fā)揮抗感染免疫作用，另一方面也可產(chǎn)生大量促炎細(xì)胞因子和其他炎癥介質(zhì)，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。CD11b是小膠質(zhì)細(xì)胞活化的重要標(biāo)志物，有研究報(bào)道，腦缺血再灌注數(shù)小時(shí)后，缺血側(cè)CD11b陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)明顯增加［10-11］。本研究觀察到，腦缺血再灌注后3 d，患側(cè)大腦皮質(zhì)CD11b表達(dá)明顯增加，與上述研究結(jié)果基本一致，而經(jīng)艾灸治療后，患側(cè)大腦皮質(zhì)CD11b表達(dá)減少，以熱敏灸組減少更為顯著。上述研究結(jié)果提示，艾灸熱敏化“大椎”穴可能大大激發(fā)和調(diào)動(dòng)了機(jī)體自身的抗病能力，降低腦組織中CD11b的表達(dá)，減少小膠質(zhì)細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，減輕炎癥反應(yīng)，從而減輕腦缺血再灌注損傷。

［1］Durukan A，Tatlisumak T.Acute ischemic stroke：overview of major experimental rodent models，pathophysiology，and therapy of focal cerebral ischemia［J］.Pharmacol Biochem Behav，2007，87（1）：179-197.doi:10.1016/j.pbb.2007.04.015.

［2］The National Institute of Neurological disorder and stroke rt-PA Stroke Study Group.Tissue plasminogen activator for acute ischemic stroke［J］.N Engl J Med，1995，333（24）：1581-1587.doi: 10.1056/NEJM199512143332401.

［3］Chen RX，Kang MF.Heat-sensitive acupoints and new moxibustion therpy［M］.Beijing：People’s Medical Publishing House，2006：48.［陳日新，康明非.腧穴熱敏化艾灸新療法［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：48］.

［4］Chen RX，Chen MR，Kang MF.Practical Reading of HeatsensitizationMoxibustion［M］.Beijing：People’sMedical Publishing House，2009：95.［陳日新，陳明人，康明非.熱敏灸實(shí)驗(yàn)用讀本［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：95］.

［5］Xiao AJ，Kang MF，Chen RX，et al.Heat-sensitive moxibustion reduces cortical expressions of cytochrome C and Bax protein in rats with cerebral ischemia-reperfusion injury［J］.Lishizhen Medicine and Materia Medica Research，2014，25（1）：240-243.［肖愛(ài)嬌，康明非，陳日新，等.熱敏灸減少腦缺血再灌注損傷模型大鼠大腦皮質(zhì)細(xì)胞色素C與Bax蛋白的表達(dá)［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2014，25（1）：240-243］.doi:10.3969/j.issn.1008-0805.2014.01.105.

［6］Xiao AJ，Chen RX，Kang MF，et al.Effects of heat-sensitive moxibustion on antioxidative capacity in rat model of focal cerebral ischemia-reperfusion injury［J］.Tianjin Med J，2014，42（1）：51-53.［肖愛(ài)嬌，陳日新，康明非，等.熱敏灸對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠SOD、MDA的影響［J］.天津醫(yī)藥，2014，42（1）：51-53］.doi: 10.3969/j.issn.0253-9896.2014.01.016.

［7］Xiao AJ，Kang MF，Chen RX，et al.Effect of heat-sensitive moxibustion on tail-flick latency in rat models of focal cerebral ischemia-reperfusion injury［J］.Lishizhen Medicine and Materia Medica Research，2013，24（1）：228-230.［肖愛(ài)嬌，康明非，陳日新，等.熱敏灸對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠甩尾潛伏期的影響［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2013，24（1）：228-230］.doi:10.3969/j. issn.1008-0805.2013.01.105.

［8］Xiao AJ，Chen RX，Kang MF，et al.Heat-sensitive moxibustion attenuatestheinflammationafterfocalcerebralischemia/ reperfusion injury［J］.Neural Regen Res，2012，7（33）：2600-2606.doi:10.3969/j.issn.1673-5374.2012.33.005.

［9］Xiao AJ，Luo XQ.Effects of moxibustion on cortical expression of NF-кB p65 protein in rats with cerebral ischemia-reperfusion injury［J］.CJTCMP，2013，28（12）：3532-3535.［肖愛(ài)嬌，羅小泉.艾灸對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠大腦皮質(zhì)NF-кB p65蛋白表達(dá)的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2013，28（12）：3532-3535］.

［10］Shao J，Liu T，Xie QR，et al.Adjudin attenuates lipopolysaccharide (LPS)-andischemia-inducedmicroglialactivation［J］.J Neuroimmunol，2013，254（1/2）：83-90.doi:10.1016/j. jneuroim.2012.09.012.

［11］Gu JH，Ge JB，Li M，et al.Inhibition of NF-κB activation is associated with anti-inflammatory and anti-apoptotic effects of Ginkgolide B in a mouse model of cerebral ischemia/reperfusion injury［J］.Eur J Pharm Sci，2012，47（4）：652-660.doi:10.1016/j. ejps.2012.07.016.

［12］Zhai JH，Li XH，Li H，et al.A survey of the clinical research on Da Zhui Point in recent years［J］.Beijing Journal of TCM，2004，23（3）：186-189.［翟景慧，李曉泓，李輝，等.近年大椎穴臨床研究概況［J］.北京中醫(yī)，2004，23（3）：186-189］.doi:10.3969/j. issn.1674-1307.2004.03.026.

［13］Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats［J］.Stroke，1989，20（1）：84-91.

［14］Chen RX，Lv ZM，Chen MR，et al.Stroke treatment in rats with tail temperature increase by 40-min moxibustion［J］.Neurosci Lett，2011，503（2）：131-135.doi:10.1016/j.neulet.2011.08.024.

［15］Kao TK，Ou YC，Liao SL，et al.Opioids modulate post-ischemic progression in a rat model of stroke［J］.Neurochem Int，2008，52（6）：1256-1265.doi:10.1016/j.neuint.2008.01.007.

［16］Chen RX，Lv ZM，Chen MR，et al.Neuronal apoptosis and inflammatory reaction in rat models of focal cerebral ischemia following 40-minute suspended moxibustion［J］.Neural Regen Res，2011，6（15）：1180-1184.doi:10.3969/j.issn.1673-5374.2011.15.011.

（2016-04-28收稿2016-08-18修回）

（本文編輯魏杰）

Effects of heat-sensitive moxibustion on the expression of CD11b in cortex of focal cerebral ischemia-reperfusion injury model rats

GONG Lili1,ZHANG Hao1,XIE Bin1,OUYANG Xin2,XIAO Aijiao1△
1 Basical Medical School,2 Class One Grade 2015,Science of Acupuncture,Moxibustion and Rehabilitation, Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanchang 330004,China△

ObjectiveTo observe the effect of heat-sensitive moxibustion on the expression of CD11b in focal cerebral ischemia/reperfusion(I/R)injury model rats.MethodsFifty-one male SD rats were randomly divided into three groups, sham-operated group(n=10),I/R injury group(n=14)and moxibustion group(n=27).According to changes of tail temperature before and after moxibustion,moxibustion group was subdivided into non heat-sensitive moxibustion group(n= 13)and heat-sensitivel moxibustion group(n=14).Focal cerebral ischemia-reperfusion injury was induced by middle cerebral artery occlusion for 2 hours and reperfusion for 3 days.Behavioral performance was tested using neurologic deficitscores.Tail-flick latency was determined with tail flick analgesia meter.Infarct areas were examined using TTC staining, and cortical expression of CD11b was measured using immunohistochemical staining.ResultsAfter 3 d of operation,the tail-flick latency was significantly shorter in non heat-sensitive moxibustion group(9.32±1.11)s and heat-sensitive moxibustion group(8.69±0.51)s than that of model group(12.21±1.04)s.The area of cerebral infarction was smaller in non heat-sensitive moxibustion group(20.59±2.25)%and heat-sensitive moxibustion group(13.18±3.50)%than that in model group(32.22±14.20)%.Compared with model group,the expression of CD11b was significantly decreased in non heatsensitive moxibustion group and heat-sensitive moxibustion group(P＜0.05).ConclusionHeat-sensitive moxibustion can reduce the damage of cerebral inchemia-reperfusion,which might be through decreasing expression of CD11b.

Moxa Cone Moxibustion;brain ischemia;reperfusion injury;antigens,CD11b;rats,Sprague-Dawley;tailflick latency

R743

A

10.11958/20160554

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81060305，81660819）；江西省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（20151BAB205068，20161BBH80053）；江西省衛(wèi)生計(jì)生委中醫(yī)藥科研計(jì)劃項(xiàng)目（2014Z003）；江西中醫(yī)藥大學(xué)課題（2014ZR018，2015JZZDXK024）

1江西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院（郵編330004），2 2015級(jí)針康1班

龔麗麗（1988），女，碩士研究生，主要從事中醫(yī)藥防治神經(jīng)疾病基礎(chǔ)研究工作

△通訊作者E-mail：xaj527@163.com