貫眾、當(dāng)歸、黃芪對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響

葛 婧，郭永軍,王慶奎，徐大為，孫學(xué)亮，陳成勛，邢克智

( 天津農(nóng)學(xué)院 水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點實驗室，天津 300384 )

貫眾、當(dāng)歸、黃芪對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響

葛 婧，郭永軍,王慶奎，徐大為，孫學(xué)亮，陳成勛，邢克智

( 天津農(nóng)學(xué)院 水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點實驗室，天津 300384 )

在水溫(21±1) ℃和鹽度20±1下，將體質(zhì)量(95.45±5.29) g的半滑舌鰨飼養(yǎng)在78 cm×58 cm×46 cm水槽中，投喂按0、5、10、15 g/kg添加貫眾、當(dāng)歸、黃芪的飼料，每箱20尾，每個水平3個重復(fù)，7 d、14 d和21 d時尾柄采血，測定總超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性以及總抗氧化能力、丙二醛、總膽固醇和甘油三酯含量。試驗結(jié)果表明，14 d時，貫眾劑量為15 g/kg組的半滑舌鰨血液中總超氧化物岐化酶活力顯著高于對照組(P<0.05)，14 d和21 d時，各劑量組丙二醛含量均低于對照組；14 d時，當(dāng)歸劑量為5 g/kg組的半滑舌鰨血液中總超氧化物岐化酶活力達(dá)到最高值；21 d時，黃芪劑量為10 g/kg組的丙二醛含量值顯著低于對照組(P<0.05)，21 d時，黃芪劑量為5 g/kg組的半滑舌鰨血液中總超氧化物岐化酶活力達(dá)到最高值，不同劑量的黃芪對過氧化氫酶活力有顯著影響，但均低于對照組(P<0.05)；7 d時，各組總抗氧化能力達(dá)到最高值。試驗表明，單獨添加貫眾、當(dāng)歸及黃芪均不同程度地影響半滑舌鰨血液的抗氧化指標(biāo)。

貫眾；當(dāng)歸；黃芪；半滑舌鰨；抗氧化指標(biāo)

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，水產(chǎn)動物病害頻發(fā)，抗生素和化學(xué)藥品的使用量不斷增加，導(dǎo)致水域生態(tài)環(huán)境惡化[1]。研究表明，許多疾病的發(fā)生發(fā)展與自由基及其誘導(dǎo)的氧化反應(yīng)有關(guān)[2-4]。中草藥低毒，無抗藥性，能促進(jìn)水產(chǎn)動物生長，增強(qiáng)抗氧化能力[5-6]，有效清除自由基對水產(chǎn)動物機(jī)體的氧化損傷[7]。研究發(fā)現(xiàn)，中草藥作為天然植物，具有防御、清除和修繕多余自由基的系統(tǒng)，而超氧化物歧化酶、過氧化氫酶等抗氧化酶是其重要組成部分[8]。因此尋求能有效清除水產(chǎn)動物體內(nèi)自由基、減少疾病發(fā)生、促進(jìn)生長的中草藥飼料添加劑極其重要。

貫眾(Cyrtomiumrhizome)具有清熱解毒，抗菌等作用[9]，當(dāng)歸(Angelicasinensis)具有抗氧化和免疫等功能[10]，黃芪(Astragalus)具有免疫和增強(qiáng)造血功能[11]。研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加貫眾可顯著提高斑點叉尾(Ictaluruspunctatus)肌肉總超氧化物岐化酶活力[12]。飼料中添加當(dāng)歸多糖能有效提高點帶石斑魚(Epinephelusmalabaricus)非特異性免疫力和抗病力[13]。飼料中添加黃芪可以明顯提高凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)總超氧化物岐化酶活力[14]。

基于此，將貫眾、當(dāng)歸、黃芪按不同劑量分別添加到飼料中喂食半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis)，研究其對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響，為其在半滑舌鰨健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

貫眾、當(dāng)歸及黃芪原藥(天津市藥材公司)按比例稱量，溫水浸泡50 min，砂鍋3次煎煮(加入20倍量水，湯藥微微沸騰前用武火，沸騰后改用文火，一煎40 min，二煎35 min，三煎30 min，連續(xù)煎煮)后濾除藥渣，湯劑全部添加到半滑舌鰨基礎(chǔ)餌料中?；A(chǔ)餌料以魚粉、魚油、食用淀粉等為原料制成(表1)。

1.2 方法

貫眾、當(dāng)歸及黃芪分別按0、5、10、15 g/kg的添加量，配制成等氮等能飼料。飼養(yǎng)周期21 d，每個水平3個重復(fù)，每箱20尾。馴化7 d 后投喂試驗飼料，投喂試驗飼料的第7 d、14 d和21 d時取樣。

采樣前停食24 h，用間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽(100 mg/L)麻醉，每箱隨機(jī)取6尾魚，2 mL無菌注射器尾柄采血，肝素鈉(50 U/mL)抗凝，4 ℃，5000 r/min離心10 min，取上清液，-80 ℃保存?zhèn)溆谩Ｓ媚暇┙ǔ缮锕こ萄芯克脑噭┖袦y定血液中總超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性，總抗氧化能力及丙二醛、總膽固醇和甘油三酯的含量。

表1 飼料配方組成和營養(yǎng)組成 %

注：a (mg/kg): Ca(H2PO4)2·H2O, 14673.37; ZnSO4·7H2O, 65.97; CuSO4·5H2O, 10.61; FeSO4·7H2O, 109.54; KI, 32.7; CoCl2·6H2O, 0.2; Na2SeO3, 0.33; MnSO4·H2O, 24.61；其他為碳酸鈣粉. b (mg/kg): 維生素B2, 55; 維生素B6, 15; 維生素B1, 4; 維生素K, 3;葉酸, 25; DL-泛酸鈣,60; 煙酸, 220; 維生素B12, 0.27; 肌醇,1000; 葉酸, 13.5; (IU/kg): 維生素A, 2400; 維生素D, 6600; 維生素E, 675; 維生素C,2700; 膽堿，1%.

1.3 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行作單因素方差分析，LSD和Duncan法比較數(shù)據(jù)間差異顯著性，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 貫眾對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響

喂食14 d時，15 g/kg組半滑舌鰨血液中總產(chǎn)氧化物歧化酶活力達(dá)最高值，顯著高于對照組(P<0.05)；21 d時過氧化氫酶活力明顯升高，5 g/kg組顯著高于對照組(P<0.05)；投喂14 d時，由0 g/kg組至15 g/kg組總抗氧化能力活力逐漸升高。14 d和21 d時，不同劑量組半滑舌鰨血液中丙二醛含量值均低于對照組，但7 d時高于對照組。7 d時，不同劑量組半滑舌鰨血液中總膽固醇含量均有影響，15 g/kg組高于對照組，但貫眾對甘油三酯含量值無顯著影響(P>0.05)(表2、表3)。試驗結(jié)果表明，不同貫眾含量組半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)均有不同程度的影響，但對各個指標(biāo)影響結(jié)果不同，未表現(xiàn)出相同趨勢。

表2 不同劑量貫眾對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)

表3 不同劑量貫眾對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響(差異顯著性)

注：同列數(shù)字肩標(biāo)不同字母的平均值間差異顯著(P<0.05).下表同.

2.2 當(dāng)歸對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響

喂食14 d時，不同劑量組半滑舌鰨血液中總超氧化物岐化酶活力最高，5 g/kg組顯著高于對照組(P<0.05)。7 d時，不同劑量組過氧化氫酶活力均高于對照組，但在14 d和21 d時，各組過氧化氫酶活力均低于對照組。21 d時，5 g/kg組半滑舌鰨血液中總抗氧化活力顯著高于對照組(P<0.05)。21 d時，10 g/kg組丙二醛含量值顯著低于對照組(P<0.05)。7 d時，不同劑量組總膽固醇值均高于對照組， 15 g/kg組最高，但在14 d和21 d時均低于對照組。不同劑量當(dāng)歸對甘油三酯值無顯著影響(P>0.05)(表4、表5)。試驗結(jié)果表明，不同劑量組的當(dāng)歸對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)有不同程度的影響，但對各個指標(biāo)的影響趨勢不同。

表4 不同劑量當(dāng)歸對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)

表5 不同劑量當(dāng)歸對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響(差異顯著性)

2.3 黃芪對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響

14 d和21 d時，黃芪不同劑量組半滑舌鰨血液中總超氧化物岐化酶活力均高于對照組，21 d時5 g/kg組達(dá)最高值。不同劑量的黃芪對過氧化氫酶活力有顯著影響(P<0.05)，但均低于對照組。7 d時，各組總抗氧化能力最高。不同劑量組丙二醛含量均低于對照組，但無明顯波動。不同劑量組黃芪對總膽固醇含量和甘油三酯含量均無顯著影響(P>0.05)(表6、表7)。試驗結(jié)果表明，不同劑量組的黃芪對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)有不同程度的影響，但對各個指標(biāo)的影響趨勢不同。

表6 不同劑量黃芪對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)

表7 不同劑量黃芪對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響(差異顯著性)

3 討 論

總超氧化物岐化酶能有力清除機(jī)體超氧陰離子自由基，使機(jī)體免受氧化損傷[15-16]。丙二醛是氧自由基產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物的分解產(chǎn)物，含量變化可間接反映機(jī)體細(xì)胞損傷的程度[17]。過氧化氫酶是機(jī)體清除氧自由基的關(guān)鍵酶類，可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的防御能力及機(jī)體的免疫能力[18]。總抗氧化能力，總膽固醇和甘油三酯含量也是反映血液抗氧化能力的重要指標(biāo)。

3.1 貫眾對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響

貫眾能有效提高水產(chǎn)動物抗氧化水平，如降低施氏鱘(Acipenserschrenckii)血漿中丙二醛含量[19]。有研究表明，不同規(guī)格大小的褐牙鲆(Paralichthysolivaceus)飼料中添加金銀花(Lonicerajaponica)、人參(Panaxginseng)和山楂(Crataeguspinnatifida)等中草藥，飼喂28、56 d和83 d后，結(jié)果顯示，血清中總超氧化物岐化酶活力分別提高了9.53%、9.09%和15.14%[20]；黃鱔(Monopterusalbus)飼料中添加茯苓(Wolfiporiacocos)、黃芪及五加皮(Lysionotusaeschynanthoides)，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，可顯著增加其血清總超氧化物岐化酶活力[21]。本試驗中，不同劑量貫眾對半滑舌鰨血液總超氧化物岐化酶和過化氫酶活力、總抗氧化能力、丙二醛和總膽固醇含量均有顯著影響。14 d和21 d時不同劑量貫眾均能降低半滑舌鰨血液中丙二醛含量，說明對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)有不同程度的影響，能有效地防御、清除和改善半滑舌鰨血液中多余自由基，提高其抗氧化能力。

3.2 當(dāng)歸對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響

當(dāng)歸作為水產(chǎn)飼料常用添加劑，可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫水平。飼料中添加當(dāng)歸多糖有效提高了點帶石斑魚的非特異性免疫力[13]。研究表明，異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)飼料中添加200～300 mg/kg植物提取物，魚體肝臟內(nèi)總超氧化物岐化酶和過氧化氫酶活性顯著升高，丙二醛含量顯著降低[22]；鏡鯉(Cyprinuscarpio)飼料中添加0.5%、2.5%的大蒜(Alliumsativum)莖粉，連續(xù)投喂56 d后，發(fā)現(xiàn)可顯著提高肝臟中總超氧化物歧化酶活性，顯著降低血清中丙二醛含量[23]。本試驗中，不同劑量當(dāng)歸顯著影響了半滑舌鰨血液總超氧化物岐化酶和過氧化氫酶活力，以及總抗氧化能力，總膽固醇含量，但各指標(biāo)值在不同取樣時間上并無一致趨勢，其原因可能是半滑舌鰨養(yǎng)殖環(huán)境的不同，或者添加當(dāng)歸提取物以及當(dāng)歸添加方式的不同對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)有不同影響。

3.3 黃芪對半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響

黃芪添加到飼料中能提高水產(chǎn)動物的非特異免疫酶活性，增強(qiáng)免疫力。研究發(fā)現(xiàn)，黃芪熬制成濃縮液制成飼料對半滑舌鰨非特異免疫活性較黃芩(Scutellariabaicalensis)，魚腥草(Houttuyniacordata)效果好[24]。仿刺參(Apostichopusjaponicus)攝食含黃芪多糖的飼料時，免疫力提高[25]。也有研究表明，銀杏(Ginkgobiloba)葉提取物可使鯽魚(Carassiusauratus)血清中總超氧化物岐化酶活力顯著升高，丙二醛含量顯著降低[26]；鰻鱺(Anguillajaponica)飼料中分別添加0.5、1.0、1.5 g/kg的復(fù)方中草藥，發(fā)現(xiàn)在連續(xù)投喂60 d后，可顯著提高血清總超氧化物岐化酶活力[27]。本試驗中，不同劑量黃芪對半滑舌鰨血液總超氧化物岐化酶和過氧化氫酶活性及丙二醛含量有顯著影響，說明黃芪可有效清除半滑舌鰨血液中自由基含量，但對于總膽固醇和甘油三酯含量無顯著影響。其原因可能如上述研究，黃芪提取物或者黃芪添加方式的不同對其影響不同。

本試驗結(jié)果表明，不同劑量的貫眾、當(dāng)歸和黃芪均能不同程度提高半滑舌鰨的血液抗氧化能力，但三者的最適宜添加量以及適宜的投喂時間需進(jìn)一步研究。

[1] 王權(quán),謝獻(xiàn)勝.中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病防治上的應(yīng)用[J].水產(chǎn)科技情報,2006,33(4):163-164.

[2] 李勇,孔令青,高洪,等.自由基與疾病研究進(jìn)展[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2008,29(4):85-88.

[3] Cozzi R, Ricordy R, Aglitti T, et al. Ascorbic acid and β-carotene as modulators of oxidative damage [J]. Carcinogenesis,1997, 18(1):223-228.

[4] Ji X Y, Tan B K, Zhu Y C, et al. Comparison of cardioprotective effects using ramipril and DanShen for the treatment of acute myocardial infarction in rats [J]. Life Sci, 2003, 73(11):1413-1426.

[5] 劉遜,王荻,盧彤巖,等.復(fù)方中藥免疫添加劑對史氏鱘生長性能和抗氧化力的影響[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2012,28(14):130-134.

[6] 文國樑,于明超,李卓佳,等.中草藥飼料添加劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2011(24):114-116.

[7] 成喜雨,崔馨,劉春朝,等.中草藥抗氧化活性研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2006,18(2):514-518.

[8] 熊皓平,楊偉麗,張友勝,等.天然植物抗氧化劑的研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2001,13(5):75-79.

[9] 陳紅云,劉光明,石武祥,等.中藥貫眾的研究進(jìn)展[J].大理學(xué)院學(xué)報:自然科學(xué),2006(6):75-77.

[10] 付衛(wèi)華.不同產(chǎn)地當(dāng)歸飲片的鑒定學(xué)及質(zhì)量研究[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2013,10(26):140-141.

[11] 張薔.黃芪對間歇低氧大鼠海馬及胰腺損傷的作用及其機(jī)制研究[D].天津:天津大學(xué),2013.

[12] 王慶奎,陳成勛,郭永軍,等.7種中草藥對斑點叉尾鮰生理生化指標(biāo)的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(15):2-6.

[13] 王慶奎,邢克智,趙海運,等.喂食當(dāng)歸多糖對點帶石斑魚非特異性免疫力和抗病力的影響[J].中國海洋大學(xué):自然科學(xué)版,2012,42(9):3-5.

[14] 王蕓,李健,劉淇,等.5種中草藥對凡納濱對蝦生長及非特異性免疫功能的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(26):8236-8239 .

[15] 田娟,冷向軍,李小勤,等.復(fù)方中草藥制劑對草魚生長性能、肌肉成分和血清非特異性免疫的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(28):12282-12284.

[16] 李桂峰,錢沛鋒,孫際佳,等. 維生素C對胡子鯰血清免疫相關(guān)酶活性的影響[J].大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報,2004,19(4):301-305.

[17] Gu J, Gong J H, Yin Y B, et al. Effects of intermittent hyperbaric oxygen exposure and oxygen convulsions on a trioxidant enzyme activity and lipid peroxide contents in rats [J].Chinese Medical Journal, 1995, 2(4):31-34.

[18] 孫紅梅,黃權(quán),從波.饑餓對黃顙魚血液中幾種免疫相關(guān)因子的影響[J].大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報,2006, 21(4):307-310.

[19] 黃江,魏巍,王荻,等.中草藥方劑對施氏鱘血漿和肝臟中一氧化氮、丙二醛含量及一氧化氮合酶活性的影響[J].水產(chǎn)學(xué)雜志,2009,22(3):28-31.

[20] 王吉橋,孫永新,張劍誠.金銀花等復(fù)方草藥對牙鲆生長、消化和免疫能力的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報,2006,30(1):90-96.

[21] 阮國良, 楊代勤, 王金龍. 幾種中草藥飼料添加劑對黃鱔免疫功能和生長性能的影響[J]. 飼料工業(yè), 2005, 26(24):34-36.

[22] 劉波,周群蘭,何義進(jìn),等.植物提取物對異育銀鯽生長、免疫與抗氧化相關(guān)因子及抗病力的影響[J].上海海洋大學(xué)學(xué)報,2008,17(2):193-198

[23] 徐奇友, 唐玲, 王常安, 等. 大蒜莖粉和牛至草粉對鏡鯉抗氧化、非特異免疫以及肌肉品質(zhì)的影響[J]. 華北農(nóng)學(xué)報, 2010, 25(增刊):133-139.

[24] 劉金海,周懸齊,凌空,等.中草藥對半滑舌鰨非特異免疫活性的比較研究[J].飼料工業(yè),2011, 32(6):1-5.

[25] Sun Y X, Xu Y P, Wang T T, et al. Effects ofAstragaluspolysaccharide on gene expression of lysozyme in coelmocytes of sea cucumberApostichopusjaponicas[J]. Fish Sci, 2009, 28(10):572-574.

[26] 孫翰昌. 銀杏葉提取物對鯽魚血液生化指標(biāo)和抗氧化功能的影響[J]. 中國飼料, 2008(13):36-37.

[27] 王廣軍, 謝駿, 胡隱昌, 等. 中草藥添加劑對日本鰻鱺生長和非特異性免疫效應(yīng)的研究[J]. 淡水漁業(yè), 2008, 38(6):38-41.

EffectofCyrtomiumrhizome,Angelicasinensis,andAstragalusonBloodAntioxidantParametersinHalf-smoothTongue-sole(Cynoglossussemilaevis)

GE Jing, GUO Yongjun, WANG Qingkui, XU Dawei, SUN Xueliang, CHEN Chengxun, XING Kezhi

( College of Fisheries, Tianjin Key Laboratory of Aqua-Ecology and Aquaculture,Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China )

A feeding trial was conducted to evaluate effect ofCyrtomiumrhizome,Angelicasinensis, andAstragaluson blood parameters including activities of total superoxide dismutase (T-SOD), total antioxidant capacity (T-AOC), and catalase (CAT), and levels of malonaldehyde (MDA), triglyceride (TG), and total cholesterol (T-CHO) in half-smooth tongue-sole (Cynoglossussemilaevis). Juvenile half-smooth tongue-sole with body weight of (95.45±5.29) g were reared in tanks of each 78 cm×58 cm×46 cm at a rate of 20 fish/tank and fed diets containingC.rhizome,A.sinensis, orAstragalusat different doses of 0 g/kg diet, 5 g/kg diet, 10 g/kg diet, and 15 g/kg diet for 21 days with triplication at water temperature of (21±1) ℃ and a salinity of 20±1. The activities of T-SOD, T-AOC, and CAT, and levels of MDA, TG, and T-CHO were detected in blood of the half-smooth tongue-sole in 7 days, 14 days and 21 days during the rearing period. It was found that the fish fed the diet supplemented withC.rhizomeat a dose of 15 g/kg diet had significantly higher T-SOD activity than the fish fed the control diet in 14 days, and had significantly lower MDA content than the fish fed the control group in 14 and 21 days (P<0.05). The maximal T-SOD activity was observed in the fish fed the diet supplemented withA.sinensisat a dose of 5 g/kg diet in 14 days. There were significantly lower MDA content in the fish fed the diet supplemented withA.sinensisat a rate of 10 g/kg diet than in the fish in the control group in 21 days (P<0.05). Diet supplemented withAstragalusat a dose of 5 g/kg diet resulted in significantly higher T-SOD activity and significantly lower CAT activity in 21 days compared to the control diet (P<0.05). There was significantly higher T-AOC activity in the fish fed the diet containing different doses ofAstragalusin 7 days. The findings indicated thatC.rhizome,A.sinensis,andAstragalussupplementation affected to some extent on blood antioxidant parameters in half-smooth tongue-sole.

Cyrtomiumrhizome;Angelicasinensis;Astragalus;Cynoglossussemilaevis; antioxidant parameter

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.05.006

S965.399

A

1003-1111(2016)05-0492-06

2016-01-21；

2016-04-25.

國家星火計劃項目(2013GA610002)；國家自然科學(xué)基金面上項目(31270456)；天津市科技支撐計劃項目(13ZCZDNC00700)；天津市高等學(xué)校創(chuàng)新團(tuán)隊基金資助項目(TD12-5018).

葛婧(1989—)，女，碩士研究生；研究方向：水產(chǎn)動物病害防治與免疫學(xué).E-mail：532462825@qq.com.通訊作者:郭永軍(1969—)，男，研究員；研究方向：水產(chǎn)動物病害防治與免疫學(xué).E-mail：guoyongjun@tjau.edu.cn.