云南小?？Х戎辛?、滴滴涕殘留量測(cè)定適宜方法研究

劉丹丹++何飛飛++張艷++郝淑美

摘要 采用國(guó)標(biāo)法、國(guó)標(biāo)改進(jìn)法及固相吸附法3種不同的前處理方式提取凈化咖啡中的六六六、滴滴涕，建立了一種新型的高效、快速、靈敏度高的測(cè)定分析方法。結(jié)果表明，經(jīng)過固相吸附法處理純化提取的六六六、滴滴涕加標(biāo)回收率最高，達(dá)到112.7%，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)準(zhǔn)確率高。因此，與國(guó)標(biāo)法相比較，固相吸附法更適宜用于咖啡中六六六、滴滴涕的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞 小?？Х龋涣?；滴滴涕；殘留量；測(cè)定方法；云南省

中圖分類號(hào) S571.204；TS207.53 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2016）20-0094-02

隨著人們生活水平質(zhì)量的提高，國(guó)內(nèi)咖啡的需求量直線上升。目前，云南省已成為中國(guó)最大的咖啡生產(chǎn)基地，種植面積和產(chǎn)量都已占到全國(guó)的98%以上。但是，在咖啡的種植過程中由于受到各種病蟲害的傳播，并且在其生產(chǎn)加工中有可能受到污染。因此，咖啡飲品的質(zhì)量安全問題備受人們的關(guān)注。

目前，六六六、滴滴涕等有機(jī)氯類農(nóng)藥廣泛用于咖啡的栽培管理中，其殺蟲效果顯著，但其毒性大，不易分解，并且長(zhǎng)期存在于土壤及植物體內(nèi)，不僅嚴(yán)重污染環(huán)境，也導(dǎo)致了食品安全隱患問題。但由于咖啡的基質(zhì)復(fù)雜[1-2]，顆粒較細(xì)，油脂及色素含量較高，給咖啡中的農(nóng)藥殘留測(cè)定造成困難，國(guó)內(nèi)外關(guān)于咖啡中農(nóng)藥殘留的研究報(bào)道也非常有限[3]。

本研究分別采用國(guó)標(biāo)法、國(guó)標(biāo)改進(jìn)法及固相吸附法3種方法萃取純化小?？Х戎械牧?、滴滴涕，利用氣象色譜檢測(cè)器進(jìn)行分析，并通過比較加標(biāo)回收率以便確認(rèn)可準(zhǔn)確用于測(cè)定咖啡中2種農(nóng)藥殘留量的最適宜的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

氣相色譜儀（安捷倫；Agilent 7890A）；分析天平（島津；AUY220）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東悅；R301）、石油醚（阿拉丁；色譜純）、濃硫酸（阿拉?。?、氯化鈉（阿拉??；色譜純）、檸檬酸鈉（阿拉?。簧V純）、無水硫酸鎂（阿拉?。簧V純）、甲苯（阿拉??；色譜純）、檸檬酸氫二鈉（阿拉??；色譜純）、N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑（Agela；PA0100）、乙腈（阿拉??；色譜純）。

六六六、滴滴涕標(biāo)準(zhǔn)品：a-六六六、γ-六六六、？奩-六六六的濃度為0.005 mg/L；PP-DDT濃度為0.1 mg/L；P P-DDD：0.02 mg/L；OP-DDT濃度為0.05 mg/L；β-六六六和PP-DDE濃度為0.01 mg/L。以上標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)于阿拉丁試劑，分析標(biāo)準(zhǔn)品。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg，溶于苯中，分別移于100 mL容量瓶中，以苯稀釋至刻度，混勻，濃度為100 mg/L，貯于4 ℃冰箱中。

農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別量取上述各標(biāo)準(zhǔn)液于同一容量瓶中，以正己烷稀釋至刻度。a-六六六、γ-六六六、？奩-六六六的濃度為0.005 mg/L；P P′-DDD濃度為0.02 mg/L；OP′-DDT濃度為0.05 mg/L；PP′-DDT濃度為0.1 mg/L；β-六六六和PP′-DDE濃度為0.01 mg/L。

1.2.2 色譜條件。色譜柱為長(zhǎng)2 m、內(nèi)徑3 mm的玻璃柱，內(nèi)裝涂以2% QF-1和1.5% OV-17混合固定液的0.149～0.177 mm硅藻土。檢測(cè)器溫度225 ℃；進(jìn)樣口溫度195 ℃；柱溫185 ℃。載氣為高純氮，流速110 mL/min；進(jìn)樣量為1～10 uL。外標(biāo)法定量。

1.2.3 樣品前處理及測(cè)定。本試驗(yàn)采用濃度為1.25 mg/kg六六六、滴滴涕的農(nóng)藥對(duì)云南小?？Х确圻M(jìn)行處理，采用3種不同的方法提取凈化六六六、滴滴涕進(jìn)行氣相色譜法測(cè)定其含量。

國(guó)標(biāo)法：根據(jù)國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.19-2008采用的方法對(duì)樣品進(jìn)行提取純化，具體如下：

（1）稱取1 g咖啡粉，用37 μm（相當(dāng)于400目）篩選，加入1 mL混合內(nèi)標(biāo)工作液進(jìn)行處理。

（2）加入石油醚20 mL，震蕩30 min（150 r/min），然后過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)至近干（溫度設(shè)置為65～70 ℃），定容至5 mL。

（3）加0.5 mL濃硫酸凈化，振搖0.5 min，于3 000 r/min離心15 min。取上清液進(jìn)行測(cè)定。

國(guó)標(biāo)改進(jìn)法：

（1）稱取1 g咖啡粉，用37 μm（相當(dāng)于400目）篩選，加入1 mL混合內(nèi)標(biāo)工作液進(jìn)行處理。

（2）加石油醚∶丙酮（5∶1，v/v）20 mL，震蕩30 min（150 r/min），過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)至近干（溫度設(shè)置為65～70 ℃），定容至5 mL。

（3）加0.5 mL濃硫酸凈化，振搖0.5 min，于3 000 r/min離心15 min。取上清液進(jìn)行測(cè)定。

固相吸附法：

（1）稱取咖啡粉1 g（精確至0.1 mg）置于50 mL具蓋離心管中，加入10 mL水，振蕩，直至樣品被水充分浸潤(rùn)，靜止10 min。

（2）移取乙腈10 mL和混合內(nèi)標(biāo)工作液1 mL到離心管中，于漩渦混合振蕩儀上以2 000 r/min 速度振蕩1 min，分別加入無水硫酸鎂4 g、氯化鈉1 g、檸檬酸鈉1 g、檸檬酸氫二鈉0.5 g和甲苯5 mL，立即于漩渦混合振蕩儀上以2 000 r/min 速度振蕩2 min，然后以4 000 r/min 離心10 min。

（3）移取5 mL樣品提取液上層清液于10 mL離心管中，加入無水硫酸鎂500 mg和N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑150 mg，于漩渦混合振蕩儀上以2 000 r/min 速度振蕩2 min，以6 000 r/min 離心2 min，上機(jī)測(cè)定。

1.2.4 加標(biāo)回收率的測(cè)定。稱取小?？Х壬箻悠?.0 g，加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品混合液1 mL，得到回收率測(cè)試樣本，與樣品同方法進(jìn)行處理，取1 μL上清液進(jìn)行分析。

1.2.5 結(jié)果計(jì)算。試樣中六六六、滴滴涕及其異構(gòu)體或代謝物的單一物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算公式如下：

W=（A1/A2）×m1/m2×V1/V2

式中，W為試樣中六六六、滴滴涕及其異構(gòu)體或代謝物的單一物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg/kg）；m1為單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量（ng）；m2為被測(cè)定試樣的取樣量（g）；A2為各農(nóng)藥組分標(biāo)準(zhǔn)的峰值；A1為被測(cè)定試樣各組分的峰值（峰高或面積）；V1為被測(cè)定試樣的稀釋體積（mL）；V2為被測(cè)定試樣的進(jìn)樣體積（uL）。

2 結(jié)果與分析

六六六、滴滴涕經(jīng)提取、凈化后用氣相色譜法測(cè)定，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。六六六的4種異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品的出峰順序?yàn)棣?六六六、β-六六六、γ-六六六和δ-六六六；滴滴涕的4種異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品的出峰順序?yàn)镻P-DDE、OP-DDT、PP-DDT和PP-DDD。加標(biāo)處理后樣品中六六六、滴滴涕農(nóng)藥殘留量測(cè)定的結(jié)果如圖1所示。

小?？Х冉?jīng)同一濃度（1.25 mg/kg）混合標(biāo)準(zhǔn)品處理后，2種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定結(jié)果差距較大。利用國(guó)標(biāo)法測(cè)定的結(jié)果準(zhǔn)確率較低，其次為國(guó)標(biāo)改進(jìn)法，固相萃取測(cè)定的方法準(zhǔn)確率最高?；厥章蕼y(cè)試結(jié)果見表1，可以看出，3 種處理方法的平均回收率在79.8%～112.7%之間。由此可見，固相萃取純化回收得到的六六六、滴滴涕的殘留量最高，測(cè)量準(zhǔn)確，可以減少萃取操作中的損失。

3 結(jié)論與討論

咖啡作為一種深受人們喜愛的飲品，對(duì)其需求量日益增加。據(jù)有關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)咖啡消費(fèi)者的數(shù)量越來越大，通過對(duì)咖啡農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，既可以保障消費(fèi)者的身體健康，也可以限制國(guó)外一些農(nóng)殘超標(biāo)的咖啡進(jìn)入我國(guó)市場(chǎng)?？Х戎械霓r(nóng)藥殘留主要是由于種植過程中使用或環(huán)境中攝入的，常用的殺蟲劑及殺菌劑有六六六、滴滴涕、樂果、百菌清、多菌靈、甲基托布津等[4]。這些農(nóng)藥的種類繁多，性質(zhì)各異，傳統(tǒng)的分析方法難以保證其檢測(cè)精度。

目前，利用離子-氣象色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法成為研究的熱點(diǎn)[5]，但是測(cè)定費(fèi)用較高并且針對(duì)性較差。隨著現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步，開發(fā)高效準(zhǔn)確的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法，以及嚴(yán)格的農(nóng)藥限量標(biāo)準(zhǔn)尤其重要[6-9]。

本研究中采用3種不同的方法萃取凈化咖啡粉中六六六、滴滴涕，并通過氣相色譜檢測(cè)技術(shù)對(duì)其殘留量進(jìn)行了測(cè)定。經(jīng)過分析發(fā)現(xiàn)：國(guó)標(biāo)法中液-液分配萃取純化材料用量大，需經(jīng)多次純化才能得到合格凈化液，耗時(shí)長(zhǎng)，操作麻煩，回收率低，六六六和滴滴涕的測(cè)定結(jié)果不穩(wěn)定；改進(jìn)的國(guó)標(biāo)處理方法，六六六和滴滴涕不同異構(gòu)體的結(jié)果差異很大；固相吸附法采用N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑凈化效果好，回收率高，材料節(jié)省并且沒有采用有毒物質(zhì)，測(cè)定方法準(zhǔn)確，精密度較高。因此，固相吸附法可作為測(cè)定六六六和滴滴涕的主要方法，比傳統(tǒng)檢測(cè)法更能滿足目前的要求。

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