馮秋生，李怡紅，王曉娜，董郁紅，翟東良，畢俊忠，趙連增

（河北省唐山市豐南區(qū)醫(yī)院1.外一科，2.超聲科，3.病理科，河北 唐山 063300；4.天津腫瘤醫(yī)院胃部腫瘤科，天津 300060）

伊馬替尼干預中危胃間質瘤的療效分析

馮秋生1，李怡紅2，王曉娜3，董郁紅4，翟東良1，畢俊忠3，趙連增1

（河北省唐山市豐南區(qū)醫(yī)院1.外一科，2.超聲科，3.病理科，河北 唐山 063300；4.天津腫瘤醫(yī)院胃部腫瘤科，天津 300060）

目的探討中危胃間質瘤患者使用伊馬替尼干預后患者的臨床療效，以及基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）和蛋白酶激活受體（PAR-2）水平的變化。方法選取2010年1月-2012年1年該院收治的60例中危胃間質患者分為觀察組和對照組兩組，所有患者進行手術治療，對照組患者行常規(guī)護理及治療方案進行干預，觀察組患者在對照組基礎上使用伊馬替尼進行輔助治療，記錄患者臨床療效，并在手術前及術后1年采集患者空腹靜脈血5 ml，使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清MMP-9蛋白水平，使用一步逆轉錄聚合酶鏈反應法檢測血清PAR-2 mRNA水平。結果兩組1、2和3年無復發(fā)生存率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；治療前兩組患者血清MMP-9蛋白和PAR-2 mRNA水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），治療后兩組患者血清MMP-9蛋白和PAR-2 mRNA水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），且觀察組患者血清MMP-9蛋白和PAR-2 mRNA水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論使用伊馬替尼對中危胃間質瘤患者進行治療后，可顯著降低患者血清MMP-9及PAR-2 mRNA表達水平，并有可能提高臨床療效。

伊馬替尼；中危胃間質瘤；療效；基質金屬蛋白酶-9；蛋白酶激活受體

胃間質瘤是臨床中常見的間葉源性的胃腸道腫瘤，近年來伴隨分子生物學、免疫組織化學法、基因診斷及治療技術的不斷發(fā)展，胃間質瘤的臨床診斷及治療取得極大發(fā)展[1]?；|金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinases-9，MMP-9）是人體內重要的蛋白水解酶，在人體內發(fā)揮十分重要的作用。有研究指出，MMP-9可促進腫瘤細胞生長，增強腫瘤細胞的轉移和侵襲能力并參與調控新生血管生成[2]。蛋白酶激活受體（protease activated receptor 2，PAR-2）是重要的蛋白酶激活受體，其在腫瘤組織中常過量表達[3]。有研究指出，PAR-2的過量表達常與腫瘤的浸潤、靜脈和淋巴轉呈正相關，并與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及患者預后密切相關[4]。伊馬替尼是現(xiàn)階段治療晚期胃間質瘤的一線藥物，其可顯著提高患者的中位生存期。大量研究結果顯示，中高?；颊呖蛇x用伊馬替尼進行輔助治療，其可改善患者生存治療、總生存率、術后無復發(fā)生存率（recurrence-free survival，RFS）[5]。但中危胃間質瘤患者選用伊馬替尼干預后，患者體內MMP-9及PAR-2等蛋白酶水平變化尚無文獻報道。為分析中危胃間質瘤患者采用伊馬替尼后患者病情變化情況，以及伊馬替尼臨床療效與MMP-9和PAR-2水平的關系，探討伊馬替尼發(fā)揮藥理活性的可能機制。為此，筆者分析60例中危胃間質瘤患者臨床資料，探討患者使用伊馬替尼干預后患者的臨床療效，以及MMP-9和PAR-2水平的變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年1月-2012年1年本院收治的60例中危胃間質患者，將所有患者依照就診順序進行編號后，依照隨機數(shù)表將患者分為觀察組和對照組，每組30例，兩組患者一般臨床資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。所有患者及法定監(jiān)護人對本組研究內容知情并簽署知情同意書，并經本院倫理委員會批準。

1.2 納入標準

參與本研究患者均符合如下標準：①患者免疫組織化學法和病理檢查結果證實為胃間質瘤；②臨床診斷結果符合美國國立衛(wèi)生研究院（national institutes of health，NIH）危險度分級標準的中危險度[6]；③患者美國東部腫瘤協(xié)作組（eastern cooperative oncology group，ECOG）體能評分＜2分[7]。

1.3 排除標準

若患者符合以下任意一項標準則將其排除出本研究：①患者為哺乳期婦女或孕婦；②患者合并其他臟器嚴重損傷；③已出現(xiàn)轉移病灶患者；④主動申請退出本組研究或失訪。

1.4 實驗方法

所有患者進行手術治療，切除腫瘤病灶，對照組患者不接受伊馬替尼輔助治療，定期進行隨訪。觀察組患者口服伊馬替尼（江蘇豪森，甲磺酸伊馬替尼片）進行輔助治療，400 mg/d，共服用1年。

1.5 觀察指標

2016年3月31日為本研究的最終隨訪日期，患者最低隨訪時間為36個月，患者在治療期間均進行血液學檢查并評估療效，每3個月使用計算機體層攝影掃描或B超檢查評估患者病情，記錄并統(tǒng)計患者不良反應發(fā)生情況。所有患者在手術前及術后1年采集患者空腹靜脈血5 ml，室溫靜置15 min后3 000 r/min收集血清，使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清MMP-9蛋白水平，使用一步逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcription polymerase chain reaction，RTPCR）法檢測血清PAR-2 mRNA水平。MMP-9酶聯(lián)免疫試劑盒購買自（上海生工生物工程有限公司），首先將特異性抗體與載體相連，后加血清樣本，再加入酶標抗體，在520 nm波長下測定吸光度，依照標準曲線進行定量分析。PAR-2一步RT-PCR試劑盒購買自大連自寶生生物工程有限公司，引物由上海生工生物工程有限公司合成。一步法RT-PCR嚴格參照試劑盒說明書進行操作。見表1。

表1 RT-PCT引物表

1.6 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，用t檢驗，Cox風險比例回歸進行多因素分析，置信區(qū)間為95%，使用K-M生存分析法分析患者累積RFS，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 一般資料

觀察組男性19例，女性11例；年齡47～75歲，平均（58.21±6.32）歲；對照組男性21例，女性9例；年齡48～76歲，平均（59.02±6.83）歲，兩組患者性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2兩組一般資料比較（n=30）

組別男性例（%）年齡/（歲，x±s）＜5 cm腫瘤大小例（%）≥5 cm核分裂象例（%）＜5/50≥5/50 ECOG評分例（%）0分1分2分觀察組19（63.33）58.21±6.3220（66.67）10（33.33）10（33.33）20（66.67）26（86.67）4（13.33）0（0.00）對照組21（70.00）59.02±6.8318（60.00）12（40.00）12（40.00）18（60.00）25（83.33）5（16.67）0（0.00）t/χ2值0.7210.5850.6870.6870.438 P值0.3960.5600.4060.4060.508

2.2 臨床療效

本組研究中，患者中位隨訪時間為41個月，觀察組1例患者在術后停藥后15個月出現(xiàn)肝轉移現(xiàn)象，對照組6例患者出現(xiàn)轉移或復發(fā)癥狀。兩組1、2和3年RFS比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。對患者服藥與預后質量的關系進行Cox風險回歸分析發(fā)現(xiàn)，β值0.062，β標準誤0.037，β值/β標準誤比值1.676，危險比為0.265（95%CI：0.024，2.763），P= 0.268。見附圖。

附圖兩組患者生存曲線

2.3 MMP-9水平的變化

治療前兩組患者血清MMP-9蛋白水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），治療后兩組患者血清MMP-9蛋白水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），且對照組患者血清MMP-9蛋白水平低于對照組（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組患者血清MMP-9蛋白水平比較（n=30，ng/ml±s）

表3 兩組患者血清MMP-9蛋白水平比較（n=30，ng/ml±s）

組別治療前治療后t值P值觀察組7.93±1.541.84±0.7614.1630.000對照組7.63±1.933.58±1.028.0760.000 t值0.5295.463 P值0.6000.000

2.4 PAR-2 mRNA水平的變化

治療前兩組患者血清PAR-2 mRNA水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），治療后兩組患者血清PAR-2 mRNA水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），且對照組患者血清PAR-2 mRNA水平低于對照組。見表4。

表4患者血清PAR-2 mRNA水平比較（n=30±s）

2.5 患者不良反應調查結果

觀察組13例患者出現(xiàn)惡心嘔吐，14例出現(xiàn)水腫，9例白細胞下降，6例出現(xiàn)貧血，2例患者出現(xiàn)皮疹，脫發(fā)及肌肉震顫各發(fā)生1例，且所有患者經門診對癥處理后明顯好轉。對照組中患者并未出現(xiàn)明顯不良反應。

3 討論

胃間質瘤是臨床中較為常見的間葉源性胃腸道腫瘤，被認為是具有高度惡性傾向的腫瘤之一，腫瘤病灶區(qū)大小、有絲分裂指出、基因突變、腫瘤病灶位置、細胞構成等均與胃腸道間質瘤（gastrointestinal stromal tumors，GIST）的惡性程度密切相關。但胃間質瘤患者術后極易復發(fā)，行為不可預測性，即使將患者病灶完全切除，也有約50%患者可能出現(xiàn)復發(fā)甚至轉移。有研究指出，完全切除高危GIST患者病灶后，使用伊馬替尼輔助患者進行治療，可有效提高患者的總生存率和RFS，因而臨床中廣泛使用伊馬替尼輔助GIST患者進行治療，且有患者治療時間≥1年[8]。但依據(jù)NIH分級標準，胃部是中危GIST的高發(fā)部位，現(xiàn)階段有關伊馬替尼與胃間質瘤患者預后的相關性研究仍較缺乏。本研究結果顯示，使用400 mg/d伊馬替尼對中危胃間質瘤患者進行輔助治療后，可有效提高患者的RFS，但Cox風險回歸分析顯示，兩組患者比較差異無統(tǒng)計學意義。分析認為其可能與患者的隨訪時間較短相關，但K-M曲線顯示，隨訪期間內觀察組患者RFS曲線高于對照組，且伴隨患者隨訪時間增加，兩組差異更加明顯，因而有待于延長隨訪時間進行深入研究。另外，中危度胃間質瘤的臨床復發(fā)轉移率較低也是可能導致兩組Cox風險回歸差異并不明顯的因素之一。鑒于相關研究并不充分，本組隨訪時間較短且樣本容量較小，因而有待于進一步擴大臨床樣本數(shù)進行驗證。

MMPs是人體內重要的蛋白水解酶，其在腫瘤微環(huán)境的形成和變化過程中均起到十分重要的作用。MMP-9是MMP家族中重要成員，其分子量最大為92 kD，因而又稱為92 kDⅣ型膠原。正常生理狀態(tài)下，MMP-9以酶原形式存在并無生物活性，且Ⅳ型膠原是主要的降解物[9]。本研究結果顯示，治療后兩組患者血清MMP-9水平雖都明顯降低，但觀察組患者血清MMP-9水平下降水平更為明顯。當MMP-9表達量降低后，間減少細胞外基質中的Ⅳ型膠原和Ⅴ型膠原降解，調節(jié)細胞的黏附能力，減少腫瘤新生血管生成，減弱腫瘤侵襲能力增強和轉移概率[10]。大多數(shù)腫瘤中MMP-9呈過量表達狀態(tài)，其在腫瘤的浸潤及轉移過程中發(fā)揮十分重要作用[11-12]。但本研究結果提示，使用伊馬替尼對中危胃間質瘤患者治療后，可有效控制患者血清MMP-9水平，降低患者體內MMP-9過量表達狀態(tài)，有利于控制患者腫瘤的復發(fā)和轉移，提高患者治療效果，延長患者生存時間，且伴隨時間延長該優(yōu)勢可能更為明顯。

在諸多惡性腫瘤中，PAR-2常呈現(xiàn)異常高表達轉移，且腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后與PAR-2密切相關。大量研究結果證實，PAR-2可通過促進細胞黏附、加速細胞增殖和細胞外基質降解、增強血管遷移和促進血管新生等途徑有誘使腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲與轉移[13]。本研究結果顯示，與MMP-9蛋白表達水平相似，兩組患者在治療后血清PAR-2 mRNA水平均降低，但觀察組患者血清PAR-2 mRNA水平下降更為明顯。伴隨患者NIH分級程度提高，PAR-2表達水平也隨之上調，且黏膜受侵情況與PAR-2水平密切相關[14-15]。本研究結果顯示，伊馬替尼可有效降低PAR-2的異常高表達狀態(tài)，抑制腫瘤的增殖、黏附及運動能力，降低胃間質瘤的侵襲和轉移概率。本實驗結果提示，伊馬替尼可有效降低患者血清PAR-2的表達，降低細胞黏附能力，抑制細胞增殖，有利于患者預后。通過本研究可以發(fā)現(xiàn)，中危胃間質瘤患者采用伊馬替尼進行治療時，可有效提高患者臨床治療效果。本實驗對伊馬替尼的療效進行深入分析發(fā)現(xiàn)，患者血清MMP-9和PAR-2水平也出現(xiàn)顯著變化，分析認為患者血清MMP-9與PAR-2的變化是伊馬替尼改善中危胃間質瘤患者療效和預后質量的重要途徑。

綜上所述，使用伊馬替尼對中危胃間質瘤患者進行治療后，可顯著降低患者血清MMP-9和PAR-2 mRNA表達水平，并有可能提高臨床療效。但本組臨床樣本數(shù)較少，且隨訪時間較短有待于后續(xù)深入研究探討。

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（童穎丹 編輯）

Efficacy of Imatinib in treatment of gastric stromal tumors

Qiu-sheng Feng1,Yi-hong Li2,Xiao-na Wang3,Yu-hong Dong4, Dong-liang Zhai1,Jun-zhong Bi3,Lian-zeng Zhao1
(1.Department of General Surgery;2.Department of Ultrasonography;3.Department of Pathology,Fengnan District Hospital,Tangshan,Hebei 063300,China;4.Department of Stomach Cancer,Tianjin Cancer Hospital,Tianjin 300060,China)

Objective To investigate the clinical efficacy of Imatinib in patients with intermediate-risk gastric stromal tumor and the changes of matrix metalloproteinase 9(MMP-9)and protease activated receptor 2(PAR-2)levels.Methods Sixty patients with intermediate-risk gastric stromal tumor treated in our hospital from Jan.2010 to Jan.2012 were divided into observation group and control group.All the patients received surgical treatment.The control group had routine nursing and treatment intervention,while the observation group had adjuvant therapy with Imatinib in addition to the treatment of the control group.The clinical efficacy was recorded.Fasting venous blood(5 ml)was collected from the patients before operation and 1 year after surgery.Enzyme-linked immunosorbent assay was used for the detection of serum MMP-9 protein level. One-step RT-PCR was used to detect serum PAR-2 mRNA level.Results The differences of 1-year,2-year and 3-yearrecurrence-free survival(RFS)were not significant between the two groups(P＞0.05).Before treatment serum MMP-9 protein or PAR-2 mRNA level had no significant difference between the two groups (P＞0.05).After treatment,the serum MMP-9 protein and PAR-2 mRNA levels of the observation group were significantly lower than those of the control group(P＜0.05).Conclusions The use of Imatinib in the treatment of intermediate-risk gastric stromal tumor can significantly reduce the serum levels of MMP-9 proteinand PAR-2 mRNA expression,and may improve the clinical efficacy.

Imatinib;intermediate-risk gastric stromal tumor;therapeutic effect;matrix metalloproteinases 9;protease activated receptor 2

R735.2

B

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.23.026

1005-8982（2016）23-0123-05

2016-07-05