林常玉

(山東省濰坊市安丘市畜牧局,山東濰坊 262100)

偽狂犬病基因缺失苗研究進(jìn)展

林常玉

(山東省濰坊市安丘市畜牧局,山東濰坊 262100)

偽狂犬?。≒R）是由偽狂犬病病毒引起的以家畜和多種野生動物發(fā)熱、奇癢及腦脊髓炎為特征的急性、烈性傳染病。我國于1947年首次發(fā)現(xiàn)該病，其后一些地區(qū)也出現(xiàn)了偽狂犬病的相關(guān)報道。目前PR在我國的大部分省份或地區(qū)均有發(fā)病和流行，隨著集約化養(yǎng)殖模式的逐步擴(kuò)大呈流行性暴發(fā)，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

PR具有宿主范圍廣、傳播途徑多、死亡率高、持續(xù)感染等特點(diǎn)，目前尚無有效的藥物進(jìn)行治療，疫苗接種仍是防治PR的最有效辦法?；蛉笔б呙缇哂腥笔稽c(diǎn)明確、穩(wěn)定，不易毒力返強(qiáng)，可用于鑒別野毒感染和疫苗接種，難以形成潛伏感染等優(yōu)點(diǎn)。目前各國已研制出多種基因缺失疫苗，在偽狂犬病的控制及根除中起到重要作用。

1 單基因缺失苗

1.1 TK基因缺失疫苗

TK基因缺失疫苗最早出現(xiàn)，利用BUK株缺失TK基因內(nèi)部基因序列制成疫苗株，該毒株在細(xì)胞上對豬和小鼠安全，不復(fù)壯，且能夠提供有效的保護(hù)，免疫豬除了有暫時性的體溫升高，不表現(xiàn)任何臨床癥狀，攻毒后不僅能夠?qū)ωi提供完全保護(hù)力，還在一定程度上限制了野毒在豬體內(nèi)的復(fù)制。

構(gòu)建PRV Fa株TK基因缺失疫苗株，免疫小鼠有一定的保護(hù)作用，血清ELISA抗體滴度可達(dá)1：64；陳瑞愛等構(gòu)建PRV-Ra TK基因缺失株在BHK21細(xì)胞上能穩(wěn)定遺傳，對家兔的毒力顯著降低，接種小豬有良好的免疫效力。但單缺失TK的弱毒株對犢牛還有較低的毒力，對犬、貓的毒力更強(qiáng)，故有必要在TK缺失的基礎(chǔ)上進(jìn)一步缺失PRV其他毒力基因。

1.2 gD基因缺失疫苗

構(gòu)建gD缺失株，在感染細(xì)胞后釋放出的子代病毒粒子無感染性，從而失去了從免疫動物向其他動物傳播的能力接種動物后，缺失株對動物的毒力降低，對免疫豬產(chǎn)生了相當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)力，安全有效。

1.3 PK基因缺失疫苗

構(gòu)建PK缺失株，對家兔、小鼠及仔豬的毒力極大下降，免疫后對仔豬有一定的保護(hù)力，比TK、gE缺失株的效果好，效果與油苗相當(dāng)。

1.4 RR基因缺失疫苗

利用PRV NIA-3株構(gòu)建RR基因缺失株，免疫豬后可減少排毒量，產(chǎn)生一定水平的中和抗體，能保護(hù)豬耐受強(qiáng)毒的攻擊，還可以作為進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞的基因載體。

2 雙基因和多基因缺失苗

2.1 TK-/gE-雙基因缺失苗

以NIA-4株為親本，構(gòu)建了TK/gE雙基因缺失株，該疫苗免疫動物后不產(chǎn)生潛伏感染，對豬、牛、羊均安全。Kritas等構(gòu)建的雙缺失株，免疫豬后排毒量明顯減少，能提供免疫保護(hù)力，且不引起豬生長遲緩。gE/TK雙基因的缺失使PRV的毒力顯著降低，且gE基因還可用于疫苗接種和野毒感染的鑒別診斷，因此在世界范圍內(nèi)得到了廣泛應(yīng)用。

2.2 TK-/gC-雙基因缺失苗

在PRV BUK-d13株的基礎(chǔ)上，缺失gC基因片段，構(gòu)建成了TK-/gC-疫苗株，可使用gC-ELISA方法鑒別野毒感染和疫苗接種動物。

2.3 TK-/gG-雙基因缺失苗

利用缺失TK基因的HR株構(gòu)建TK/gG 雙基因缺失株，毒株對小鼠、綿羊和豬無致病性，對牛有中等毒性，對犬、貓的毒性稍強(qiáng)。免疫小鼠和豬后，均能抵抗強(qiáng)毒的攻擊，利用gG-ELISA方法可以區(qū)分野毒感染與疫苗接種。華中農(nóng)業(yè)大學(xué)構(gòu)建的TK-/gG-/ Lacz+突變株，大大降低了病毒毒力，免疫動物后同樣能抵抗強(qiáng)毒的攻擊。由于以gE糖蛋白為靶的ELISA檢測方法比gG-ELISA方法靈敏度更高，TK/gE雙缺失疫苗應(yīng)用較為普及。

2.4 PK-/gG-雙基因缺失苗

以PRV SH株構(gòu)建PK/gG雙基因缺失株，動物試驗(yàn)表明，該毒株對家兔的毒力下降，接對仔豬安全有效，不出現(xiàn)呼吸困難、體溫升高等臨床癥狀，免疫后仔豬體內(nèi)能產(chǎn)生一定滴度中和抗體，具有較好的保護(hù)效果。

2.5 TK-/gE-/gI-三基因缺失苗

以國內(nèi)流行株Fa株，成功構(gòu)建了TK-/gE-/gI-三基因缺失株，即SA215株，成為我國第一株動物病毒基因工程疫苗。該疫苗株具有良好的遺傳穩(wěn)定性，不散毒，安全可靠，抗?jié)摲芰O強(qiáng)，免疫效果優(yōu)于常規(guī)活疫苗。

2.6 TK-/gE-/gG-三基因缺失苗

以鄂A株為母本病毒，研發(fā)出PRV TK-/gE-/gG-三基因缺失株（HB-98株），缺失了TK基因，不存在毒力返強(qiáng)的風(fēng)險，同時缺失gG基因，增強(qiáng)了體液免疫及細(xì)胞免疫反應(yīng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫因子及α、β干擾素。

2.7 gC-/gE-/gI-/gG-四基因缺失苗

構(gòu)建了gC-/gE-/gI-/gG-四基因缺失株，免疫6周齡小豬后，仔豬無不良反應(yīng)，對攻毒仔豬也具有良好保護(hù)作用。

2.8 gD-/gE-/gI-/gG-四基因缺失苗

通過已整合PRV gD的細(xì)胞系，構(gòu)建了gD-/gE-/gI-/gG-四基因缺失株，豬的毒力大大降低，免疫后豬只不散毒，且能刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性免疫。

總的來說，PRV基因缺失標(biāo)記疫苗是目前應(yīng)用最為成功的動物標(biāo)記疫苗之一，此類疫苗免疫動物后，可以結(jié)合血清學(xué)方法鑒別野毒感染或疫苗免疫，在PR的根除計劃中發(fā)揮了重要作用。

[1] 殷震，劉景華.動物病毒學(xué)（第二版）[M].北京：科學(xué)出版社，1997：998-1009.

[2] 陳陸，郭萬柱，殷華平，等.偽狂犬病毒基因缺失疫苗制苗用毒種特性研究[J].中國病毒學(xué)，2005，20（2）：130-134.