咸 文，梁海英，曾智勇

（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

豬圓環(huán)病毒3型在韓國(guó)豬群中的流行狀況調(diào)查

咸 文，梁海英，曾智勇

（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus， PCV）是環(huán)狀病毒科圓環(huán)病毒屬的無(wú)囊膜病毒，基因組為單股環(huán)狀DNA。眾所周知，豬圓環(huán)病毒1型（PCV1）和豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）對(duì)均豬具有感染性。但是，最早被鑒定為PK-15細(xì)胞污染物的PCV1已知對(duì)豬是無(wú)致病性的，而PCV2感染則可導(dǎo)致諸如斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS），豬皮炎與腎病綜合征（PDNS）及種豬繁殖障礙等多種與豬圓環(huán)病毒2型相關(guān)疾病（PCVAD），使養(yǎng)豬業(yè)遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。在韓國(guó)，PCV2于1999年從具有PMWS的樣品中被首次鑒定報(bào)道，現(xiàn)已成為韓國(guó)豬群中普遍存在的病原之一。

最近，利用宏基因組學(xué)方法，在具有PDNS和繁殖障礙的臨床病例中，鑒定出一種被稱為豬圓環(huán)病毒3型（PCV3）的新型豬圓環(huán)病毒。此外，PCV3在患心臟和多系統(tǒng)炎癥的病豬中也可被檢測(cè)到。盡管對(duì)PCV3的關(guān)注越來(lái)越多，但目前在韓國(guó)對(duì)這種病毒的分布情況知之甚少。本研究擬對(duì)收集的口腔液樣品進(jìn)行PCR檢測(cè)，以確定PCV3在韓國(guó)的流行現(xiàn)狀和遺傳特征。

2016年，實(shí)驗(yàn)共隨機(jī)收集了源自6個(gè)地理省份的73個(gè)不同養(yǎng)殖規(guī)模（200～500頭母豬）的自繁自養(yǎng)豬場(chǎng)的共360管口腔液樣本（1管樣本約來(lái)自20頭豬），每個(gè)采樣豬場(chǎng)的臨床病史和疾病狀況未做調(diào)查。樣本被分為4組，即斷奶組（67/360），生長(zhǎng)組（136/360），成年組（124/360）和病豬組（33/360）。所有樣品分別以3 000 r/min離心10 min處理后，取上清液分裝保存于-80 ℃?zhèn)溆?。使用DNA提取試劑盒，分別提取-80℃保存?zhèn)溆玫目谇灰簶悠分械牟《綝NA。利用針對(duì)PCV3 ORF2的特異性引物，對(duì)提取的DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)，預(yù)擴(kuò)增大小為330 bp(Palinski et al.， 2017)。檢測(cè)結(jié)果顯示，在360管口腔液樣本中，159個(gè)樣本呈現(xiàn)PCV3病毒DNA陽(yáng)性（44.2%），72.6%（53/73）的豬場(chǎng)中存在PCV3病毒DNA，廣泛分布于韓國(guó)各省。四組中患病率最高的為病豬組，比例為51.5%；生長(zhǎng)組（42.6%）和成年組（41.1%）明顯低于斷奶組（49.3%）。

從9個(gè)不同豬場(chǎng)中選出PCV3強(qiáng)陽(yáng)性樣本，分別使用兩對(duì)PCV3特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增，共獲得了9個(gè)毒株（KU毒株）的全長(zhǎng)基因組（GenBank登錄號(hào) KY996337 ～ KY996345）， 大 小 與其他PCV3毒株相同均為2 000 bp，推導(dǎo)的 ORF2大小均為645 bp。序列分析結(jié)果表明，PCV3韓國(guó)毒株與美國(guó)毒株全基因序列相似性為98.9～99.8%，推導(dǎo)的ORF2的序列相似性為97.9～99.8%；PCV3韓國(guó)毒株之間的全基因序列相似性為99.0%～99.9%，ORF2的序列相似性為98.1%～100%；PCV3韓國(guó)毒株與美國(guó)毒株的Cap蛋白氨基酸序列相似性均為97.6～100%。系統(tǒng)發(fā)育分析顯示，韓國(guó)PCV3 病毒與美國(guó)和中國(guó)PCV3 病毒株密切相關(guān)。在這兩個(gè)系統(tǒng)發(fā)育中，韓國(guó)PCV3毒株是分散的，沒(méi)有任何基于國(guó)家的地理關(guān)聯(lián)。

PCV3是最近在豬場(chǎng)中出現(xiàn)的一種豬的新型病毒，其感染的豬表現(xiàn)出PDNS和繁殖障礙等臨床癥狀；尤其是經(jīng)過(guò)宏基因組測(cè)序顯示，只有PCV3能從流產(chǎn)胎兒中被檢測(cè)出來(lái) (Phan et al.， 2016； Palinski et al.， 2017)。 在韓國(guó)也出現(xiàn)了類似情況，即從發(fā)生繁殖障礙的豬場(chǎng)中獲得的流產(chǎn)胎兒，經(jīng)檢測(cè)僅從樣本中發(fā)現(xiàn)有PCV3，卻未檢測(cè)到任何與流產(chǎn)相關(guān)的其他病原體。據(jù)報(bào)道，在中國(guó)PCV3也是在繁殖障礙豬群及新生仔豬急性死亡中唯一能檢測(cè)到的病原體（Ku et al，2017）。這些報(bào)道表明，PCV3與繁殖障礙之間可能存在關(guān)系。雖然尚未在豬細(xì)胞系中分離獲得PCV3（Palinski et al，2017），但通過(guò)建立一個(gè)能在體外分離獲得病毒的體系來(lái)研究PCV3的發(fā)病機(jī)理，不失為一個(gè)新的研究方向。

本研究擴(kuò)大了對(duì)PCV3分布和遺傳特征的認(rèn)識(shí)，PCV3在韓國(guó)豬群中廣泛分布，病豬群樣本檢出率最高。在韓國(guó)，PCV3在豬群和豬場(chǎng)的陽(yáng)性檢出率，明顯高于此前中國(guó)豬群（34.7%，77/222）和豬場(chǎng)（68.6%，24/35）的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果（Ku et al，2017），這可能與口腔液樣品采集方法更具廣泛性有關(guān)，其是評(píng)估豬群健康狀況的有效方法。遺傳進(jìn)化分析表明，PCV3毒株間的基因組成高度相似，然而也發(fā)現(xiàn)了較小的遺傳多樣性。由于PCV2疫苗效果在一定程度上體現(xiàn)了PCV2的臨床意義，雖然PCV3的臨床意義尚未明確，但還需通過(guò)各種方法進(jìn)行臨床觀察及實(shí)驗(yàn)研究，以確定PCV3與臨床表現(xiàn)之間的關(guān)聯(lián)。

摘譯自 Taeyong Kwon 等 ， Veterinary Microbiology．2017，207：178-180

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“豬圓環(huán)病毒iDNA標(biāo)記疫苗及其免疫應(yīng)答效果的研究”（項(xiàng)目批準(zhǔn)號(hào)31560688）作者簡(jiǎn)介：咸文（1992—），女，在讀碩士，研究方向：動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)。E-mail:572130309@qq.com

*通訊作者：曾智勇（1978—），男，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)研究，E-mail:zyzeng@gzu.edu.cn

2017-08-24）