胡耀芬

湖北省棗陽市第一人民醫(yī)院(棗陽441200)

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活血復(fù)方對腦缺血再灌注神經(jīng)細胞凋亡的影響*

胡耀芬

湖北省棗陽市第一人民醫(yī)院(棗陽441200)

目的：探究活血復(fù)方對腦缺血再灌注神經(jīng)細胞凋亡的影響。方法：建立大鼠腦缺血再灌注及神經(jīng)細胞凋亡模型，觀察大鼠神經(jīng)行為學(xué)改變，將尼莫地平作為對照組，觀察組活血復(fù)方對腦缺血再灌注神經(jīng)細胞凋亡的影響。結(jié)果：假手術(shù)組術(shù)后2 d、5 d大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分與缺血再灌注組、活血復(fù)方中劑量組、活血復(fù)方高劑量組及尼莫地平組對比，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；假手術(shù)組術(shù)后20 d大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分與缺血再灌注組、尼莫地平組對比，具有統(tǒng)計學(xué)差異，P<0.05；缺血再灌注組梗死面積占給梗死面積百分比為(19.27±2.29)%與活血復(fù)方低劑量組、活血復(fù)方中劑量組、活血復(fù)方高劑量組、尼莫地平組(P<0.05)；經(jīng)缺血再灌注后6 h，缺血再灌注組海馬神經(jīng)凋亡細胞數(shù)與假手術(shù)組比較顯著增多，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)?；钛獜?fù)方各劑量組凋亡細胞數(shù)與缺血再灌注組、尼莫地平組比較顯著減少，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)論：活血復(fù)方治療腦梗塞可有效可緩解缺血再灌注后神經(jīng)細胞凋亡，有效改善大鼠腦缺血再灌注模型的神經(jīng)行為癥狀。

隨著人們生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)的變化，腦血管疾病發(fā)病率不斷上升，在急性腦血管病中腦梗塞發(fā)病率約為75%左右，對人們生活質(zhì)量產(chǎn)生嚴重影響[1-2]。臨床上對于腦梗塞的治療尚未有重大突破。本研究中經(jīng)建立腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)模型，探究該方對腦缺血再灌注神經(jīng)細胞凋亡的影響。

材料與方法

1 動物及環(huán)境 選擇由上海實驗動物中心提供的SD雄性大鼠，體重為180～210g，平均體重為(190.3±7.3)g。環(huán)境即為SPF級動物實驗室，溫度維持在22～26℃，濕度維持在40～70%，每日光照明暗各12h，每隔4min通風(fēng)一次。

2 藥 物 活血復(fù)方配置為活血復(fù)方水煎劑，劑量為1.3g/kg，3.25g/kg為低劑量組，6.5g/kg為中劑量組，13.0g/kg為高劑量組，藥劑經(jīng)藥房鑒定后，于4℃條件下存放。 ②尼莫地平片，使用前將其用蒸餾水配置為1 mg/kg，研磨藥物加蒸餾水混合。

3 分 組 ①觀察組：選擇60只SD大鼠均分為6組，即假手術(shù)組，缺血再灌注組，活血復(fù)方低劑量組，活血復(fù)方中劑量組，活血復(fù)方高劑量組，尼莫地平組。假手術(shù)組、缺血再灌注組：造模術(shù)后每日上下午各2 ml蒸餾水灌胃，20 d。活血復(fù)方組：造模術(shù)后每日上下午各2 ml尼莫地平灌胃，20 d。尼莫地

平組：造模手術(shù)前后每日上下午各2 ml尼莫地平灌胃，20 d。六組經(jīng)進食后1 d給予造模手術(shù)，且術(shù)后20 d灌胃后斷頭取腦，給予大叔神經(jīng)性為評分及大腦梗死體積檢查。②對照組：選擇42只SD大鼠均分為6組，同觀察組。假手術(shù)組、缺血再灌注組：造模術(shù)前每日上下午各2 ml蒸餾水灌胃，20 d?；钛獜?fù)方組：造模術(shù)前每日上下午各2 ml尼莫地平灌胃，20 d。尼莫地平組：造模手術(shù)前后每日上下午各2 ml尼莫地平灌胃，20 d。六組均第20d灌胃后30 min給予造模手術(shù)，且手術(shù)復(fù)灌后斷頭取腦，給予細胞凋亡檢測。

4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件，且經(jīng)χ2與t檢驗，P<0.05表明差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 各組大鼠神經(jīng)行為評分對比 假手術(shù)組術(shù)后2 d、5 d大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分與缺血再灌注組、活血復(fù)方中劑量組、活血復(fù)方高劑量組及尼莫地平組對比，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；假手術(shù)組術(shù)后20d大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分與活血復(fù)方中劑量組、活血復(fù)方高劑量組對比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，與缺血再灌注組、尼莫地平組對比，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),見表1。

表1 各組大鼠神經(jīng)行為評分對比

2 各組大鼠大腦梗死面積對比 經(jīng)TTC染色正常組織即變現(xiàn)為玫瑰紅色，梗死組織為白色。缺血再灌注組梗死面積占給梗死面積百分比為(19.27±2.29)%與活血復(fù)方低劑量組為(13.20±1.33)%，活血復(fù)方中劑量組為(12.36±1.11)%，活血復(fù)方高劑量組為(12.24±1.13)%，尼莫地平組為(12.10±1.25)%對比，具有統(tǒng)計學(xué)差異，P<0.05，見表2。

表2 各組大鼠大腦梗死面積對比

3 缺血再灌注小鼠海馬神經(jīng)細胞凋亡細胞對比 假手術(shù)組大鼠大腦海馬的存在少量TUNEL染色陽性細胞，神經(jīng)元排列整齊，核仁清晰。缺血再灌注組大鼠大腦海馬TUNEL陽性細胞呈圓形，細胞核固縮，且于核內(nèi)現(xiàn)棕褐色TUNEL反應(yīng)產(chǎn)物，細胞核為半月狀。經(jīng)缺血再灌注后6h，缺血再灌注組海馬神經(jīng)凋亡細胞數(shù)與假手術(shù)組比較顯著增多，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。活血復(fù)方低劑量組、活血復(fù)方中劑量組、活血復(fù)方高劑量組凋亡細胞數(shù)與缺血再灌注組、尼莫地平組比較顯著減少，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),見表3。

表3 缺血再灌注小鼠海馬神經(jīng)細胞凋亡細胞對比

討 論

活血復(fù)方為治療動脈硬化的基礎(chǔ)方，該方可活血化瘀、益氣健脾，藥方組成包括黃芪、丹參、蒼術(shù)、白術(shù)、炙甘草、降香、生蒲黃[3-5]。其中黃芪可入脾肺經(jīng)，可益氣固表、活血止渴、利水消腫、托瘡生肌的功效；丹參可涼血消腫、活血化瘀、養(yǎng)血安神等功效，可控制血壓，增加冠脈流量，抑制血小板聚集[6-7]；蒼術(shù)可治濕阻脾胃，解郁，祛風(fēng)除濕、化陰解凝，具有明顯抗凝血酶作用，顯著延長凝血時間[8-9]；白術(shù)可燥濕和中、益氣健脾，不但可免疫調(diào)節(jié)，還可有效抗氧化，促進機體清除自由基，控制自由基損傷機體。整體看，該方可益氣活血、調(diào)氣運脾，延緩腦部血管衰老[10-13]。

本實驗研究中，建立大鼠腦缺血再灌注及神經(jīng)細胞凋亡模型，觀察大鼠神經(jīng)行為學(xué)改變，將尼莫地平作為對照組，觀察組活血復(fù)方對腦缺血再灌注神經(jīng)細胞凋亡的影響。結(jié)果顯示，假手術(shù)組術(shù)后20d大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分與缺血再灌注組、尼莫地平組對比，具有統(tǒng)計學(xué)差異，缺血再灌注組梗死面積占給梗死面積百分比為(19.27±2.29)%與活血復(fù)方低劑量組、活血復(fù)方中劑量組、活血復(fù)方高劑量組、尼莫地平組；經(jīng)缺血再灌注后6h，缺血再灌注組海馬神經(jīng)凋亡細胞數(shù)與假手術(shù)組比較顯著增多，具有統(tǒng)計學(xué)差異?；钛獜?fù)方低劑量組、活血復(fù)方中劑量組、活血復(fù)方高劑量組凋亡細胞數(shù)與缺血再灌注組、尼莫地平組比較顯著減少，具有統(tǒng)計學(xué)差異。

綜上所述，活血復(fù)方治療腦梗塞可有效改善患者臨床癥狀，改善神經(jīng)功能缺損，改善血液流變學(xué)指標；且其可緩解缺血再灌注后神經(jīng)細胞凋亡，有效改善大鼠腦缺血再灌注模型的神經(jīng)行為癥狀。

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(收稿：2016-08-17)

*湖北省衛(wèi)計委科研資助項目(WJ2015MB116)

腦梗塞 @活血復(fù)方 動物 ，實驗 大鼠

R743.31

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10.3969/j.issn.1000-7369.2017.01.063