方萍 顏春榮

（江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，江蘇南京210008）

·食品分析·

QuEChERS結(jié)合氣相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法測定動(dòng)植物混合型食品中多種農(nóng)藥殘留*

方萍**顏春榮

（江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，江蘇南京210008）

現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，極大地促進(jìn)了方便食品加工業(yè)的發(fā)展，動(dòng)植物混合型食品越來越受人們的歡迎。隨著人們對食品安全意識的增強(qiáng)，水餃、方便菜肴等食品中的農(nóng)藥殘留也越來越多地受到重視。目前農(nóng)藥殘留檢測研究大多集中在單一基質(zhì)中，針對動(dòng)植物混合型食品中農(nóng)藥殘留檢測的研究報(bào)道鮮見。由于動(dòng)植物混合性食品中既含有動(dòng)物性脂肪和蛋白，又含有調(diào)味料、色素、香精香料等物質(zhì)，基質(zhì)非常復(fù)雜，給檢測工作帶來挑戰(zhàn)。

自2003年美國化學(xué)家提出QuEChERS法之后，該方法因其高效、簡便、快速、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，被很快應(yīng)用于食品中農(nóng)藥殘留的分析，在縮短分析時(shí)間方面優(yōu)勢顯著。三重串聯(lián)四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（GC-MS/MS），是在GC-MS的基礎(chǔ)上增加了二級子離子的質(zhì)譜信息，增強(qiáng)了結(jié)構(gòu)解析和定性能力。本研究選取動(dòng)植物混合型食品中7種常見農(nóng)藥殘留為對象，建立其氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜農(nóng)藥殘留檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

7200三重串聯(lián)四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀，美國Agilent公司；T18型均質(zhì)器，德國IKA公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，德國IKA公司；低速離心機(jī)，熱電公司。

乙腈、正己烷、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷，均為色譜純，購自Tedia公司；無水硫酸鈉，分析純，上海化學(xué)試劑廠，650℃灼燒4 h后，置于干燥器中備用；Mili-Q高純水，美國Millipore公司；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液，純度≥95%，北京百靈威公司。

1.2 樣品處理方法

1.2.1 樣品提取

速凍菜肉水餃經(jīng)室溫化凍后，稱取500 g樣品于粉碎機(jī)中絞碎。準(zhǔn)確稱取20 g攪拌均勻的樣品于80 mL離心管中，加入40 mL 15∶85乙酸乙酯-乙腈混合溶劑，用均質(zhì)器以15 000 r/min勻漿提取1 min后，加入5 g氯化鈉，再次勻漿提取1 min，以4 200 r/min離心5 min，取離心上清液20 mL（相當(dāng)于10 g的樣品重量）至塑料壓塞離心管中，加入6.0 g無水硫酸鎂，旋渦混合后離心，取上清液，轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，待凈化。

1.2.2 樣品凈化

向離心管中加入0.5 g的PSA粉末、5.0 g無水硫酸鎂、0.3 g的石墨化炭黑，旋渦混合后4 000 r/min離心5 min，取上清液，經(jīng)無水硫酸鎂柱濾到快速濃縮瓶中，在40℃真空下快速濃縮至近干。以1.0 mL的色譜純正己烷定容，旋渦混合后4 000 r/min離心2 min，上清液經(jīng)孔徑0.45 μm的有機(jī)相微孔濾膜過濾，供氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

1.3 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

1.3.1 氣相色譜條件

色譜柱：HP-5MS毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm ×0.25 μm）；色譜柱柱箱程序升溫模式：80℃保持1 min，然后以每分鐘25℃程序升溫至170℃，再以每分鐘6℃升溫至300℃，保持10 min；載氣：氦氣，純度≥99.999%；柱流速1.45 mL/min恒流模式；進(jìn)樣量：1 μL；進(jìn)樣口溫度：250℃；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。

1.3.2 質(zhì)譜條件

碰撞氣流速：氮?dú)?.5mL/min，氦氣2.5mL/min；離子源：電子轟擊源，70 eV;離子源溫度：230℃；掃描方式：正離子掃描；傳輸線溫度：280℃；檢測方式：MRM多反應(yīng)監(jiān)測；溶劑延遲：5.0 min。在多反應(yīng)監(jiān)測條件下，7種農(nóng)藥在串聯(lián)質(zhì)譜中的保留時(shí)間、定量離子對、定性離子對以及碰撞電壓見表1。

表1 多反應(yīng)監(jiān)測模式下7種農(nóng)藥的保留時(shí)間、監(jiān)測離子對和碰撞能量

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品提取方法優(yōu)化

動(dòng)植物混合食品的特點(diǎn)是基質(zhì)成分復(fù)雜，且樣品中農(nóng)藥品種和數(shù)量較多，極性差異較大，因此對樣品的前處理要求較高。本研究選擇二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈和丙酮4種提取試劑，經(jīng)添加回收試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用二氯甲烷提取后樣品的雜質(zhì)較多，對測定結(jié)果干擾大；用丙酮提取的樣品水分太多，增加了凈化難度和步驟。乙酸乙酯和乙腈的添加回收率能滿足要求，而乙腈提取的樣品雜質(zhì)更少，凈化更為簡便。在乙腈中添加少量乙酸乙酯可以提高極性較低農(nóng)藥的提取效率，高速勻漿可以使樣品充分破碎并能與試劑充分混合，與通常的索氏提取方式相比，提取時(shí)間短，提取效率高。故選擇乙酸乙酯-乙腈（15∶85）作為高速勻漿提取樣品中殘留農(nóng)藥的溶劑。

2.2 凈化方法的選擇

QuEChERS方法作為農(nóng)藥多殘留分析樣品前處理技術(shù)發(fā)展十分迅速，已經(jīng)日益廣泛應(yīng)用于植物源和動(dòng)物源性食品、農(nóng)產(chǎn)品、醫(yī)藥、獸藥、農(nóng)藥等檢測領(lǐng)域。該技術(shù)解決了傳統(tǒng)分析方法中存在的樣品前處理時(shí)間長，有毒溶劑使用量大，共存物易干擾定量、定性等問題。由于動(dòng)植物混合食品中脂肪酸含量較高，同時(shí)含有植物性的葉綠素、胡蘿卜素和香辛料，本研究優(yōu)化了動(dòng)植物混合食品中農(nóng)藥殘留的QuEChERS凈化法，采用石墨化炭黑，能有效吸附各種食品、蔬菜和水果中的色素，對各種極性分析物具有更廣泛的保留范圍，且容易洗脫，可以改善多種農(nóng)藥殘留的分析結(jié)果。本試驗(yàn)考察了加入不同量的石墨化炭黑（0.1 g、0.2 g、0.3 g、0.5 g）對回收率的影響，得到回收率在石墨化炭黑添加量為0.3 g時(shí)最高，因此確定加入0.3 g石墨化炭黑。同時(shí)，利用了PSA與NH2相似的吸附性能，可以有效地去除基質(zhì)中的脂肪酸、有機(jī)酸和糖等雜質(zhì)。試驗(yàn)還考察了不同PSA粉末的用量對回收率的影響，在分別添加0.1 g、0.2 g、0.3 g、0.5 g PSA粉末時(shí)，得到添加0.5 g PSA粉末時(shí)的回收率最高，因此選擇添加0.5 gPSA粉末進(jìn)行提取。

2.3 線性范圍和檢出限

按1.2.2試驗(yàn)步驟制取樣品的空白基質(zhì)提取液，加入7種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)液，配制質(zhì)量濃度分別為10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L的農(nóng)藥基質(zhì)加標(biāo)溶液，在1.3的分析條件下進(jìn)行測定，分別得到7種農(nóng)藥在基質(zhì)中的質(zhì)譜圖（圖略）。以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)作圖，得到的7種農(nóng)藥的線回歸方程、線性范圍和線性相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見表2。結(jié)果表明檢測低限最低可以達(dá)到1.0 μg/kg。

表2 7種農(nóng)藥的線性回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)

2.4 方法的回收率和精密度

在空白樣品中加入0.10 mg/kg的7種農(nóng)藥混標(biāo)，取5組平行樣，按1.2.2中的試驗(yàn)步驟和1.3中分析條件，進(jìn)行精密度和回收率測定，結(jié)果見表3。從表3可以看出，添加回收率為67.2%～118.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為5.2%～16.3%（n=5）。分析結(jié)果表明本方法有很好的重現(xiàn)性。

表3 7種農(nóng)藥混標(biāo)的檢測回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

3 結(jié)論

本文通過對提取方式的選擇和對QuEChERS凈化法的優(yōu)化，建立了用乙酸乙酯-乙腈（15∶85）混合溶劑高速勻漿提取樣品中的殘留農(nóng)藥，加入氯化鈉鹽析離心，添加0.3 g石墨化炭黑、0.5 g PSA粉凈化，利用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定7種農(nóng)藥殘留的檢測方法。該方法操作簡單快捷，靈敏度高，重現(xiàn)性好，回收率高，可用于動(dòng)植物混合型食品中7種常見農(nóng)藥殘留的檢測。

［1］盧大勝，熊麗蓓，溫憶敏，等.QuEChERS前處理方法聯(lián)合GPC-GC／MS在測定蔬菜水果農(nóng)藥殘留中的應(yīng)用［J］.質(zhì)譜學(xué)報(bào)，2011，32（4）：229-235.

［2］佟玲，李重九.含硫蔬菜中50種農(nóng)藥多殘留的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測技術(shù)研究［J］.分析測試學(xué)報(bào)，2008，27（9）：930-935.

［3］NASTASSIADES M，LEHOTAY S J，STAJNBAHER D. Quick，easy，cheap，effective，rugged，and safe（QuEChERS）approach for the determination of pesticide residues［G］. 18th Annual Waste Testing and Quality Assurance Symposium Proceedings，2002：231-241.

［4］CHEN Z L，ZHANG H，LIU B，et al．Determination of Herbicide Residues in Garlic by GC-MS［J］.J Chromataogr A，2007，66：887-891.

［5］王雯雯，劉暢.安捷倫7000三重串聯(lián)四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀一次進(jìn)樣同時(shí)檢測大蔥中170種農(nóng)藥殘留［J］.環(huán)境化學(xué)，2011，30（10）：1 824-1 827.

［6］周長民，徐宜宏，張侃.氣相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法測定圓蔥中134種農(nóng)藥的多殘留［J］.福建分析測試，2014，23（4）：5-15.

［7］劉滿滿，康澍，姚成.QuEChERS方法在農(nóng)藥多殘留檢測中的應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2013，15（1）：8-22.

Determination of multi-pesticide residues in mixed food derived from animal and vegetable by QuEChERS-Gas chromatography-tandem mass spectrometry*

FANGPing*YANChunrong
（Jiangsu food and drug supervision and inspection institute，Jiangsu Nanjing 210008，China）

建立了氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS）定量和定性檢測動(dòng)植物混合型食品中7種農(nóng)藥殘留量的方法。樣品中的待測農(nóng)藥組分經(jīng)乙腈-乙酸乙酯混合溶劑（85∶15，v/v）提取，采用改進(jìn)的QuEChERS法為凈化方法，以外標(biāo)法進(jìn)行定量，以氣相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS）多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）檢測。在動(dòng)植物混合性食品基質(zhì)中，以該方法檢測的大部分農(nóng)藥的線性范圍為0.01 μg/L～0.50 μg/L，檢測低限最低可以達(dá)到1.0 μg/kg，添加回收率為67.2%～118.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為5.2%～16.3%（n=6）。該方法的準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好、操作簡便，適用于動(dòng)植物混合型食品中多種農(nóng)藥殘留同時(shí)測定。

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS）；農(nóng)藥殘留；QuEChERS；動(dòng)植物混合型食品

A method was developed for the determination of 7 pesticide residues in mixed food derived from animal and vegetable by Gas chromatography-tandem mass spectrometry（GC-MS/MS）.The pesticides were extracted by mixed solvent of acetonitrile-ethyl acetate（15∶85,v/v）,and purified by modified QuEChERS.The pesticides were finally detected by GC-MS/MS with multiple reaction monitoring mode（MRM），external standard method for quantitative.In the range of 0.01 μg/L～0.5 μg/L，most of them showed good linear relationship.When spiked at 100 μg/kg, the average recovery rates of pesticides were 67.2%～118.6%with relative standard deviation(RSD)5.2%～16.3%.The method is accuracy and repeatable,with high sensitivity,simple operation,and suitable for simultaneous determination ofmultiple pesticide residues in mixed food.

gas chromatography-tandem mass spectrometry（GC-MS/MS）；pesticide residue；QuEChERS；mixed food derived from animal and vegetable

TS211.7

A

1673-6044（2016）04-0049-04

10.3969/j.issn.1673-6044.2016.04.013

江蘇省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（BE2015359）；江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局科技項(xiàng)目（KJ112505）。

**方萍，女，1978年出生，2005年畢業(yè)于中國人民解放軍炮兵學(xué)院南京分院食品安全監(jiān)管專業(yè)，工程師。

2016-09-30

2016-11-16