肖晉軍

Aurora kinases在宮頸癌發(fā)病機(jī)制中的探索

肖晉軍

目的 通過(guò)分析Aurora激酶A、B在正常宮頸組織，CIN及宮頸癌組織中的表達(dá)，探討Aurora激酶A、B在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 （1）選取深圳市30例宮頸癌患者，我院CIN患者30例，宮頸健康者30例，并取組織標(biāo)本作研究。（2）采用熒光定量法測(cè)定Aurora激酶A、B在不同宮頸組織的表達(dá)及與HPV16、、HPV18感染關(guān)系。（3）采用細(xì)胞儀分析30例宮頸癌患者組織標(biāo)本中Aurora激酶A、B在表達(dá)與不表達(dá)時(shí)細(xì)胞的增殖率，凋亡率，并對(duì)患者采用化療藥物順鉑治療后觀察癌細(xì)胞的增殖率，凋亡率。結(jié)果 HPV16、HPV18及Aurora激酶在正常宮頸組織中的表達(dá)情況較低，HPV16、HPV18在宮頸癌中表達(dá)情況極高，表達(dá)率分別為96．67%、100．00%，CIN中表達(dá)其次，表達(dá)率分別為66．67%、70．00%，約占致癌型別的70%左右，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。Aurora激酶A在宮頸癌組織標(biāo)本存在高表達(dá)，Aurora激酶B高表達(dá)與腫瘤的惡性侵襲相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。觀察組宮頸癌細(xì)胞中Aurora激酶A、Aurora激酶B表達(dá)情況低于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。對(duì)宮頸癌患者采用Aurora激酶抑制劑VX-680或化療藥物順鉑治療后，癌細(xì)胞的增殖率顯著下降、凋亡率顯著升高，Aurora激酶未表達(dá)組癌細(xì)胞增殖率低于表達(dá)組、凋亡率高于表達(dá)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。結(jié)論 Aurora激酶在女性宮頸癌細(xì)胞中存在顯著高表達(dá)的現(xiàn)象,通過(guò)對(duì)宮頸癌患者采用Aurora激酶抑制劑VX-680或化療藥物順鉑治療后，宮頸癌細(xì)胞的增殖率顯著下降、凋亡率顯著升高。

Aurora激酶；HPV；宮頸癌

宮頸癌作為常見(jiàn)婦科惡性腫瘤疾病的一種，由宮頸病變進(jìn)一步發(fā)展所致，分為宮頸上皮內(nèi)瘤變和浸潤(rùn)癌，嚴(yán)重危及患者的生命[1]。有研究表明[2]，高危型人乳頭瘤病毒（HPV）感染時(shí)誘發(fā)宮頸癌及宮頸癌前病變的主要原因。Aurora kinases（Aurora激酶）家族是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，有研究表明宮頸癌變患者的Aurora激酶存在明顯DNA擴(kuò)增，RNA基因蛋白水平也顯著增高[3-4]。本研究為進(jìn)一步探索分析Aurora kinases在宮頸癌中發(fā)病機(jī)制，選取宮頸癌標(biāo)本、CIN組織及正常宮頸組織納入本次研究，分析后現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.2 方法

采用熒光定量FQ-PCR法檢測(cè)HPV16、HPV18在不同宮頸組織（宮頸癌、CIN及正常宮頸）的表達(dá)，應(yīng)用杭州Linegene熒光定量PCR檢測(cè)儀對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行HPVDNA定性檢測(cè)，HPV-16、HPV-18型檢測(cè)按照試劑盒（S20040032，深圳匹配生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，比較宮頸癌、CIN及正常宮頸之間表達(dá)的差異。另采用免疫組化檢測(cè)Aurora激酶A、Aurora激酶B在不同宮頸組織的表達(dá)，觀察分析Aurora激酶A、Aurora激酶B在不同宮頸組織的表達(dá)及與HPV16、HPV18感染的關(guān)系。

將選取的30例宮頸癌患者中分為觀察組、對(duì)照組，每組各15例，采用Aurora激酶抑制劑VX-680進(jìn)行治療的設(shè)為觀察組，未采用Aurora激酶抑制劑VX-680進(jìn)行治療的設(shè)為對(duì)照組，采用Western-blot檢測(cè)兩組中宮頸癌細(xì)胞中Aurora激酶A和Aurora激酶B表達(dá)的差異，通過(guò)流式細(xì)胞儀，采用流式細(xì)胞儀分析宮頸癌細(xì)胞中Aurora激酶A、B在表達(dá)與不表達(dá)時(shí)細(xì)胞的增殖率，凋亡率，采用宮頸癌Elisa試劑盒（Human nasopharyngeal carcinoma，NPC ELISA試劑盒）說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。再將兩組宮頸癌標(biāo)本用化療藥物順鉑處理后，通過(guò)流式細(xì)胞儀觀察Aurora激酶表達(dá)與不表達(dá)情況下宮頸癌細(xì)胞的增殖率，凋亡率，對(duì)比分析Aurora激酶受抑制后癌細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性的不同。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

（1）比較宮頸癌、CIN及正常宮頸組織標(biāo)本HPV16、HPV18的表達(dá)情況之間的差異，同時(shí)觀察分析Aurora激酶A、Aurora激酶B在不同宮頸組織的表達(dá)及與HPV16、HPV18感染的關(guān)系。

（2）觀察比較加入Aurora激酶抑制劑VX-680及未加入Aurora激酶抑制劑VX-680兩種情況下，宮頸癌細(xì)胞中Aurora激酶A和Aurora激酶B的表達(dá)情況。

（3）分析宮頸癌細(xì)胞中Aurora激酶A、B在表達(dá)與不表達(dá)時(shí)細(xì)胞的增殖率，凋亡率，對(duì)比分析Aurora激酶受抑制后癌細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性的差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

落實(shí)建筑行業(yè)項(xiàng)目管理機(jī)制，綜合考慮項(xiàng)目登記的建筑業(yè)工程，能夠準(zhǔn)確掌握建筑項(xiàng)目的進(jìn)度，并對(duì)項(xiàng)目本身的申報(bào)納稅狀況以及開(kāi)具發(fā)票的情況進(jìn)行有效監(jiān)控。但是，增值稅管理模式是將納稅人作為主體，綜合考慮機(jī)構(gòu)所在區(qū)域的納稅基本原則，而所在區(qū)域的國(guó)稅機(jī)關(guān)要負(fù)責(zé)構(gòu)建相應(yīng)的監(jiān)控機(jī)制。但這種方式已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了現(xiàn)階段增值稅管理的范圍，直接增加了稅務(wù)機(jī)關(guān)的工作難度，很難對(duì)異地工程項(xiàng)目信息進(jìn)行有效掌握，進(jìn)而引發(fā)了虛開(kāi)發(fā)票或增加了稅源流失風(fēng)險(xiǎn)，直接制約了建筑行業(yè)稅收征管工作的開(kāi)展。

所收集數(shù)據(jù)采用SPSS 18.00進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)及Fisher精確概率法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌、CIN及正常宮頸組織標(biāo)本HPV16、HPV18的表達(dá)情況之間的差異

HPV16、HPV18及Aurora激酶在正常宮頸組織中的表達(dá)情況較低，HPV16、HPV18在宮頸癌中表達(dá)情況最高，CIN中表達(dá)其次，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Aurora激酶A在宮頸癌組織標(biāo)本存在高表達(dá)，Aurora激酶 B 高表達(dá)與腫瘤的惡性侵襲相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 宮頸癌細(xì)胞中Aurora激酶的表達(dá)情況

觀察組宮頸癌細(xì)胞中Aurora激酶A表達(dá)率（40.00%）、Aurora激酶B表達(dá)率（33.33%）明顯低于對(duì)照組（86.67%、93.33%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.167 5、9.186 6，P=0.023 0、0.002 4）。

2.3 宮頸癌細(xì)胞在Aurora激酶的表達(dá)與否情況下的增殖率、凋亡率

對(duì)宮頸癌患者采取Aurora激酶抑制劑VX-680或采用標(biāo)本用化療藥物順鉑進(jìn)行治療后，癌細(xì)胞的增殖率顯著下降、凋亡率顯著升高，Aurora激酶未表達(dá)組癌細(xì)胞增殖率低于表達(dá)組、凋亡率高于表達(dá)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 宮頸癌、CIN及正常宮頸組織標(biāo)本HPV16、HPV18的表達(dá)情況之間的差異

我市女性人口比例很大，宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)第二大惡性腫瘤，近年來(lái)其發(fā)病呈年輕化趨勢(shì)。每年有近50萬(wàn)新發(fā)病例，宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，癌變發(fā)展的危險(xiǎn)性隨著CIN的發(fā)展而升高[5]。有研究顯示[6]，宮頸癌變患者的Aurora激酶存在明顯DNA擴(kuò)增，Aurora激酶與宮頸癌發(fā)病機(jī)制具有一定聯(lián)系。

研究結(jié)果顯示，HPV16、HPV18及Aurora激酶在正常宮頸組織中的表達(dá)情況較低，HPV16、HPV18在宮頸癌中表達(dá)情況最高，CIN中表達(dá)其次，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Aurora激酶A在宮頸癌組織標(biāo)本存在高表達(dá)，Aurora激酶B高表達(dá)與腫瘤的惡性侵襲相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Aurora激酶A、Aurora激酶B作為Aurora激酶家的成員，在不同的模式生物中，結(jié)構(gòu)和功能高度保守。近年來(lái)，隨著極光激酶相關(guān)研究的不斷深入，人們逐漸認(rèn)識(shí)到極光激酶在細(xì)胞有絲分裂以及腫瘤形成中的重要功能[7]。在細(xì)胞有絲分裂中, 極光激酶參與了諸如中心體成熟分離、紡錘體組裝和維持、染色體分離以及胞質(zhì)分裂等多個(gè)事件[8]。通過(guò)本次研究，用數(shù)據(jù)證明Aurora激酶A、B在宮頸癌組織中高表達(dá)情況，這將成為宮頸癌早期診斷的生物學(xué)指標(biāo)。通過(guò)Aurora激酶A、B在宮頸癌組織中表達(dá)情況，結(jié)合目前現(xiàn)有HPV檢測(cè)，這不但有效提高了宮頸癌的早期診斷率，還可產(chǎn)生檢驗(yàn)收益[9]。

3.2 宮頸癌細(xì)胞在Aurora激酶的表達(dá)與否情況下的增殖率、凋亡率

本研究對(duì)宮頸癌患者采用Aurora激酶抑制劑VX-680或化療藥物順鉑治療后，流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示癌細(xì)胞的增殖率顯著下降、凋亡率顯著升高，其中Aurora激酶的表達(dá)與否對(duì)癌細(xì)胞的增殖與凋亡情況有所影響，顯示通過(guò)抑制Aurora激酶表達(dá)與順鉑治療，可以加速宮頸癌細(xì)胞的凋亡，這為臨床開(kāi)發(fā)新的宮頸癌治療手段提供新的思路[10]。

綜上所述，Aurora激酶在女性宮頸癌細(xì)胞中存在顯著高表達(dá)的現(xiàn)象,屬于一種新的癌基因。通過(guò)對(duì)宮頸癌患者采用Aurora激酶抑制劑VX-680或化療藥物順鉑治療后，宮頸癌的增殖率顯著下降、凋亡率顯著升高，這為臨床開(kāi)發(fā)新的宮頸癌治療手段提供新的思路。

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Study on the Pathogenesis of Aurora Kinases in Cervical Cancer

XIAO Jinjun Shenzhen Xili People's Hospital of Nanshan District, ShenzhenGuangdong 518000, China

Objective To investigate the expression of Aurora kinase A and B in normal cervical tissues, CIN and cervical cancer tissues, and to explore the role of Aurora kinase A and B in the genesis and development of cervical carcinoma. Methods A total of 30 patients with cervical cancer in Shenzhen were selected, and a total of CIN patients in our hospital in were selected, and a total of 30 patients with cervical cancer were enrolled in this study. Fluorescence quantitative method was used to detect the expression of Aurora kinase A and B in different cervical tissues and the relationship with HPV16, HPV18 infection. The FCM analysis of 30 cases of patients with cervical cancer tissue specimens of Aurora kinase A, B expression and the expression of cell proliferation rate, apoptosis rate, and for patients with cisplatin was observed after treatment of cancer cell proliferation rate, apoptosis rate. Results The expression of HPV16, HPV18 and Aurora kinase in normal cervical tissues. The low expression of high HPV16 and HPV18 in cervical cancer, the expression rates were 96.67%, 100.00%, followed by the expression of CIN, expression rates were 66.67%, 70.00%, accounting for about 70% of the left and right type of cancer, the difference was statistically significant (P＜ 0.05). Aurora kinase A was highly expressed in cervical cancer tissues, and the high expression of Aurora kinase B was associated with malignant invasion of tumor. The difference was statistically significant (P ＜ 0.05). The expression of Aurora kinase A and Aurora kinase B in cervical cancer cells in the observation group was significantly lower than that in the control group, the difference was statistically significant (P＜ 0.05). For patients with cervical cancer by Aurora kinase inhibitor VX-680 or cisplatin treatment, cancer cell proliferation rate decreased significantly, the apoptosis rate was significantly increased, Aurora kinase expression group not cancer cell proliferation rate is lower than the expression group, apoptosis rate was higher than that of group, the differences were statisticallysignificant (P＜ 0.05). Conclusion Aurora kinase significantly high expression of the phenomenon in women cervical cancer cells, the cervical cancer patients with Aurora kinase inhibitor VX-680 or cisplatin treatment, cervical cancer cell proliferation rate decreased significantly, the apoptosis rate was significantly increased.

aurora kinase; HPV; cervical cancer

R361

A

1674-9316（2017）08-0122-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．08．075

廣東省深圳市南山區(qū)資助科技計(jì)劃區(qū)屬事業(yè)單位研發(fā)項(xiàng)目（2015055）

深圳市南山區(qū)西麗人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 深圳 518000