張華勝

561000安順市人民醫(yī)院

神經(jīng)病理性疼痛中背根神經(jīng)節(jié)交感神經(jīng)芽生的機制研究

張華勝

561000安順市人民醫(yī)院

目的：研究背根神經(jīng)節(jié)交感神經(jīng)芽生的機制。方法：選取成年雄性大鼠，隨機分為大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎模型組、糖皮質(zhì)激素大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎模型組、Normal+TA和Norml對照組4組。SNL+TA組和Normal+TA組的大鼠在建立大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎模型時需要在局部將20 μL TA懸液注射到背根神經(jīng)節(jié)處，對大鼠術(shù)后1、3、5、7 d的身體狀況進行觀察、研究。結(jié)果：將糖皮質(zhì)激素注射到脊神經(jīng)損傷的地方能夠有效地緩解痛覺過敏，同時有效降低背根神經(jīng)節(jié)交感神經(jīng)籃狀結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)，對背根神經(jīng)節(jié)的交感神經(jīng)芽生的損傷也明顯降低。結(jié)論：在早期運用脊神經(jīng)結(jié)扎模型時，背根神經(jīng)節(jié)交感神經(jīng)芽生的主要來源就是脊神經(jīng)背支。提前采用灰支手術(shù)比使用外科或者化學性切斷術(shù)能夠有效減少損傷，減輕機械性疼痛。

神經(jīng)病理性疼痛；糖皮質(zhì)激素；背根神經(jīng)節(jié)；交感神經(jīng)芽生

在20世紀70年代時，Wall和Gutnick經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)坐骨神經(jīng)損害后其神經(jīng)瘤病的病理機制：部分傳輸?shù)缴窠?jīng)元的自發(fā)性活動逐漸增多。傳輸?shù)幕顒硬粩鄬顾枭窠?jīng)元產(chǎn)生刺激。此外受損部分的背根神經(jīng)節(jié)對腎上腺素能激動劑具有極大的敏感性。研究表明，燒傷或刺痛這種持續(xù)的疼痛可能是由受損的外周神經(jīng)自發(fā)的情感沖動引起的；腎上腺素能交感神經(jīng)在神經(jīng)痛中可能會以某種方式促使神經(jīng)元之間建立聯(lián)系。自此開始，研究人員開始密切關(guān)注神經(jīng)病理性疼痛的機制。國際疼痛研究協(xié)會對于神經(jīng)病理性疼痛只是簡單地做出了界定，即神經(jīng)系統(tǒng)損傷或疾病影響軀體神經(jīng)系統(tǒng)的疼痛[1]。在神經(jīng)病理性疼痛中主要的特點就是自發(fā)性疼痛、痛覺過敏和超敏3種，普遍認為該病的發(fā)病機制主要分為外周和中樞兩部分。在外周機制中，神經(jīng)病理性疼痛具有重要的作用。另外神經(jīng)病理性疼痛出現(xiàn)的交感神經(jīng)出芽增生和損傷感傳入耦聯(lián)，也是DRG的主要特點之一。本文對神經(jīng)病理性疼痛中交感神經(jīng)芽生的機制進行了研究，現(xiàn)報告如下。

材料與方法

動物：本文中使用的實驗對象為清潔級的成年雄性大鼠，體重均在210～260 g。每2只養(yǎng)在1個籠子內(nèi)，在籠子內(nèi)底部鋪設(shè)一層吸水軟層，確保室溫(22±0.5)℃，濕度保持在65%左右，采用24 h晝夜不間斷照明，大鼠可以自由地進食和飲水。進行研究前，采取上述飼養(yǎng)環(huán)境進行1周的飼養(yǎng)。本研究所涉及的動物飼養(yǎng)、使用和試驗皆符合國際標準。

麻醉方式：使用異氟醚吸入和戊巴比妥鈉腹腔注射液方式對大鼠進行麻醉處理[2]。

方法：①實驗動物及分組：根據(jù)痛閾值將所有大鼠劃分為大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎模型組、糖皮質(zhì)激素大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎模型組、Normal+TA和Normal對照組4組。②手術(shù)方法：將大鼠麻醉后，對其背部毛進行剃除，大鼠采用俯臥體的方式被放置在37℃的保溫毯上，對大鼠的四肢進行固定。使用乙醇和聚維酮碘溶液對皮膚進行清潔消毒，在距離背部中線1.5層面的地方實行右側(cè)縱向切口，切口應(yīng)該經(jīng)過大鼠髂嵴緣端水平位置，并在L5棘突的地方做定位處理。然后進行顯微鏡解剖，將關(guān)節(jié)突腹外側(cè)進行充分的暴露，解剖空間為L6橫突背側(cè)的位置，將解剖區(qū)的血液用棉簽吸收干凈，將L6上的橫突使用咬骨鉗進行移除，在移除過程中盡量避免對L4脊神經(jīng)造成損害，將L5處的神經(jīng)剪斷。然后進行止血和縫合處理。手術(shù)結(jié)束后，用保溫毯將其包裹直至蘇醒，在手術(shù)過程中均未使用抗生素。對接受手術(shù)的大鼠，在手術(shù)后的第1、3、5、7天時對背根神經(jīng)節(jié)交感神經(jīng)芽生采用免疫組織化學的方式進行檢測[3]。首先將大鼠麻醉、固定，使用灌注的方式將管道內(nèi)氣泡和物質(zhì)進行排出，在心臟位置剪開，使心臟完全暴露，插管從左心室進入主動脈，將插管固定好，使用右心耳為灌注液流出口。使用磷酸鹽緩沖液進行快速的沖洗，直至肝臟和心臟等器官變成白色，然后使用含有多聚甲醛的磷酸鹽溶液進行灌注，直到大鼠全身出現(xiàn)顫抖，再到肌顫消失。然后取出L5神經(jīng)節(jié)，進行明膠包埋過夜處理。然后在室溫為4℃的條件下，將樣品組織片孵化于酪氨酸羥化酶抗體，時間48 h，然后與生物素發(fā)生二抗反應(yīng)，最后進行試劑反應(yīng)處理。使用光學顯微鏡對載玻片上的神經(jīng)節(jié)樣本進行觀察，并進行拍攝記錄。

一般行為學觀察：對接受手術(shù)后的大鼠身體情況進行觀察。

結(jié) 果

將糖皮質(zhì)激素注射到脊神經(jīng)損傷的地方能夠有效緩解機械性痛覺過敏，同時有效減少背根神經(jīng)節(jié)交感神經(jīng)籃狀結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)，背根神經(jīng)節(jié)的交感神經(jīng)芽生的損傷也明顯減少。

討 論

背根神經(jīng)節(jié)交感神經(jīng)芽生發(fā)生的機制現(xiàn)在還無明確結(jié)論。但是，通過研究發(fā)現(xiàn)背根神經(jīng)節(jié)芽生可能存在的機制包括神經(jīng)元自發(fā)異常放電增加、炎性因子增加和營養(yǎng)因子形成等。

正常情況下的DRG神經(jīng)纖維很少出現(xiàn)自發(fā)放電現(xiàn)象。在神經(jīng)損傷、DRG壓縮或局部出現(xiàn)炎癥的情況下，神經(jīng)電生理學家對C纖維和β纖維自發(fā)放電顯著增加進行了記錄。交感神經(jīng)芽生會圍繞自發(fā)表達有害標記物的神經(jīng)元。自發(fā)放電也代表了神經(jīng)元中各種離子通道的數(shù)量或功能的變化。董成海等人指出，交感神經(jīng)芽生主要原因是來自于神經(jīng)損傷后自發(fā)異位電活動。

在慢性疼痛的產(chǎn)生因素中，炎性反應(yīng)也起著關(guān)鍵的作用。出現(xiàn)外周神經(jīng)損害時常會伴有致神經(jīng)病理性疼痛的炎癥出現(xiàn)。周圍神經(jīng)損傷后，感覺神經(jīng)元出現(xiàn)華勒氏變性，各種細胞因子的釋放，減少神經(jīng)元軸突和髓鞘變性，刺激新的軸突和擴展的產(chǎn)生。另一方面，炎性反應(yīng)圍繞著促進感覺神經(jīng)元與神經(jīng)膠質(zhì)細胞的激活。由于多種細胞因子參與其中，導(dǎo)致神經(jīng)元的異常自發(fā)放電。肖芳梅等使用DRG炎癥模型研究引起的疼痛[4]，發(fā)現(xiàn)許多細胞因子表達量在不同的時間窗有顯著的變化；炎癥組的大鼠出現(xiàn)過敏和疼痛，在手術(shù)后3～7 d為最高值，持續(xù)時間4個星期。

衛(wèi)星膠質(zhì)細胞的神經(jīng)營養(yǎng)因子的形成也對交感神經(jīng)芽生的發(fā)育具有重要作用。葉海濤研究發(fā)現(xiàn)[5]，DRG神經(jīng)元在神經(jīng)損傷時衛(wèi)星膠質(zhì)細胞免疫染色陽性NT3和相應(yīng)的mRNA NGF含量增加，本身并不是合成NGF和DRG神經(jīng)元；抗體治療的應(yīng)用神經(jīng)生長因子NGF和NT-3可以顯著減少交感芽生的數(shù)量。其他研究表明，BDNF和LIF也有助于DRG交感神經(jīng)芽生。

神經(jīng)病變在模型建立后，交感神經(jīng)出芽并且包繞的神經(jīng)元增生現(xiàn)象是客觀普遍存在的情況，其與神經(jīng)性疼痛的關(guān)系也得到了證實。臨床應(yīng)用有效劑量的皮質(zhì)類固醇，局部麻醉藥通過神經(jīng)阻滯治療，可能是治療神經(jīng)性疼痛的一種良好的早期治療方法。

[1]曲玉娟.TRPV4-MAPK通路在大鼠背根神經(jīng)節(jié)持續(xù)受壓致神經(jīng)病理性疼痛中的作用機制研究[D].山東大學,2016.

[2]張春玲,任幼紅.彌可保對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠背根神經(jīng)節(jié)Nav1.7表達的影響[J].中國實用神經(jīng)疾病雜志,2016,19(11)：36-38.

[3]黃云,張廣欽.神經(jīng)病理性疼痛小鼠背根神經(jīng)節(jié)河豚毒素敏感型鈉電流的變化特征[J].安徽醫(yī)藥,2016,20(2)：232-235.

[4]肖芳梅,田承浩.淺議神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)病機制[J].飲食保健,2017,4(4)：13-15.

[5]葉海濤.交感神經(jīng)、炎性細胞因子與神經(jīng)病理性疼痛的關(guān)系[J].中國微侵襲神經(jīng)外科雜志,2017,22(2)：91-93.

Study on the mechanism of sympathetic sprouting in dorsal root ganglion in neuropathic pain

Zhang Huasheng
The People's Hospital of Anshun City 561000

Objective：To study the mechanism of sympathetic sprouting in dorsal root ganglion in neuropathic pain.Methods：Adult male rats were selected.The rats were divided into 4 groups：the spinal nerve ligation model group,the glucocorticoid rats spinal nerve ligation model group,the Normal+TA group and the norml control group.Rats in the group SNL+TA and the Normal+TA group were required to inject 20 mu LTA suspension into the dorsal root ganglion at the time of establishment of the spinal nerve ligation model in rats.The body condition of rats at 1,3,5 and 7 days after operation was observed and studied.Results：Injection of corticosteroids into spinal nerve injuries can effectively relieve mechanical pain and allergy,and effectively reduce the occurrence of sympathetic basket structures in dorsal root ganglia.The sympathetic sprouting of the dorsal root ganglion was also significantly reduced.Conclusion：When the spinal nerve ligation model was used in the early stage,the dorsal root ganglion was the main source of sympathetic sprouting,the dorsal ramus of the spinal nerve,surgical or chemical amputation is more effective in reducing injury and reducing mechanical pain when compared with anterior gray surgery.

Neuropathic pain;Glucocorticoids;Dorsal root ganglia;Sympathetic sprouting

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.24.1