王靜，李學(xué)濤，袁子民

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600

β-欖香烯納米聚合物膠束包封率、載藥量及釋藥性測定

王靜，李學(xué)濤，袁子民

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600

目的建立β-欖香烯納米聚合物膠束包封率和載藥量的RP-HPLC測定方法，并對其釋藥性進(jìn)行考察。方法以二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-PEG2000）為載體材料制備載藥膠束，采用石油醚萃取法測定包封率和載藥量，采用透析法對其釋藥性進(jìn)行研究。結(jié)果所制備的β-欖香烯納米聚合物膠束平均包封率為89.47％，平均載藥量為8.33％，體外釋藥緩慢。結(jié)論包封率和載藥量的測定簡便、準(zhǔn)確，所制得的膠束具有緩釋作用。

β-欖香烯納米聚合物膠束；包封率；載藥量；釋藥性

欖香烯是臨床常用的中藥廣譜抗腫瘤藥物，該藥及其脂質(zhì)體注射液和口服乳制劑通過抗增殖和誘導(dǎo)凋亡作用，在體外及臨床用于腦膠質(zhì)瘤治療方面取得了較好治療效果，但也存在一定不良反應(yīng)[1-3]。β-欖香烯是由欖香烯經(jīng)精餾后去除γ、δ-欖香烯異構(gòu)體，得到的抗癌單體有效成分[4]。為增加β-欖香烯對血腦屏障的透過性及其載藥制劑在腫瘤組織的通透和滯留增強(qiáng)效應(yīng)，本課題組以二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（DSPE-PEG2000）為載體材料，將其制成抗腦膠質(zhì)瘤的新型腦靶向制劑，本研究對其包封率、載藥量進(jìn)行測定，并考察其體外釋藥性，為進(jìn)一步控制本品質(zhì)量、優(yōu)化制備工藝及其應(yīng)用提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），CENCO型渦旋儀（荷蘭Breda公司），RCZ-6B3型藥物溶出度儀（改裝為釋放溶出儀，上海黃海藥檢儀器有限公司），85-1型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（江蘇省金壇市友聯(lián)儀器研究所），透析袋（截留分子量8000～15 000，上海華藍(lán)生物科技有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52A（上海亞榮生化儀器廠）。

β-欖香烯原料藥（含量＞98％，自制），β-欖香烯對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100268-200401，供含量測定用），DSPE-PEG2000（上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司，批號20150922），甲醇為色譜純，其余均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 β-欖香烯納米聚合物膠束及空白膠束的制備

采用薄膜水化法制備。精密稱取處方量的DSPE-PEG2000載體材料100 mg、β-欖香烯原料藥10 mg，置于茄形瓶中，加10 mL甲醇溶解，搖勻，于35 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)真空干燥除去甲醇，在茄形瓶底部

pH 7.4磷酸鹽緩沖液（含0.5％十二烷基硫酸鈉）釋放介質(zhì)50 mL的燒杯中，于（37.0±0.5）℃恒溫水浴中振蕩（100 r/min），分別于0.5、1、2、4、6、8、10、12、24 h 取樣1 mL，過0.45 μm微孔濾膜，并補充同溫等量釋放介質(zhì)。平行操作3份。樣品用0.45 μm 微孔濾膜過濾，按“2.2.1”項下色譜條件，取濾液進(jìn)樣20 μL測定，計算累積釋放率及3份樣品各點的平均值，并繪制釋藥曲線，結(jié)果見圖2。從圖2中可知，在pH 7.4磷酸鹽緩沖液釋放介質(zhì)中，β-欖香烯原料藥溶液24 h內(nèi)幾乎完全釋放，而載藥膠束僅釋放70％左右，且0～2 h屬于突釋，之后釋放緩慢，表明該膠束具有緩釋性能，利于使藥物到達(dá)病灶部位的靶組織[7-10]。

圖2 載藥膠束溶液與β-欖香烯原料藥溶液的釋藥曲線

3 討論

膠束包封率測定方法主要有高速離心法、透析法、葡聚糖凝膠柱層析法等，但透析法、葡聚糖凝膠柱層析法時間較長、操作繁瑣，且β-欖香烯為揮發(fā)油，不溶于水，因此洗脫劑及透析介質(zhì)很難選擇。另外，高速離心法對難溶于水的固體藥物較為適合，不適合相對密度小于水的β-欖香烯。因此，本試驗采用石油醚萃取法，除去未包封的游離藥物，方法簡便、快速、重復(fù)性好；同時對石油醚的萃取次數(shù)進(jìn)行了考察，結(jié)果萃取2次基本提取完全。

體外釋藥研究多采用生物膜擴(kuò)散、透析袋法等技術(shù)。本試驗采用透析法，該法簡單、易行。釋放介質(zhì)選用與人體血漿pH值相近pH 7.4磷酸鹽緩沖液，為增加β-欖香烯在水中的溶解度及達(dá)到漏槽條件，在釋放介質(zhì)中加入十二烷基硫酸鈉作為增溶劑。

為驗證β-ELE-DSPE-PEG2000-PMs抗腦膠質(zhì)瘤作用的靶向性，后續(xù)研究還需通過與原料藥注射液對照，結(jié)合細(xì)胞毒試驗、細(xì)胞凋亡試驗、細(xì)胞攝取試驗、動物體內(nèi)的組織分布或活體成像技術(shù)驗證其抗腦膠質(zhì)瘤的作用及靶向性。

[1] 黃朝剛,蔡翔.欖香烯注射液聯(lián)合放化療治療腦膠質(zhì)瘤的療效分析[J].中國醫(yī)藥指南,2013,11(11)：281.

[2] 汪維佳,方東升,華育暉.欖香烯注射液所致新的不良反應(yīng)臨床分析[J].實用腫瘤雜志,2013,28(4)：388-390.

[3] 謝恬李,鋮璐,王淑玲,等.欖香烯脂質(zhì)體系列靶向抗癌天然藥物基礎(chǔ)研究進(jìn)展[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2014,34(4)：507-509.

[4] 花文峰,蔡紹暉.β-欖香烯抗腫瘤作用的基礎(chǔ)與臨床研究[J].中藥材, 2006,29(1)：93-97.

[5] 胡一晨,孔維軍,楊美華.姜黃揮發(fā)油脂質(zhì)體制備及其抗黃曲霉菌評價研究[J].世界中醫(yī)藥,2015,10(8)：1157-1162.

[6] 禹玉洪,李雪春,吳濤,等.注射用柴胡揮發(fā)油脂質(zhì)體制備工藝研究[J].中國中藥雜志,2004,29(6)：521-525.

[7] MUSACCHIO T, LAQUINTANA V, LATROFA A, et al. PEG-PE micelles loaded with paclitaxel and surface-modified by a PBR-ligand: synergistic anticancer effect[J]. Mol Pharm,2009,6(2)：468-479.

[8] 馬文轉(zhuǎn),王金鈴,屠鵬飛.黃芩苷納米膠束的制備、表征及其對MCF-7細(xì)胞抑制作用的研究[J].中草藥,2015,46(4)：507-512.

[9] 毛驍麗,張翮,俞媛,等.穿膜肽修飾鹽霉素膠束的制備與表征[J].中國新藥雜志,2014,23(23)：2812-2816.

[10] 胡凱莉,賈娜,劉梅,等.多烯紫杉醇脂質(zhì)核膠束的制備及性質(zhì)考察[J].中成藥,2014,36(6)：1181-1186.

Determination of Encapsulation Efficiency and Medicine Loading and Release of β-elemene in β-elemene-loaded Nano Polymeric Micelles

WANG Jing, LI Xue-tao, YUAN Zi-min
(Liaoning University of TCM, Dalian 116600, China)

ObjectiveTo establish a RP-HPLC method for the determination of encapsulation efficiency (EE) and medicine loading (ML) in β-elemene-loaded Nano Polymeric Micelles; To study its release characteristic in vitro.MethodsDSPE-PEG2000 was used as carrier to prepare medicine-loaded micelles. EE and ML were determined by petroleum ether extraction method, and its release characteristic in vitro was studied by dialysis method.ResultsThe average EE and ML of β-elemene-loaded Nano Polymeric Micelles were 89.47％ and 8.33％, respectively. Its release characteristic was slow.ConclusionThe method for EE and ML determination is simple and accurate, and the prepared micelles have the property of sustained release.

β-elemene-loaded Nano Polymeric Micelles; encapsulation efficiency; medicine loading; release characteristic

R284.1

A

1005-5304(2017)02-0091-03

2016-04-08）

（

2016-04-28；編輯：陳靜）

遼寧省科學(xué)技術(shù)計劃（2015020703）

袁子民，E-mail：yuanzmin@163.com

DOl：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.02.023