劉忠慧??李國輝+狄和雙??

摘要：以GH和基因作為影響雞繁殖性狀的候選基因，采用PCR-SSCP方法檢測仙居雞GH基因外顯子4和[WTBX]基因外顯子3區(qū)域的單核苷酸多態(tài)性，并分析GH單基因型及2個(gè)基因合并基因型與65周齡產(chǎn)蛋數(shù)的關(guān)聯(lián)。結(jié)果表明：GH基因exon4（C2338G/C2341T）的突變和基因exon2的突變（C826T）基因型CC型與該雞品種的65周齡產(chǎn)蛋數(shù)顯著相關(guān)（P<0.05），AA、CC型對產(chǎn)蛋數(shù)的加性效應(yīng)分別為3.56、3.60；合并基因型AACC型個(gè)體65周齡產(chǎn)蛋數(shù)與對照組相比差異顯著（P<0.05）；2個(gè)基因間的互作效應(yīng)不顯著（P>0.05）。

關(guān)鍵詞：GH基因]基因；仙居雞；基因合并；產(chǎn)蛋數(shù)

中圖分類號： S831.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼：

文章編號：1002-1302（2016）08-0300-03

仙居雞原產(chǎn)于浙江省臺州市仙居縣、臨海市等地，是我國優(yōu)良蛋用雞品種。仙居雞具有單冠、頸部細(xì)長、背部平直、尾羽高翹、羽毛緊密等特點(diǎn)，體型雖小但很健壯。公雞羽毛呈黃色或紅色，體質(zhì)量約為1.5 kg；母雞羽毛多呈黃色，少呈黑色或花色，體質(zhì)量約為1 kg，500日齡產(chǎn)蛋數(shù)為180～200枚。仙居雞存在體質(zhì)量小、繁殖性能不高的缺點(diǎn)，尋找與仙居雞繁殖性能相關(guān)的候選基因，實(shí)施分子標(biāo)記輔助選擇是提高其產(chǎn)蛋數(shù)的有效途徑。

生長激素（growth hormone，GH）是促進(jìn)機(jī)體新陳代謝、提高動(dòng)物瘦肉率、降低脂肪沉積的一種激素，主要由腦垂體分泌，通過與生長激素受體（growth hormone receptor，GHR）結(jié)合，并通過類胰島素生長因子（insulin-like growth factors，IGFs）的媒介作用來促進(jìn)細(xì)胞的增生與分化[1]。GH編碼的基因全長3 901 bp，包括4個(gè)內(nèi)含子和5個(gè)外顯子，編碼191個(gè)氨基酸[2]。GH基因變異會(huì)影響家畜家禽生長發(fā)育、繁殖及其他生產(chǎn)性狀，此項(xiàng)研究越來越受到人們的關(guān)注。

細(xì)胞視黃醇結(jié)合蛋白（cellular retionol-binding proteins，CRBPs）擔(dān)任著轉(zhuǎn)運(yùn)維生素A（視黃醇）的任務(wù)，維生素A主要參與機(jī)體的視覺、胚胎發(fā)育、繁殖、細(xì)胞增殖與分化、脂類代謝等生理過程。畜禽機(jī)體自身不能直接合成維生素A，必須通過食物間接獲取。缺乏維生素A會(huì)影響雞的體質(zhì)量、飼料利用率、產(chǎn)蛋力、蛋質(zhì)量、蛋品質(zhì)、孵化率、免疫應(yīng)答[3]；因此，細(xì)胞視黃醇結(jié)合蛋白參與視覺、繁殖、上皮細(xì)胞的維持、骨的生長發(fā)育等諸多生物學(xué)過程。雞的細(xì)胞視黃醇結(jié)合蛋白CRBPs共有4種，CRBP4是其中重要的一種，雞的[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]基因位于21號染色體，有3個(gè)外顯子[4]。

合并基因型在植物育種中已得到應(yīng)用并取得了良好效果[5]，在動(dòng)物育種中也有報(bào)道。劉嬋娟等研究表明，ESR和FSH基因的合并基因型對地方豬種初產(chǎn)、經(jīng)產(chǎn)胎次的產(chǎn)仔數(shù)具有顯著影響[6]。在家禽育種上，洪坤月等采用PCR-SSCP法對太湖雞促卵泡激素β亞基（FSH-β）基因、生長素（GH）及其受體基因（GHR）進(jìn)行多態(tài)性檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)產(chǎn)蛋量較高的合并基因型AADD可作為太湖雞選育的參考[7]。于吉英等對NPY、ESR基因的聯(lián)合效應(yīng)進(jìn)行分析，結(jié)果表明，合并基因型AAAC的300日齡產(chǎn)蛋數(shù)、400日齡產(chǎn)蛋數(shù)、平均連產(chǎn)時(shí)間均最高[8]。李俊營等對淮南麻黃雞[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]基因多態(tài)性與早期產(chǎn)蛋性狀、蛋品質(zhì)的相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果表明，

3結(jié)論與討論

近年來，動(dòng)物基因組的研究迅速發(fā)展，基因轉(zhuǎn)移、基因聚合等現(xiàn)代分子生物技術(shù)手段的應(yīng)用使分子標(biāo)記輔助選擇（MAS）廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物的遺傳改良，并取得了長足的進(jìn)展。傳統(tǒng)育種方法通過表現(xiàn)型間接對基因型進(jìn)行選擇，普遍存在選育效率低、周期長的缺點(diǎn)。本研究將傳統(tǒng)方法與分子標(biāo)記輔助選擇相結(jié)合，以期獲得更好的育種效果。

通過分析仙居雞群體[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]和GH標(biāo)記2個(gè)基因各基因型與產(chǎn)蛋數(shù)的關(guān)聯(lián)，確定了[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]和GH的有利單個(gè)基因型為AA、CC型，其在仙居雞群體中的分布比例分別達(dá)30%、34%，且GH、[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]基因?qū)?5周齡產(chǎn)蛋數(shù)均一致表現(xiàn)為正加性效應(yīng)與負(fù)顯性效應(yīng)，A、C 2個(gè)等位基因位點(diǎn)對65周齡產(chǎn)蛋數(shù)表現(xiàn)為負(fù)效應(yīng)。在9種合并基因型中，只有單基因合并后的AACC基因型個(gè)體的65周齡產(chǎn)蛋數(shù)顯著高于其他組合合并基因型個(gè)體，分別比GH單基因AA型、[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]單基因CC型的產(chǎn)蛋數(shù)提高了2.57、1.91枚，但差異均未達(dá)到顯著水平（P<0.05）。2種優(yōu)勢單基因型間的互作效應(yīng)并不顯著（P>0.05），與單基因型相比，合并基因型對產(chǎn)蛋數(shù)的主效作用（Eta2GH×[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]

通過分子標(biāo)記手段對與產(chǎn)蛋數(shù)關(guān)聯(lián)的[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]、GH基因優(yōu)勢單基因型進(jìn)行基因合并育種，能使仙居雞的產(chǎn)蛋數(shù)有所提高，為基因合并在家禽育種中的進(jìn)一步應(yīng)用提供依據(jù)。

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