呂 飛 馮 珺 倪堅(jiān)軍 俞春燕 蔡鑫君

·藥學(xué)研究·

RP-HPLC測(cè)定自微乳中雷公藤甲素的含量

呂 飛 馮 珺 倪堅(jiān)軍 俞春燕 蔡鑫君

RP-HPLC；雷公藤甲素；自微乳

雷公藤甲素（triptolide，TP）是從雷公藤中提取分離到的環(huán)氧化二萜內(nèi)酯化合物，是各種雷公藤制劑的主要活性成分，具有抗炎、免疫抑制、抗腫瘤和抗生育等多種藥理作用[1]。但雷公藤甲素存在水溶性差，對(duì)胃腸道刺激性大，生物利用度不高等問題。自微乳釋藥系統(tǒng)（self-microemulsifying drug delivery system，SMEDDS）是由藥物、油相、表面活性劑和助表面活性劑組成的熱力學(xué)穩(wěn)定的均一、透明或半透明、各向同性的溶液，口服后在生理體溫、胃腸道蠕動(dòng)作用下，遇胃腸液分散成粒徑＜100nm的性能良好的O/W（水/油）微乳[2]，可以有效改善藥物溶解度，提高藥物生物利用度。本研究利用偽三相圖確定雷公藤甲素自微乳的處方工藝，并采用HPLC法建立雷公藤甲素自微乳的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀（G1322A脫氣機(jī)，DAD檢測(cè)器，手動(dòng)進(jìn)樣器，Chemstation色譜工作站)，BT25S分析天平（賽馬利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司），KQ-50E超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司），雷公藤甲素對(duì)照品（純度99.9%，111567-201404，中國(guó)食品藥品檢定研究院），雷公藤甲素原藥（純度≥98%，20150109，上海寶曼生物）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相甲醇：0.01mol/L磷酸二氫鈉水溶液（pH調(diào)節(jié)到4.1）40∶60，流速1.0mL，柱溫28℃，檢測(cè)波長(zhǎng)218nm，進(jìn)樣量20μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定雷公藤甲素對(duì)照品約10mg，置于100mL容量瓶，加入流動(dòng)相溶解、稀釋至刻度，搖勻定容。

2.3 供試品及陰性樣品溶液的制備 精密量取雷公藤甲素自微乳約5.0mL于100mL容量瓶，加入流動(dòng)相溶解、超聲（200w，50kHz）30min使其溶解，稀釋至刻度，搖勻定容。濾過(guò)即得樣品。取不含主藥空白自微乳同法制備陰性樣品溶液。

2.4 專屬性實(shí)驗(yàn) 將雷公藤甲素供試品、對(duì)照品及陰性樣品溶液均按“2.1”色譜條件項(xiàng)下的方法進(jìn)樣，比對(duì)，結(jié)果見圖1。顯示雷公藤甲素供試品主峰的保留時(shí)間（4.5min）與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致，輔料對(duì)其主峰并未有影響。

圖1 雷公藤甲素供試品、對(duì)照品及陰性樣品溶液HPLC色譜圖

2.5 線性關(guān)系試驗(yàn) 精密量取雷公藤甲素標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液1、2、4、6、8、10mL，分別置25mL容量瓶中，定容。分別進(jìn)樣20μL，按“2.1”色譜條件項(xiàng)下的方法，測(cè)定雷公藤甲素峰面積的響應(yīng)值（A）。以峰面積響應(yīng)值（A）對(duì)雷公藤甲素濃度（ρ）進(jìn)行回歸，得線性方程A=43.266ρ+ 0.3425（r=0.9999），其進(jìn)樣量在4.048～40.48mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度和重復(fù)性試驗(yàn) 取濃度分別為5.42、13.55、27.1μg/mL的高、中、低三個(gè)對(duì)照品溶液20 μL進(jìn)樣注入液相色譜儀，每個(gè)濃度重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算峰面積響應(yīng)值（A）的RSD分別為1.07%、0.79%、0.51%（n=6）；取雷公藤甲素自微乳，按“2.3”項(xiàng)供試品制備方法平行制備6份，按“2.1”色譜條件項(xiàng)下的方法測(cè)定其含量，各進(jìn)樣1次，得到平均含量為2.25mg/mL，RSD為2.54%（n=6）。

2.7 加樣回收率測(cè)定 精密量取已知含量的供試品溶液3份，分別加入高、中、低3種濃度的對(duì)照品（即雷公藤甲素處方量的80%、100%、120%），用流動(dòng)相溶解超聲，定容至20mL，按“2.1”色譜條件項(xiàng)下的方法測(cè)定其含量，得平均加樣回收率為（97.2±1.4）%（RSD=1.44%，n=9），見表1。

杭州市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（No.20130733Q14）；浙江省中醫(yī)藥科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.2015ZA148）

杭州市紅十字會(huì)醫(yī)院藥劑科（杭州 310003）

蔡鑫君，Tel：0571-56109869；E-mail：zjtcmcxj@163.com