趙明禮等

同期排卵
——定時(shí)輸精對(duì)產(chǎn)后難配泌乳奶牛繁殖效率的影響

趙明禮等

奶牛理想的泌乳周期為一年，即產(chǎn)犢間隔365d。然而在實(shí)際生產(chǎn)中，奶牛場(chǎng)母牛的產(chǎn)犢間隔往往達(dá)不到理想水平。正常情況下，奶牛在產(chǎn)后30～70 d內(nèi)卵巢和生殖道恢復(fù)正常，表現(xiàn)出正常規(guī)律性的發(fā)情周期和明顯的發(fā)情癥狀，但是產(chǎn)后繁殖障礙疾病如產(chǎn)后不發(fā)情和久配不孕等使得產(chǎn)后泌乳母牛繁殖效率降低，從而延長(zhǎng)了產(chǎn)犢間隔。

本試驗(yàn)選用前列腺素F2α（PGF2α）、黃體酮（P4）和促性腺激素釋放激素（GnRH）3種外源生殖激素，按照一定程序處理產(chǎn)后難配（產(chǎn)后不發(fā)情或久配不孕）奶牛，研究同期排卵-定時(shí)輸精技術(shù)對(duì)產(chǎn)后難配奶牛繁殖效率的影響，以期為解決奶牛繁殖障礙提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)?zāi)膛槟膛．a(chǎn)業(yè)技術(shù)體系大同綜合試驗(yàn)站（大同市四方高科農(nóng)牧有限公司）飼養(yǎng)的荷斯坦泌乳奶牛。選擇88頭健康、膘情適中（體況評(píng)分在2.5～4.25）、久配不孕（人工授精3次以上未妊娠母牛，占試驗(yàn)牛45.5%）或產(chǎn)后不發(fā)情（產(chǎn)后110 d內(nèi)未觀察到發(fā)情癥狀的泌乳母牛，占試驗(yàn)牛54.5%）的空懷荷斯坦泌乳奶牛（本試驗(yàn)統(tǒng)稱為難配泌乳奶牛），隨機(jī)分為3組，試驗(yàn)?；厩闆r見(jiàn)表1。經(jīng)直腸檢查，試驗(yàn)牛生殖道正常，卵巢除部分靜止以外無(wú)其他明顯異常。

表1 試驗(yàn)?；厩闆r表

試驗(yàn)期間，TMR全混合日糧，3次/d（早、中、晚各1次），自由飲水。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)分組及處理

試驗(yàn)牛隨機(jī)分為3組，分別記為試驗(yàn)1、2、3組。

試驗(yàn)1組，Ovsynch法：所有試驗(yàn)牛于發(fā)情周期任意一天（記為第0天）15：00—16：00第一次肌肉注射GnRH 100 μg，第7天15：00—16：00肌肉注射PGF2α 0.4 mg，第9天15：00—16：00第二次肌肉注射GnRH 100 μg，第10天07：00—08：00定時(shí)人工授精。

試驗(yàn)2組，CIDR+Ovsynch法：所有試驗(yàn)牛于發(fā)情周期任意一天（記為第0天）15：00—16：00陰道埋植CIDR且第一次肌肉注射GnRH 100 μg，第7天15：00—16：00撤出CIDR且肌肉注射PGF2α 0.4 mg，第9天15：00 —16：00第二次肌肉注射GnRH 100 μg，第10天07：00—8：00定時(shí)人工授精。

試驗(yàn)3組，CIDR+PG+GnRH法：所有試驗(yàn)牛于發(fā)情周期任意一天（記為第0天）15：00—16：00陰道埋植CIDR，第7天15：00—16：00撤出CIDR且肌肉注射PGF2α 0.4 mg，第9天15：00— 16：00肌肉注射GnRH 100 μg，第10天07：00—08：00定時(shí)人工授精。

各試驗(yàn)組操作流程見(jiàn)圖1。

圖1 試驗(yàn)分組及處理流程示意圖

發(fā)情鑒定

采用人工觀察法、尾根涂抹蠟筆法和計(jì)步器活動(dòng)量監(jiān)控相結(jié)合的方法監(jiān)測(cè)母牛發(fā)情。

人工授精

選擇1頭進(jìn)口荷斯坦種公牛的常規(guī)冷凍精液（公牛號(hào)為25HO00989），2名輸精人員按照同期排卵-定時(shí)輸精程序的固定時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)給處理母牛人工授精。每頭母牛使用一支冷凍精液，且解凍后15 min內(nèi)直腸把握將精液輸送到子宮體前端。

妊娠診斷

母牛輸精后40～45 d利用B超診斷儀進(jìn)行妊娠診斷。

2 結(jié)果與分析

2.1 同期排卵——定時(shí)輸精程序?qū)Ξa(chǎn)后難配泌乳奶牛人工授精的影響

表2結(jié)果表明，3種同期排卵-定時(shí)輸精程序處理產(chǎn)后難配奶牛后都獲得了較好的配種妊娠率，雖然試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組的不返情率略高于試驗(yàn)3組（P=0.06，P=0.09），試驗(yàn)2組的情期受胎率略高于試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組（P=0.08，P=0.06），但是3種程序處理難配奶牛人工授精后的不返情率和情期受胎率之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表2 不同同期排卵——定時(shí)輸精程序?qū)﹄y配奶牛不返情率和情期受胎率的影響

2.2 同期排卵——定時(shí)輸精程序?qū)Ξa(chǎn)后難配奶牛血清中P4和E2含量的影響

由圖2可知，配種妊娠母牛與未妊娠母牛血清中P4含量的變化趨勢(shì)一致，即在CIDR埋植期，母牛血清中的P4含量逐漸增加，在撤栓時(shí)達(dá)到高峰（0.234±0.055）、（0.256±0.045）ng/mL，撤栓后迅速降低，輸精時(shí)降到最低（0.129±0.009）、（0.134±0.026）ng/mL，其中妊娠母牛血清P4的最低值低于未妊娠母牛，但差異不顯著（P＞0.05）；配種妊娠母牛與未妊娠母牛血清中E2含量變化趨勢(shì)差異較大，妊娠母牛血清中E2含量整體呈增加趨勢(shì)，定時(shí)輸精時(shí)達(dá)到最高7.402（±0.663）pg/mL，而配種未妊娠母牛血清中E2含量變化幅度較大，高峰值出現(xiàn)在定時(shí)輸精之前（第二次注射GnRH時(shí)），定時(shí)輸精時(shí)血清中E2含量降到較低水平（5.448±1.252）pg/mL，且極顯著低于配種妊娠母牛（P＜0.01）。

圖2 CIDR+Ovsynch程序處理母牛血清P4（A）和E2（B）含量變化趨勢(shì)

由圖3可知，CIDR+PG+GnRH程序處理過(guò)程中母牛血清中P4含量變化趨勢(shì)與CIDR+Ovsynch程序相似，即在CIDR埋植期，母牛血清中的P4含量逐漸增加，在撤栓時(shí)達(dá)到高峰（0.265±0.090）ng/mL、（0.247±0.032）ng/mL，撤栓后迅速降低，定時(shí)輸精時(shí)達(dá)到最低點(diǎn)（0.064±0.018）ng/mL、（0.117±0.024）ng/mL，且妊娠母牛血清P4的最低值顯著低于未妊娠母牛（P＜0.05）；CIDR+PG+GnRH程序處理過(guò)程中母牛血清中E2含量變化趨勢(shì)與CIDR+Ovsynch程序略有不同，配種妊娠母牛血清中E2含量從撤栓后才開(kāi)始呈逐漸增加趨勢(shì)，定時(shí)輸精時(shí)達(dá)到最高值（8.226±5.253）pg/mL，配種未妊娠母牛血清E2含量的高峰值同樣出現(xiàn)在定時(shí)輸精之前（撤栓時(shí)），定時(shí)輸精時(shí)血清E2含量降到較低水平（5.103±0.966）pg/mL，且極顯著低于配種妊娠母牛（P＜0.01）。

圖3 CIDR+PG+GnRH程序處理母牛血清P4（A）和E2（B）含量變化趨勢(shì)

3 討論

泌乳母牛產(chǎn)后不發(fā)情和久配不孕是影響奶牛場(chǎng)繁殖效率的重要因素。奶牛繁殖受下丘腦-垂體-卵巢生殖軸的反饋調(diào)節(jié)，因此體內(nèi)生殖激素的規(guī)律性變化和調(diào)控是母牛具有正常發(fā)情周期和繁殖性能的基礎(chǔ)。正常情況下，卵泡期卵泡生長(zhǎng)發(fā)育并分泌E2，低濃度E2正反饋調(diào)節(jié)下丘腦GnRH的合成與分泌，GnRH作用于垂體，促進(jìn)FSH和LH的釋放，促進(jìn)優(yōu)勢(shì)卵泡形成、排卵和黃體形成；黃體期黃體分泌P4，高濃度P4負(fù)反饋調(diào)控GnRH和FSH的分泌，抑制卵巢上卵泡發(fā)育，若母牛發(fā)情未配種或者配種未妊娠，則子宮內(nèi)膜細(xì)胞合成PGF2α溶解黃體，從而解除了P4對(duì)生殖軸的抑制作用，母牛開(kāi)始新一輪的發(fā)情周期。因此，生殖激素紊亂是導(dǎo)致奶牛產(chǎn)后不發(fā)情、久配不孕的主要原因。

同期排卵-定時(shí)輸精技術(shù)不僅能夠提高發(fā)情周期正常奶牛的發(fā)情率和參配率，而且通過(guò)GnRH+PG或者孕激素+GnRH+PG聯(lián)合處理可誘導(dǎo)生殖激素紊亂的奶?；謴?fù)正常繁殖性能和發(fā)情周期，從而使難配奶牛如卵泡發(fā)育不良或產(chǎn)后不發(fā)情奶牛參加配種并妊娠。本試驗(yàn)中，3種同期排卵-定時(shí)輸精程序處理的難配母牛都獲得了較好的情期受胎率，表明應(yīng)用外源生殖激素處理難配母牛可以提高奶牛場(chǎng)難配母牛的配種妊娠率。

血液中性腺類固醇激素（如雌激素和黃體酮）在奶牛發(fā)情周期中規(guī)律性分泌對(duì)下丘腦-垂體-卵巢生殖軸具有重要的反饋調(diào)節(jié)作用。血液中雌激素含量高低主要取決于奶牛卵巢上卵泡的數(shù)量和質(zhì)量，而黃體酮高低主要反映卵巢上黃體的質(zhì)量。

摘自“中國(guó)畜牧雜志”微信公眾號(hào)