趙永旭，袁秀芳，姜 平，李 慧，王一成*

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210095； 2.浙江諾倍威生物技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310018；3.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，浙江 杭州 310021)

重組豬α干擾素防治仔豬流行性腹瀉病試驗(yàn)及臨床應(yīng)用

趙永旭1,2，袁秀芳3，姜 平1，李 慧2，王一成3*

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210095； 2.浙江諾倍威生物技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310018；3.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，浙江 杭州 310021)

針對(duì)近年在我國(guó)再次出現(xiàn)的豬流行性腹瀉，尤其是造成初生仔豬大批死亡的情況，本試驗(yàn)應(yīng)用酵母表達(dá)的重組豬α-干擾素開(kāi)展初生仔豬流行性腹瀉病的臨床防治試驗(yàn)。選擇了3個(gè)發(fā)病豬場(chǎng)，以口服重組豬α-干擾素方式進(jìn)行防治。結(jié)果表明，口服重組豬α-干擾素對(duì)初生仔豬流行性腹瀉具有較好的防治作用，仔豬存活率可達(dá)50%～70%。同時(shí)進(jìn)行腹腔或/和口服補(bǔ)液，仔豬存活率從53%提升到71%。同時(shí)對(duì)重組豬α-干擾素進(jìn)行臨床防治應(yīng)用，取得了較好的效果。

重組豬α-干擾素； 豬流行性腹瀉??； 仔豬存活率

2010年下半年以來(lái)，豬流行性腹瀉病(porcine epidemic diarrhea，PED)又在我國(guó)出現(xiàn)新一輪的暴發(fā)流行。最早發(fā)生在廣西，然后湖南、華北、華東、山東、河北等地普遍發(fā)病，呈現(xiàn)全國(guó)性大流行，造成哺乳仔豬的大量死亡。因此，養(yǎng)豬生產(chǎn)中迫切需要立即開(kāi)展新生仔豬PED防治技術(shù)研究，盡快建立有效的防治技術(shù)，以解臨床防控的燃眉之急。

早在1996年劉萬(wàn)均等[1]就已證明白細(xì)胞干擾素對(duì)同群未發(fā)病豬具有仔豬流行性腹瀉病的預(yù)防作用，對(duì)病豬進(jìn)行治療能縮短病程，提高日增重，加快腸絨毛修復(fù)。張泉軍等[2]用豬白細(xì)胞干擾素預(yù)防哺乳仔豬腹瀉病和斷乳仔豬腹瀉病有效率分別為84.5%和96.3%；治療哺乳仔豬腹瀉病和斷奶仔豬腹瀉病的治愈率分別為95%和100%；在干擾素推廣應(yīng)用中，預(yù)防哺乳仔豬腹瀉病和斷奶仔豬腹瀉病的有效率分別為88.4%和96.8%；治療哺乳仔豬腹瀉病和斷奶仔豬腹瀉病治愈率分別為95.8%和97.6%。本試驗(yàn)將酵母表達(dá)的重組豬α-干擾素試用于臨床發(fā)病的新生仔豬流行性腹瀉防治，取得了一定的防治效果。

1 材料與方法

1.1 材料

凍干的酵母表達(dá)的重組豬干擾素產(chǎn)品由浙江諾倍威生物技術(shù)有限公司試生產(chǎn)，每瓶5頭份(15 mL/瓶，0.5 mg·mL-1)。

1.2 方法

1.2.1 重組豬α-干擾素對(duì)豬流行性腹瀉治療試驗(yàn)

選取3個(gè)發(fā)生仔豬流行性腹瀉的豬場(chǎng)，口服重組豬α-干擾素3 mL·頭-1(0.5 mg·mL-1)，每天2次，連用2～3 d，記錄仔豬成活率。

1.2.2 重組豬α-干擾素對(duì)豬流行性腹瀉臨床應(yīng)用防治試驗(yàn)

選取臨床自然發(fā)生仔豬PED的規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)，設(shè)3種方法對(duì)發(fā)病豬群進(jìn)行防治試驗(yàn)。方案1：母豬產(chǎn)前10 d肌注2.5頭份，產(chǎn)前3 d肌注2.5頭份；仔豬1日齡肌注1頭份，2日齡肌注1頭份。方案2：母豬產(chǎn)前20 d肌注2.5頭份，產(chǎn)前5 d肌注2.5頭份。方案3：仔豬1日齡肌注1頭份，2日齡肌注1頭份。

固定專(zhuān)人飼養(yǎng)發(fā)病豬舍，立即隔離淘汰發(fā)病仔豬和母豬，做好豬舍溫濕度控制，每天進(jìn)行全舍消毒，豬舍門(mén)口設(shè)置雨鞋消毒桶，進(jìn)出病豬舍均需嚴(yán)格消毒等。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)豬流行性腹瀉治療效果

2.1.1 試驗(yàn)豬場(chǎng)1

選擇4窩初生仔豬，口服重組豬α-干擾素(0.5 mg·mL-1)3 mL·頭-1，每天2次，連用2 d，統(tǒng)計(jì)存活率，結(jié)果見(jiàn)表1。平均存活率為51.3%，最高存活率為70.0%。

表1 重組豬α-干擾素腹瀉治療的效果

2.1.2 試驗(yàn)豬場(chǎng)2

選擇產(chǎn)房一幢，產(chǎn)仔380頭，出生后2～3 d出現(xiàn)典型嚴(yán)重腹瀉。立即使用重組豬α-干擾素3 mL·頭-1，(0.5 mg·mL-1)口服治療，出現(xiàn)腹瀉后同窩豬同治，每天2次，連用2～3 d。同時(shí)腹腔補(bǔ)液5%葡萄糖鹽水+多維 10～20 mL·頭-1，每天1～2次；口服體脫康(維生素+礦物鹽)，2 mL·頭-1，每天1～2次。

結(jié)果表明，重組豬α-干擾素停止使用后，產(chǎn)房中仍出現(xiàn)零星腹瀉，完全停止腹瀉的病程約10 d。至腹瀉停止時(shí)存活270頭，存活率71.1%。至4月5日(發(fā)病后16 d)存活235頭，存活率61.2%。口服后病程縮短，病發(fā)減少，嚴(yán)重腹瀉豬效果不佳。

2.1.3 試驗(yàn)豬場(chǎng)3

產(chǎn)房一幢，產(chǎn)仔441頭，出生后2～3 d出現(xiàn)典型嚴(yán)重腹瀉。立即使用重組豬α-干擾素(0.5 mg·mL-1)口服治療，全幢仔豬同步治療，3 mL·頭-1，每天2次，連用2 d。除口服重組豬α-干擾素外，補(bǔ)液鹽自由飲水，未做其他處理。

結(jié)果表明，至4月5日(病程7 d)存活233頭，存活率52.8%，仍有部分腹瀉。

2.2 對(duì)豬流行性腹瀉臨床應(yīng)用效果

2.2.1 方案1

母豬產(chǎn)前10 d和3 d各注射重組豬α-干擾素，同時(shí)仔豬1日齡和2日齡注射重組豬α-干擾素的防治結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 方案1的防治結(jié)果

注：豬場(chǎng)1同時(shí)執(zhí)行淘汰、隔離、控溫、消毒等綜防措施，豬場(chǎng)2主要發(fā)生于14日齡仔豬，豬場(chǎng)3母豬產(chǎn)前40天免疫T-P二聯(lián)苗。

通過(guò)對(duì)3家豬場(chǎng)利用重組豬α-干擾素治療豬流行性腹瀉，都獲得良好的效果，說(shuō)明產(chǎn)前10 d和產(chǎn)前3 d注射重組豬α-干擾素，仔豬出生后1日齡和2日齡注射重組豬α-干擾素治療方案可行，有效率達(dá)90%以上，但總體防治成本較高。

2.2.2 方案2

母豬產(chǎn)前20 d和產(chǎn)前5 d注射重組豬α-干擾素防治的結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 方案2的防治結(jié)果

注：豬場(chǎng)1母豬產(chǎn)前40 d免疫T-P二聯(lián)苗，豬場(chǎng)2主要用于預(yù)防。

通過(guò)以上2家豬場(chǎng)利用重組豬α-干擾素對(duì)母豬進(jìn)行抗病毒保健，結(jié)果表明重組豬α-干擾素對(duì)抑制母豬排毒效果明顯，但病毒仍持續(xù)存在，如未能做到持續(xù)產(chǎn)前保健，流行性腹瀉仍會(huì)發(fā)生。

2.2.3 方案3

仔豬出生后1日齡和2日齡注射重組豬α-干擾素的防治結(jié)果如表4。

表4 方案3的防治結(jié)果

注：豬場(chǎng)1在2013年以來(lái)一直做初生仔豬保健(1頭份)，豬場(chǎng)2主要用于病豬治療。

以上2個(gè)豬場(chǎng)試用結(jié)果表明，豬α-干擾素用于預(yù)防仔豬發(fā)病有較好的預(yù)期結(jié)果，但用于治療發(fā)病仔豬效果不理想。

3 討論

近年來(lái)，在重組豬α-干擾素及其抗病毒研究上取得了顯著的成就。Albina等[3]、Yao等[4]、Chinsangaram等[5]分別報(bào)道了重組豬α-干擾素可以抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、偽狂犬病毒(PRV)、口蹄疫病毒(FMDV)等多種病毒的復(fù)制。華中農(nóng)業(yè)大學(xué)姚清俠[6]用腺病毒表達(dá)系統(tǒng)對(duì)豬α-干擾素進(jìn)行了表達(dá)，體外試驗(yàn)表明真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的重組豬α-干擾素能有效抑制PRRSV的增殖，但腺病毒表達(dá)量低，成本高。福建農(nóng)林大學(xué)崔敏[7]在畢赤酵母中表達(dá)了重組豬α-干擾素，并對(duì)其體外抗偽狂犬病毒的活性進(jìn)行了研究，達(dá)到1.817×106IU·L-1；江南大學(xué)徐俊[8]通過(guò)多變量在線監(jiān)控技術(shù)實(shí)現(xiàn)了重組豬α-干擾素在畢赤酵母中的高效表達(dá)，抗水皰性口炎病毒活性達(dá)到1×106IU·mL-1。可見(jiàn)真核表達(dá)重組豬α-干擾素的抗病毒活性較高。重組豬α-干擾素有著廣泛的抗病毒作用，具有良好的市場(chǎng)前景。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，口服重組豬α-干擾素對(duì)初生仔豬流行性腹瀉具有較好的防治作用，仔豬存活率可達(dá)50%～70%。比未處理病豬提高20～40個(gè)百分點(diǎn)(資料未顯示)。從試驗(yàn)豬場(chǎng)1的試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，不同窩仔豬間重組豬α-干擾素的防治效果差異較大，存活率從37.5%至70.0%不等，可能與初生仔豬感染的嚴(yán)重程度不同有關(guān)。比較試驗(yàn)豬場(chǎng)2與試驗(yàn)豬場(chǎng)3的結(jié)果可見(jiàn)，在使用重組豬α-干擾素進(jìn)行防治的同時(shí)，進(jìn)行腹腔或/和口服補(bǔ)液可起到良好的輔助治療作用，仔豬存活率從53%提升到71%。所以，在用重組豬α-干擾素防治初生仔豬流行性腹瀉時(shí)，應(yīng)注意同時(shí)做好綜合防控措施，加強(qiáng)清潔衛(wèi)生，強(qiáng)化消毒，尤其是必須做好保溫和補(bǔ)液工作。

本試驗(yàn)臨床應(yīng)用結(jié)果表明，重組豬α-干擾素用于預(yù)防PEDV效果好于發(fā)病治療，母豬和仔豬聯(lián)用效果好于母豬或仔豬單用。嚴(yán)重發(fā)病時(shí)用于病仔豬治療效果不佳，可能原因是仔豬發(fā)生嚴(yán)重PED時(shí)，腸道損傷較嚴(yán)重，大量腹瀉引起機(jī)體脫水和酸中毒，僅用重組豬α-干擾素不能緩解脫水和酸中毒癥狀。

[1] 劉萬(wàn)鈞，胡景韶，張道永，等. 用豬白細(xì)胞干擾素防治豬流行性腹瀉[J]. 中國(guó)獸醫(yī)科技，1996，26(2)：27-28.

[2] 張泉軍，鄧紹基. 豬白細(xì)胞干擾素防治仔豬腹瀉效果觀察[J]. 畜禽業(yè)，2005(3)：52-53.

[3] ALBINA E, CARRAT C, CHARLEY B, et al. Interferon-alpha response to swine arterivirus (PoAV), the porcine reproductive and respiratory syndrome virus [J]. Journal of Interferon & Cytokine Research: the Official Journal of the International Society for Interferon & Cytokine Research, 1998, 18(7)：485-490.

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[7] 崔敏.豬α干擾素基因在畢赤酵母中的表達(dá)與活性檢測(cè)[D]. 福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2008.

[8] 徐俊. 多變量在線監(jiān)控實(shí)現(xiàn)豬α干擾素在畢赤酵母中高效表達(dá)[D]. 無(wú)錫：江南大學(xué)，2009.

(責(zé)任編輯：盧福莊)

2016-10-17

浙江省重大科技專(zhuān)項(xiàng)重點(diǎn)農(nóng)業(yè)項(xiàng)目(2012C12009-1)；杭州市農(nóng)業(yè)科研主動(dòng)設(shè)計(jì)項(xiàng)目(20162012A07)

趙永旭(1982—)，男，碩士研究生，從事傳染病預(yù)防與免疫研究工作，E-mail：386532053@qq.com。

王一成，E-mail：95711@sina.com。

10.16178/j.issn.0528-9017.20170233

S855.3

B

0528-9017(2017)02-0291-03

文獻(xiàn)著錄格式：趙永旭，袁秀芳，姜平，等. 重組豬α干擾素防治仔豬流行性腹瀉病試驗(yàn)及臨床應(yīng)用[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，58(2)：291-293.