成英++劉素君++宋九華

摘要：研究地瓜藤（Ficus tikoua Bur.）提取物的活性成分，經(jīng)初步提純后得到3個含量較多的組分，分別對其進行抗氧化和抗菌試驗。結(jié)果表明，C組分對DPPH自由基、羥基自由基以及超氧陰離子自由基的清除率均比A、B組分的要高，且隨著濃度的增加，各組分的清除率均呈上升的趨勢。C組分對大腸桿菌、表皮葡萄球菌、志賀桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制作用比A和B組分強，且3種組分的抑菌作用均隨濃度的增加而增加。A、B、C 3種組分的MIC分別為1.03、1.04、0.51 mg/mL。

關(guān)鍵詞：地瓜藤（Ficus tikoua Bur.）；活性成分；抗氧化；抗菌

中圖分類號：R284.2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）01-0112-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.01.028

Active Components Research of Ficus tikoua Bur. Extracts

CHENG Ying，LIU Su-jun，SONG Jiu-hua

（Department of Chemistry， Leshan Normal College，Leshan 614004，Sichuan，China）

Abstract：The active components of Ficus tikoua Bur. crude extracts was studied. Three components extracted from Ficus tikoua Bur. were tested respectively through the antioxidant and antibacterial experiments. Results showed that the C composition was higher than part A and B on DPPH，hydroxyl and superoxide anion free radical. With the increase of concentration，the removal rate of three components were rised. The C composition was stronger than A and B for four bacteria，and increased with the increase of the concentration. At last，the MIC of A，B，C were 1.03 mg/mL，1.04 mg/mL and 0.51 mg/mL，respectively.

Key words： Ficus tikoua Bur.； active components； antioxidant； antibacterial

地瓜藤（Ficus tikoua Bur.）為?？崎艑僦参锏毓祥诺娜?，具有清熱解毒、祛風化濕、舒筋活絡(luò)、通利乳汁、益氣健脾、消腫止痛、活血等功效。中國約有120多種，其中作為藥用的有20個種和3個變種，但進行過化學成分和藥理作用研究的僅有10余種[1]。該屬植物因生于荒灘野嶺，被人們視為“野草”，國內(nèi)外對此研究較少，主要集中在化學成分的研究[1，2]，而對其藥理活性的研究較少。本研究利用溶劑提取法提取地瓜藤中活性物質(zhì)，采用抗菌及抗氧化試驗[3]探討其生物活性，以便深入研究地瓜藤的活性成分，擴大其藥源，以期充分利用中國野生植物資源。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

地瓜藤采自樂山郊區(qū)，由樂山師范學院生命科學學院鑒定。

正丁醇、甲醇、乙酸乙酯、無水乙醇（均為AR）、瓊脂粉（成都市科龍化工試劑廠）；蛋白胨、牛肉膏（北京奧博星生物技術(shù)有限責任公司）；DPPH（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，日本和光純薬業(yè)株式會社生產(chǎn)）；大腸桿菌、表皮葡萄球菌、志賀桿菌、金黃色葡萄球菌，由樂山師范學院微生物實驗室提供。

V-630型紫外分光光度計（日本分光株式會社）；LDZX-40H型立式自動電熱壓力蒸汽滅菌器；LR-250生化培養(yǎng)箱（上海一恒科學儀器有限公司）；QYC-200型恒溫搖床（上海?，斣囼炘O(shè)備有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 提取與分離 地瓜藤粉末用95%的乙醇在常溫下進行滲濾，濃縮滲濾液，將濃縮液（400 g）分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各部分再用梯度洗脫的方式進行分離濃縮，最后得到A組分10 g（石油醚∶乙酸乙酯=5∶1）、B組分7 g（乙酸乙酯∶丙酮=1∶7）、C組分8 g（正丁醇∶乙醇=2∶1），這3個組分含量較多，分別將其進行抗菌和抗氧化試驗。

1.2.2 提取物抗氧化性質(zhì)研究

1）提取物對DPPH自由基的清除作用：稱取一定量樣品，分別用無水乙醇配成濃度為2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mg/mL的待測溶液，吸取各待測溶液2.0 mL，加入0.2 mmol/L DPPH溶液2.0 mL，搖勻，放置30 min，其吸光度為A樣品。樣品溶液2.0 mL與無水乙醇2.0 mL混合液的吸光度為A對照，2.0 mL DPPH溶液與2.0 mL無水乙醇的吸光度為A空白。對DPPH自由基的清除率按公式計算：清除率=[1- （A樣品-A對照）/A空白]×100%。

2）提取物對羥基自由基的清除作用：根據(jù)Fenton反應(yīng)，取1 mL 0.75 mmol/L鄰二氮菲無水乙醇溶液，加2 mL的0.2 mmoL/L磷酸鹽緩沖液（pH 7.4），充分混勻后加入0.75 mmol/L硫酸亞鐵溶液 1 mL，最后加入0.01%H2O2 1 mL為對照；反應(yīng)液在37%保溫1 h，于536 nm處測定吸光度。按照以上方法，依次加入1 mL濃度為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mg/mL的樣品為處理樣，在536 nm處測定吸光度，平行測定3次。對羥自由基的清除率按公式計算：清除率=（A處理-A對照）/（A空白-A對照）×100%。

3）提取物對超氧陰離子自由基的清除作用：取4.5 mL pH 8.2的Tris-HCI緩沖液（50 mmol/L）加入3.2 mL去離子水和1 mL樣品溶液，空白管用去離子水代替?；靹蚝笤?5 ℃水浴中保溫20 min，取出后立即加入25 ℃預(yù)熱的0.3 mL鄰苯三酚（3 mmol/L），迅速搖勻后倒入比色皿，在325 nm處每隔30 s測定吸光值A(chǔ)1，共測4 min，推遲30 s。空白管不加樣品，直接加入鄰苯三酚在325 nm處每隔30 s測定吸光值A(chǔ)0。分別計算出鄰苯三酚自氧化速率k1、k0。根據(jù)公式計算清除率：清除率=[（k0-k1）/k0]×100%。

1.2.3 提取物抑菌活性研究

1）紙片藥敏試驗：采用濾紙片法[3-5]對3個組分進行試驗。分別稱取A組分0.165 1 g，B組分0.166 4 g，C組分0.164 8 g，用滅菌去離子水溶解。將滅菌后的紙片（6 mm）放于溶解有組分和裝有滅菌去離子水的燒杯中浸泡2 h。浸泡后的紙片自然晾干。取9個倒有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，在無菌條件下將大腸桿菌、表皮葡萄球菌、志賀桿菌、金黃色葡萄球菌的菌液均勻涂布在培養(yǎng)基上。將培養(yǎng)皿放置在恒溫培養(yǎng)箱中于37 ℃下培養(yǎng)24 h，用游標卡尺測量抑菌圈直徑。

2）MIC試驗：準確稱取A、B、C 3種組分0.329 4、0.332 8、0.327 0 g，分別用滅菌去離子水溶解，用倍比稀釋法配制具有濃度梯度的溶液，共72份溶液。另取3份溶液為無藥空白對照。分別取若干紙片（6 mm），放置在上述溶液中浸泡2 h。浸泡完成后取出自然晾干，備用。

固體培養(yǎng)基的制備、滅菌、接種、培養(yǎng)和抑菌圈的測量等操作與藥敏試驗相同。

2 結(jié)果與分析

2.1 地瓜藤提取物抗氧化性質(zhì)分析

從圖1、圖2、圖3可以看出，地瓜藤提取物C組分對DPPH自由基、羥基自由基以及超氧陰離子自由基的清除率均比A、B組分的要高，且隨著各組分濃度的增加，地瓜藤提取物對DPPH自由基、羥基自由基以及超氧陰離子自由基的清除率均呈上升的趨勢。

2.2 抑菌試驗研究

2.2.1 紙片藥敏試驗 如圖4所示，地瓜藤提取物3種組分對大腸桿菌、表皮葡萄球菌、志賀桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制程度不同。地瓜藤提取物C組分對這4種菌群的抑制程度均大于A組分和B組分。試驗中各組分濃度均為16 mg/mL。

2.2.2 MIC試驗 由圖5可知， 隨著地瓜藤提取物各組分濃度的升高，各組分對大腸桿菌、表皮葡萄球菌、志賀桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制程度增大，其中地瓜藤提取物C組分對4種菌群的抑制作用比A和B組分強。A、B、C 3種組分的MIC分別為1.03、1.04、0.51 mg/mL。

3 小結(jié)

通過粗提，從地瓜藤中提取了3種含量較大的組分，對這3種組分分別進行了抗氧化和抗菌試驗。從試驗結(jié)果可以看出，C組分對DPPH自由基、羥基自由基以及超氧陰離子自由基的清除率均比A、B組分高，且隨著濃度的增加，各組分的清除率均呈上升的趨勢。在抑菌試驗中，C組分對大腸桿菌、表皮葡萄球菌、志賀桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制作用也比A和B組分強。A、B、C 3種組分的MIC分別為1.03、1.04、0.51 mg/mL。

參考文獻：

[1] 關(guān)永霞，楊小生，佟麗華，等.苗藥地瓜藤化學成分的研究[J].中草藥，2007，38（3）：342-344.

[2] 郭良軍，譚興起，鄭 巍，等.地瓜藤化學成分研究[J].中草藥，2011，42（9）：1709-1711.

[3] 柏宏偉，成 軍，楊 柳，等.板栗雄花序萃取物抗氧化及抑菌效果[J].林業(yè)科學，2015，51（5）：145-152.

[4] 張馨予，陳芳芳.氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2011（10）：13-16.

[5] 富 玉.天然產(chǎn)物中有效成分分離及測試方法概述[J].中國測試技術(shù)，2007，33（2）：22-24.