致羔羊腹瀉大腸桿菌分離培養(yǎng)、藥敏試驗及鑒定

吳桐忠 鐘發(fā)剛 黃 新 韓猛力 張星星 新疆農(nóng)墾科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所832000

致羔羊腹瀉大腸桿菌分離培養(yǎng)、藥敏試驗及鑒定

吳桐忠 鐘發(fā)剛 黃 新 韓猛力 張星星 新疆農(nóng)墾科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所832000

為了確定引起該羊場羔羊腹瀉的致病菌，通過分離培養(yǎng)和細(xì)菌鑒定確定致病菌為大腸桿菌，藥敏試驗結(jié)果表明米諾環(huán)素、氨曲南、頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢他啶和頭孢西叮對該菌的抑制和殺滅效果最好。

羔羊;大腸桿菌;分離培養(yǎng);藥敏實驗

2016年9月，新疆沙灣縣某羊場發(fā)生以羔羊腹瀉為主要癥狀的急性傳染性疾病。對發(fā)病死亡1小時內(nèi)的羊采樣2只，共采10個樣（肺、肝、脾、肺淋巴和腸淋巴各2份）送研究室。通過分離培養(yǎng)、藥敏試驗和細(xì)菌鑒定等實驗，確定為大腸桿菌感染。

1 材料與方法

（1）實驗材料。細(xì)菌分離培養(yǎng)工具一套、vitek2 compact全自動微生化鑒定系統(tǒng)（法國梅里埃公司制造）；病死羊肺、肝、脾、肺淋巴和腸淋巴采樣各2份；普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基購自生工生物工程（上海）股份有限公司，液體培養(yǎng)基和血瓊脂平板培養(yǎng)基為實驗室自制，革蘭氏染色液購自珠海貝索生物技術(shù)有限公司，藥敏片為杭州濱和微生物試劑有限公司2016年8月20日生產(chǎn)的35瓶裝常用新藥敏紙片。

（2）實驗方法。無菌條件下采樣分別培養(yǎng)于裝有液體瓊脂培養(yǎng)基的試管里，接種于綿陽血液平板上，做好記錄，最后把試管和血平板放入37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18小時；無菌條件下選擇實驗中有明顯變化的試管（肝臟2、肺淋巴1、腸淋巴1、淋巴1），使用移液管抽取60uL分散滴入血瓊脂平板上，用消毒棉簽涂滿平板表面，待平面稍干，用鑷子取出藥敏片對應(yīng)編號貼在平板表面相應(yīng)位置。重復(fù)以上操作，最后把平板放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18小時；細(xì)菌鑒定使用儀器為vitek2 compact全自動微生物鑒定系統(tǒng)。無菌操作下挑取試驗中（肝臟2、肺淋巴1、腸淋巴1、淋巴1）血平板上培養(yǎng)的菌落移入比色管（先做好登記）中，用移液槍混勻后比色，調(diào)節(jié)比色度在0.5～0.63之間，插入革蘭氏陰性菌鑒定卡（通過涂片觀察檢測為革蘭氏陰性桿菌），然后按照細(xì)菌鑒定儀的操作進(jìn)行操作。

2 檢測結(jié)果分析

（1）細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果。液體培養(yǎng)基培養(yǎng)肝臟2、肺淋巴1、腸淋巴1、淋巴1，整體渾濁，振蕩可見云霧狀沉淀浮起，靜置后沉到試管底部，其他幾組不明顯。血平板培養(yǎng)肝臟2、肺淋巴1、腸淋巴1、淋巴1，可見圓形凸起、濕潤、光滑和半透明的乳白色菌落，β溶血，涂片觀察，發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性無芽孢直桿菌。

（2）藥敏試驗。通過對肝臟2、肺淋巴1、腸淋巴1、淋巴1藥敏實驗，結(jié)果顯示4種病料血平板對米諾環(huán)素、氨曲南、頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢他啶和頭孢西叮敏感，對頭孢唑啉、頭孢呋辛、頭孢曲松、環(huán)丙沙星和諾氟沙星中敏，對苯唑西林、青霉素g、紅霉素、大觀霉素、克拉霉素、萬古霉素、克林霉素、氯霉素、四環(huán)素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左氧沙星、多粘菌素、復(fù)方新諾明、氨苯西林、頭孢唑啉、頭孢噻吩、頭孢呋辛、氧氟沙星、鏈霉素、妥布霉素、卡那霉素、哌拉西林、慶大霉素、阿米卡星和麥迪霉素耐藥。

（3）細(xì)菌鑒定。通過vitek2 compact全自動微生物鑒定系統(tǒng)對肝臟2、肺淋巴1、腸淋巴1和淋巴1血平板培養(yǎng)菌鑒定，均為大腸桿菌。

3 討論

經(jīng)過細(xì)菌分離培養(yǎng)、染色鏡檢和細(xì)菌鑒定，判斷致病菌為大腸桿菌。對該大腸桿菌進(jìn)行藥敏試驗發(fā)現(xiàn)，該菌對大部分藥物有耐藥性，對米諾環(huán)素、氨曲南等藥物敏感，對頭孢唑啉等藥物中敏，對苯唑西林、青霉素g等藥物耐藥。從以上結(jié)果可以看出，該菌對大部分藥物有耐藥性，可能是因為老羊場導(dǎo)致。針對該病禁止濫用藥物，用藥前應(yīng)篩選敏感藥物。選用較敏感藥物治療或者聯(lián)合用藥，盡量減少耐藥性的產(chǎn)生，最好用本羊場分離的大腸桿菌制作的滅活疫苗免疫。平時要注意定期消毒，保持羊場清潔衛(wèi)生。

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