洪旭

摘要：為了了解不同免疫劑量和免疫方式的奶牛口蹄疫疫苗免疫效果，科學(xué)指導(dǎo)奶牛口蹄疫免疫工作，自2014年10月至2015年1月，在湖北現(xiàn)代乳業(yè)有限公司奶牛場聯(lián)合開展了奶牛口蹄疫A型和O型-亞I型兩種滅活疫苗的免疫試驗(yàn)。結(jié)果表明，45日齡左右的犢牛因有較高的母源抗體，不適宜初次免疫，初免時間應(yīng)往后延遲，具體延遲多久適宜，應(yīng)根據(jù)各奶牛場的母源抗體衰減曲線確定。初次接種劑量 2 mL比1 mL效果好。二免后抗體產(chǎn)生較慢；口蹄疫疫苗免疫后抗體水平變化大，抽檢結(jié)果不能完全證明是否免疫。

關(guān)鍵詞：奶牛；口蹄疫疫苗；免疫程序

中圖分類號：S858.23 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1007-273X（2016）10-0008-02

重大動物疫病的控制主要在于預(yù)防，預(yù)防的關(guān)鍵是進(jìn)行疫苗免疫接種。為了了解不同免疫劑量和免疫方式的奶?？谔阋咭呙缑庖咝Ч?，科學(xué)指導(dǎo)奶?？谔阋呙庖吖ぷ鳎鶕?jù)“鄂牧醫(yī)辦發(fā)[2014]40號文件要求，自2014年10月至2015年1月，我們在湖北現(xiàn)代乳業(yè)有限公司奶牛場聯(lián)合開展了奶?？谔阋逜型和O型-亞I型兩種滅活疫苗的免疫試驗(yàn)，現(xiàn)將試驗(yàn)情況報告如下。

1 試驗(yàn)場基本情況

湖北現(xiàn)代乳業(yè)有限公司奶牛場位于黃梅縣大河鎮(zhèn)，是一個全封閉管理的大型奶牛場?；厩闆r如下：

養(yǎng)殖規(guī)模：現(xiàn)存欄奶牛3 250頭。

養(yǎng)殖的基本情況：奶牛場總面積約66.7 hm2，已建成開放式牛舍4萬余平方米，封閉式牛舍10余萬平方米，可養(yǎng)殖1萬頭奶牛。飼料以青貯料為主，輔以少量配合料。建有2 500 m3的沼氣池處理糞污。

防疫情況：母牛群按常規(guī)免疫0型-亞I型滅活疫苗，一年兩次。最近一次在2014年9月份。近期無大的疫病發(fā)生。

犢牛基本情況：犢牛出生后由母牛喂養(yǎng)2～3 d即隔離開，由人工喂哺擠出來的混合母乳，后逐漸添喂顆粒配合料。一月齡內(nèi)的牛犢有零星死亡，主要原因是初乳供應(yīng)不足及牛舍環(huán)境不適應(yīng)。

2 試驗(yàn)方法

2.1 犢牛選擇

2014年10月20日，選擇未免疫A型及0型-亞I型口蹄疫疫苗的健康犢牛50頭，從中隨機(jī)抽10頭采血，分離血清進(jìn)行口蹄疫抗體監(jiān)測，并填寫相關(guān)信息。將50頭犢牛隨機(jī)分為四組，A.B組各12頭，C.D組各13頭，分欄飼養(yǎng)，逐一登記好耳號及相關(guān)信息。由于該牛場70日齡以上的犢牛均已免口蹄疫疫苗，所以選擇的這50頭犢牛年齡偏小，都在40～50日齡。

2.2 試驗(yàn)疫苗

試驗(yàn)疫苗由黃梅縣動物疫病預(yù)防控制中心從其冷藏庫中現(xiàn)用現(xiàn)取。奶?？谔阋逜型滅活苗由國內(nèi)A公司生產(chǎn)，批號C140506J，規(guī)格100 mL/瓶?？谔阋?型-亞I型滅活苗由國內(nèi)B公司生產(chǎn)，批號4216019；規(guī)格50 mL/瓶。

2.3 疫苗注射

疫苗注射由黃梅縣動物疫病預(yù)防控制中心派人與奶牛場獸醫(yī)共同完成。

A組：2014年10月20日，每頭肌肉注射1.0 mL奶牛A型口蹄疫滅活苗，同時肌肉注射1.0 mL奶牛0型-亞I型口蹄疫滅活苗。

B組：2014年10月20日，每頭肌肉注射2.0 mL奶牛A型口蹄疫滅活苗，同時肌肉注射2.0 mL奶牛0型-亞I型口蹄疫滅活苗。

C組：2014年10月20日，每頭肌肉注射1.0 mL奶牛A型口蹄疫滅活苗，同時肌肉注射1.0 mL奶牛0型-亞I型口蹄疫滅活苗；30 d后（2014年11月19日），每頭再肌肉注射1.0 mL奶牛A型口蹄疫滅活苗，同時肌肉注射1.0 mL奶牛0型-亞I型口蹄疫滅活苗。

D組：2014年10月20日，每頭肌肉注射2.0 mL奶牛A型口蹄疫滅活苗，同時肌肉注射2.0 mL奶牛0型-亞I型口蹄疫滅活苗；30 d后（2014年11月19日），每頭再肌肉注射2.0 mL奶牛A型口蹄疫滅活苗，同時肌肉注射2.0 mL奶牛0型-亞I型口蹄疫滅活苗。

2.4 采血

采取尾根靜脈血，每頭牛不少于3 mL，自然分離血清備檢。

（1）10月19日，隨機(jī)抽10頭犢牛血清，檢測未免疫時抗體。

（2）A、B組分別于一免后28 d（2014年11月17日）、58 d（2014年12月17日）各采血一次，分離血清做口蹄疫免疫抗體檢測。C、D組分別于一免后 28 d（2014年11月17日）、二免后28 d（2014年12月17日）、58 d（2015年1月16日）各采血一次，分離血清做口蹄疫免疫抗體檢測試驗(yàn)。

2.5 監(jiān)測方法及試劑

A型、0型和亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗體均采用液相阻斷ELISA進(jìn)行檢測?？谔阋呖贵w液相阻斷ELISA檢測試劑盒為中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)?？谔阋逜型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒，批號：2014101303，有效期：2015.04.13；抗原批號：2014081803，使用濃度1∶3?？谔阋逴型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒，批號：2014092301，有效期：2015.03.23；抗原批號：2014091601，使用濃度 1∶14?？谔阋邅喼轎型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒，批號：2014100902，有效期：2015.04.09；抗原批號：2014021802，使用濃度1∶6。

2.6 結(jié)果判定

A型、0型、亞洲I型口蹄疫：液相阻斷ELISA的抗體效價≥26判定為合格。

所有檢測均由2人以上共同完成。其中11月17日樣品分成兩份，一份自檢，另一份送華中農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測，兩個結(jié)果的符合率在95%以上。12月17日采集的C、D組樣品各選10份備份樣品送湖北省動物疫病預(yù)防控制中心復(fù)檢，符合率也在95%以上。說明檢測結(jié)果真實(shí)有效。

3 結(jié)果與分析

3.1 免疫前抗體

未免疫口蹄疫疫苗前隨機(jī)采取10份犢牛血樣，結(jié)果A型口蹄疫抗體陽性率為0；0型口蹄疫抗體陽性率為100%（母源抗體）；亞洲I型口蹄疫抗體陽性率為60%（母源抗體）。

3.2 口蹄疫免疫抗體免疫結(jié)果

口蹄疫A型、O型、亞洲I型抗體檢測結(jié)果見表1～3。由表1～3可見，犢牛第一次接種口蹄疫A型或0型-亞Ⅰ型疫苗，1 mL和2 mL劑量組在接種后28 d免疫抗體合格率都很高。但高滴度抗體持續(xù)時間短，在接種后的第58天，免疫抗體水平都有所下降，其中A型和O型下降較多，亞I型略微下降。整體來看，劑量2 mL組的抗體水平下降要少些。實(shí)行二免程序的，間隔30 d接種兩次口蹄疫A型和0型-亞Ⅰ型疫苗，二免后的28 d抗體合格率與未二免的犢牛相比差異不明顯，A型和O型抗體水平均較低，只有亞I型抗體合格率能達(dá)標(biāo)。要到第二次接種后的58 d抗體水平才升至較高水平，說明二免的效果表現(xiàn)較遲緩。實(shí)行二次免疫的，接種1 mL和2 mL，抗體合格率沒有明顯的差別，其中接種1 mL組的A型、O型抗體水平在二免58 d 后還高于2 mL組。

4 小結(jié)與討論

（1）40～50日齡犢牛母源抗體水平較高。抽檢 10頭未曾免疫過的犢牛，其O型抗體水平全部在26以上，亞I抗體達(dá)標(biāo)率也達(dá)到60%，但A型抗體合格率為0。經(jīng)回訪調(diào)查，產(chǎn)這批犢牛的母牛是2014年7月從上海調(diào)入本場的，之前沒有打過A型疫苗。母牛每年持續(xù)多次免疫，小牛在幼齡階段必然會有較高的母源抗體。檢測結(jié)果表明，45日齡左右的犢牛因有較高的母源抗體，不適宜初次免疫，初免時間應(yīng)往后延遲，具體延遲多久適宜應(yīng)根據(jù)各奶牛場的母源抗體衰減曲線確定。

（2）接種劑量2 mL比1 mL效果好。犢牛第一次接種口蹄疫A型或0型-亞Ⅰ型疫苗，不管是1 mL還是2 mL劑量，在接種后28 d其免疫抗體合格率都很高。但高滴度抗體持續(xù)時間短，在接種后的第58天，各組免疫抗體水平均有所下降，其中A型和O型下降較多，亞I型略微下降。整體來看，劑量2 mL組的抗體水平下降要少些。

近幾年各地開展防疫抽檢，很多抽檢的是1個半月到2個月左右的家畜，口蹄疫抗體合格率有的很低，一些基層防疫員對檢測結(jié)果不服，他們堅(jiān)持認(rèn)為打了疫苗。這個可以解釋為什么有些打過疫苗的牛查不出抗體或抗體水平低。

（3）二免抗體產(chǎn)生較慢。實(shí)行二免程序的，間隔30 d接種兩次口蹄疫A型和0型-亞Ⅰ型疫苗，二免后的28 d抗體合格率與未二免的犢牛相比差異不明顯，A型和O型抗體水平均較低，只有亞I型抗體合格率能達(dá)標(biāo)。要到第二次接種后的58 d其抗體水平才升至較高水平。說明二免的效果表現(xiàn)較遲緩，由于抽檢時點(diǎn)少，無法描繪出其變化曲線。

實(shí)行二次免疫的，接種1 mL和2 mL，抗體合格率均沒有明顯差別，其中接種1 mL組的A型、O型抗體水平在二免58 d 后還高于2 mL組。

（4）口蹄疫苗免疫抗體水平變化大，抽檢結(jié)果不能完全證明是否免疫。即使按標(biāo)準(zhǔn)注射了疫苗，如果采樣時間不對也有可能測不出抗體。口蹄疫免疫后有效抗體到底能維持多長時間有待進(jìn)一步研究。

本試驗(yàn)原計(jì)劃每組30頭牛，由于奶牛場實(shí)際存欄小牛較少，樣本數(shù)略少。同時，因?yàn)樵搱?0日齡以上小牛均已注射了疫苗，試驗(yàn)牛日齡偏小，有母源抗體干擾等因素影響，所以試驗(yàn)結(jié)果與常規(guī)免疫的結(jié)果可能有一定出入。