TAP聯(lián)合K i-67對判斷非小細胞肺癌患者預后的臨床意義

姜 峰，杜 然

TAP聯(lián)合K i-67對判斷非小細胞肺癌患者預后的臨床意義

姜 峰1，杜 然2

目的探討腫瘤異常蛋白（tumor abnormal protein，TAP）和 Ki-67在非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）中的表達，并分析其與 NSCLC臨床病理特征關系及患者術后預后的意義。方法收集113例 NSCLC患者的臨床資料和存檔石蠟組織標本，按生存時間將患者分為 A組（生存時間 ＜5年）和 B組（生存時間≥5年）。免疫組化檢測腫瘤組織中 Ki-67蛋白的表達，分析 TAP面積及Ki-67增殖指數(shù)與患者預后的關系。結果（1）TAP面積越大，生存時間越短。Ki-67增殖指數(shù)越高，生存時間越短；兩者之間呈負相關。（2）A組 TAP面積陽性率為81.70%，明顯高于B組（54.76%），且兩組相比差異有顯著性（P＜0.05），表明Ki-67增殖指數(shù)與患者的生存期成反比；A組 Ki-67增殖指數(shù)陽性率為76.06%，明顯高于B組（57.14%），且兩組相比差異有顯著性（P＜0.05），表明 Ki-67增殖指數(shù)與患者的生存期成反比。（3）A組 TAP、Ki-67均 陽性 的比 率為57.75%，明顯高于B組（35.71%），A組TAP、Ki-67均陰性的比率為9.86%，明顯低于 B組（26.20%）；113例 NSCLC患者均陽性的比率為40.71%，均陰性比率為 15.93%，兩組相比差異有顯著性（P＜0.05），且比單項比較更為精確，表明 TAP聯(lián)合Ki-67對患者預后判斷更準確。結論TAP聯(lián)合 Ki-67可作為判斷 NSCLC患者預后的重要指標。

肺腫瘤；非小細胞肺癌；TAP；Ki-67；預后

原發(fā)性肺癌無論發(fā)病率和病死率均增長較快［1－3］，其中約 85% 為 非 小 細 胞 肺 癌 （non-small cell lung cancer，NSCLC）［4］，其預后也越來越引起人們的關注。Ki-67是一種與細胞周期相關的蛋白質，與腫瘤的增殖、浸潤、轉移潛能和預后密切相關［5］。腫瘤異常蛋白（tumor abnormal protein，TAP）是細胞中癌基因和抑癌基因突變后表達的產(chǎn)物，TAP高凝聚是癌細胞在異常增生過程中的共同特征［6］。近年來，TAP已被廣泛應用于消化系統(tǒng)、肺癌、乳腺癌等早期篩查或臨床治療后效果評估。本實驗檢測113例 NSCLC患者的TAP凝聚情況及 Ki-67的表達，探討 TAP面積和 Ki-67增殖指數(shù)與 NSCLC患者的預后關系。

1 材料與方法

1.1 材料收集2009年7月 ～2010年12月聊城市腫瘤醫(yī)院術前行 TAP檢測并術后病理學確診的113例 NSCLC。淋巴結均無遠處轉移，術前均未接受放療、化療或其它抗癌治療。術后均行放、化療。113例NSCLC患者中臨床資料完整，男性78例，女性35例；年齡32～73歲，中位年齡51歲；無吸煙史者52例，有吸煙史者 61例；腺癌 37例，鱗癌 59例，腺鱗癌17例；中央型肺癌68例，周圍型肺癌45例；高分化19例，中分化46例，低分化 48例；生存時間＜5年者71例，≥5年者42例。腫瘤TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期36例，Ⅲ期24例。按生存時間將患者分為A組（生存時間＜5年）和 B組（生存時間≥5年）。所有病例采取電話或門診隨訪方式，隨訪截止日期2016年4月30日。

1.2 方法

1.2.1 制片 采指端末梢血，推至厚薄均勻的血片2張，干燥后移置操作水平凈化臺內(nèi)（溫度18～25℃）；相對濕度（45%～60%）約 10 min，使血片的溫度和濕度達到工作條件。將凝聚助劑充分搖勻滴加 3滴（每滴約 50μL，液滴斑點直徑10～12 mm）。1.5～2 h待血片上凝聚助劑自然干燥（TAP與凝聚助劑反應的過程）后，在滴過試劑的地方形成圓形“斑點”，即標本制作完成。

1.2.2 檢測 將標本置于圖像分析儀的顯微鏡下，用 4×平場消色差物鏡，在顯示屏上依次掃描觀察血片標本的3個斑點，尋找特異形態(tài)的凝聚物，有不規(guī)則類圓形晶體顆粒，顆粒呈淡綠色、淡黃色或棕色，中心有屈光性，四周因混合物較多而呈棕黑色或墨綠色為陽性，無上述顆粒檢出為陰性。將有可疑圖像的斑點轉用高倍鏡觀察，在瑞生 TAP檢測圖文系統(tǒng)中采集 ＞80μg以上的特異凝集物，面積總和乘以0.62，所得數(shù)值為檢測特異凝集物的最終數(shù)。

1.3 納入標準按照WHO（2010）肺癌標準進行分類［7］，術前有 TAP檢測結果，術后經(jīng)病理確診的NSCLC臨床相關資料完整；病理資料中有 Ki-67免疫組化表達的結果。

1.4 結果判定TAP面積 0～121μm2為陰性；陽性包括：TAP異常／凝聚物較小，面積121～225μm2；TAP異常／凝聚物較大，面積≥225μm2。原發(fā)腫瘤組織Ki-67免疫組化結果，對相應病理切片免疫組化結果進行復閱，Ki-67按陽性細胞的百分比進行計數(shù)，以陽性細胞數(shù)≤20%為陰性，21%～60%為弱陽性，≥61%為強陽性。

1.5 統(tǒng)計學方法應用 SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料采用 χ2檢驗；采用Kaplan-Meier法進行生存分析；關聯(lián)分析采用 Spearman等級相關分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2．1 TAP面積和 K i-67增殖指數(shù)與 NSCLC患者生存時間關系經(jīng)Spearman等級相關分析顯示，TAP面積和NSCLC患者生存時間呈顯著負相關，差異有統(tǒng)計學意義（rs＝－0.903，P＝0.000）；Ki-67增殖指數(shù)大小與 NSCLC患者生存時間呈顯著負相關，差異有統(tǒng)計學意義（rs＝－0.794，P＝0.000）；即TAP面積越大、Ki-67增殖指數(shù)越高，NSCLC患者生存時間越短。

2．2 A、B兩組患者 TAP面積和 Ki-67增殖指數(shù)與 NSCLC患者術后生存時間的關系A、B組患者術后生存時間差異與患者的病理類型、分化程度、TNM分期及吸煙史無關，與患者性別、年齡有關（表 1）。A組患者TAP面積陽性率為81.70%，明顯高于B組（54.76%），且兩組相比差異有顯著性（P＜0.05），表明 TAP面積與NSCLC患者生存時間成反比；A組 Ki-67增殖指數(shù)陽性率為 76.06%，明顯高于B組（57.14%），且兩組相比差異有顯著性（P＜0.05），表明 Ki-67增殖指數(shù)與 NSCLC患者的生存時間成反比（表2）。

表1 兩組患者的臨床資料［n（%）］

表2 A、B兩組TAP面積和 Ki-67增殖指數(shù)與NSCLC患者術后生存期的關系

2．3 聯(lián)合 TAP、K i-67檢測與 NSCLC患者生存時間的關系

A組 TAP、Ki-67均陽性的比率為 57.75%，明顯高于 B組（35.71%），A組Ki-67、TAP均陰性的比率為9.86%，明顯低于 B組（26.20%）；113例 NSCLC患者均陽性的比率為40.71%，均陰性比率為15.93%，兩組相比差異有顯著性（P ＜0.05），且比單項比較更精確，表明聯(lián)合 TAP、Ki-67對患者預后判斷更精確（表3）。

表3 聯(lián)合 TAP、K i-67檢測與 NSCLC患者生存時間關系

3 討論

臨床實踐證明，腫瘤和腫瘤標志物沒有嚴格意義上的一一對應關系，一種腫瘤可以產(chǎn)生多種腫瘤標志物，一種腫瘤標志物也可以出現(xiàn)在多種腫瘤中。TAP并不取決于惡性生成物的具體位置和組織結構，是各種腫瘤的共性物質，TAP檢測在同一反應中可以將幾十種腫瘤進行一次性組合檢測、高度聚集，極大的放大腫瘤信號，大大提高腫瘤檢測的靈敏度和準確性。另有研究表明，TAP與腫瘤大小無一定關系，在晚期腫瘤中的表達反而下降或陰性，認為此現(xiàn)象與終末期時癌細胞代謝下降、分泌的糖蛋白下降有關［8－9］。本組結果表明：隨著TAP面積增加，生存時間總趨勢越短，但亦有個例除外。

Ki-67是目前應用最廣泛的增殖細胞標記之一，它的表達出現(xiàn)于G1中期到晚期，S期和 G2期逐漸增加，有絲分裂期達高峰，分裂后迅速降解或丟失抗原決定簇，到 G0期則不表達，半衰期為 1 h或更短［10］。Ki-67被認為涉及細胞增殖的維持，然而其發(fā)揮功能的機制尚未清楚。資料表明 Ki-67增殖指數(shù)高低與腫瘤分化程度、浸潤轉移以及預后密切相關［11］。所以在腫瘤的研究中是一種重要的參考依據(jù)。文獻［12］還發(fā)現(xiàn) Ki-67增殖指數(shù)越高，腫瘤分化程度越低，提示腫瘤的增殖指數(shù)往往代表腫瘤的惡性程度。本組結果也印證這一特征：Ki-67增殖指數(shù)越高，患者的生存時間越短。

綜上所述，Ki-67和 TAP可以作為 NSCLC患者的獨立預后因素，聯(lián)合檢測兩者對 NSCLC患者術后預后判斷更加準確，值得臨床推廣。

［1］ Belani C P，Liao J.Maintenance therapy for non-small cell lung cancer［J］.Lancet，2010，375（9711）：281－282.

［2］ Dahlberg SE，Sandler A B，Brahmer JR，et al.Clinical course of advanced non-small cell lung cancer patients experiencing hypertension during treatmentwith bevacizumab in co-mbination with carboplatin and paclitaxel on ECOG 4599［J］.J Clin Oncol，2010，28（6）：949－954.

［3］ Jemal A，CenterM M，Desantis C，etal.Global patterns of cancer incidence and mortality rates and trends［J］.Cancer Epidemiol Biom Prev，2010，19（8）：1893－1907.

［4］ Suresh S，Ramalingam M D，Taofeek K，et al.Lung cancer：new biological insightsand recent therapeutic advances［J］.CA Cancer JClin，2011，61（2）：91－112.

［5］ 武世伍，承澤農(nóng)，俞 嵐，等.p16和 Ki-67在非小細胞肺癌組織中的表達及其與預后的關系［J］.中國組織化學與細胞化學雜志，2011，20（6）：605－609.

［6］ 吳永梅，張霽雯，蔡 琰.腫瘤異常蛋白（TAP）檢測在 Barrett食管及食管腺癌臨床診斷中的意義［J］.現(xiàn)代消化及介入診療，2015，2：83－84.

［7］ Molina JR，Yang P，cassivi SD，etal.Non-small cell lung cancer：epidemiology，risk foctors，treatment，and survivorship［J］. Mayo Clin Proc，2008，83（5）：584－594.

［8］ Molina JR，Yang P，cassivi SD，etal.Non-small cell lung cancer：epidemiology，risk foctors，treatment，and survivorship［J］. Mayo Clin Proc，2008，83（5）：584－594.

［9］ Matsumura M，Niwa Y，Kato N，et al.Detection of alphafetoproteinm RNA，an indicator of hematogenous spreading hepatocellular carcinoma，in thecirculation：a possible predictor ofmetastatic hepatocellular carcinoma［J］.Hepatology，1994，20（6）：1418－1425.

［10］Schulter C，Duchrow M，Wohlenberg C，etal.Molecular cloing of the cell proliferation associated nuclear antigen defined by antibody Ki-67 an unique green coding for anew，PEST protein［J］.Cell Biol，1993，123（3）：513.

［11］馮志寅，王維娜，董娟娟，等.P53、P63、Ki67分子標志物與食管癌淋巴結轉移相關性 Logistic回歸分析［J］.新疆醫(yī)科大學學報，2015，9：1091－1094.

［12］任秋華，肖明明，侯 慧，等.ER、PR、CerbB-2、p53和Ki67蛋白在乳腺癌中的表達及其意義［J］.中國腫瘤臨床與康復，2010，1：13－5.

R 655.3

：B

1001－7399（2017）01－0104－03

10.13315／j.cnki.cjcep.2017.01.028

接受日期：2016－11－31

1山東省聊城市腫瘤醫(yī)院胸外科 252000

2山東省聊城市人民醫(yī)院病理科 252002

姜 峰，男，碩士，主治醫(yī)師。E-mail：jiangfengyisheng＠163.com