解鉀菌的分離、鑒定及解鉀能力

呂睿+李博+宋鳳敏

摘要：為了開發(fā)高效微生物解鉀肥，利用解鉀菌選擇培養(yǎng)基，從陜西省周至縣獼猴桃園農(nóng)田土壤中分離出具有解鉀能力的菌株共計12株，通過純化培養(yǎng)，篩選出1株高效解鉀菌JK3。利用16S rDNA基因序列分析方法對該菌株的分類信息進行鑒定，鑒定結(jié)果表明該菌株為膠質(zhì)芽孢桿菌（Paenibacillus mucilaginosus），并通過試驗確定該菌株的最適培養(yǎng)條件：初始接種量1.5%，搖床轉(zhuǎn)速200 r/min，培養(yǎng)溫度30 ℃，初始pH值為7，最佳碳源為糖蜜，最佳氮源為麩皮。試驗結(jié)果可為解鉀菌JK3的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)提供數(shù)據(jù)支持。

關(guān)鍵詞：解鉀菌；分離；篩選；鑒定；最適條件

中圖分類號： S182 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2016）11-0471-04

鉀是植物生長所必需的三大營養(yǎng)元素之一，一般植物體內(nèi)含鉀量占干物質(zhì)質(zhì)量的0.3%～0.5%[1]。鉀的營養(yǎng)功能主要表現(xiàn)于鉀能激活多種酶的活性，目前已知的多種酶需要一價陽離子活化，其中鉀離子是植物體內(nèi)最有效的激活劑；鉀能促進光合作用，提高二氧化碳的同化率；鉀可促進作物體內(nèi)物質(zhì)的合成與轉(zhuǎn)運[2]；鉀能維持細胞膨壓，促進植物生長，植物各種正常代謝過程都需要細胞維持正常的結(jié)構(gòu)和形態(tài)，而細胞的正常結(jié)構(gòu)和形態(tài)的維持又需要一定的滲透壓，鉀離子和氯離子正是維持植物細胞滲透壓的主要離子；鉀能增強植物抗逆性[3]，鉀也能增強作物抗寒、抗旱、抗高溫、抗病、抗鹽、抗倒伏等的能力，從而提高其抵抗外界環(huán)境的忍耐能力。

然而，隨著種植業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，農(nóng)作物產(chǎn)量和復種指數(shù)的不斷提高，土壤中的耗鉀量不斷增加，全國耕地土壤速效鉀含量以2 mg/kg速度下降，南方各地土壤缺鉀情況更為嚴重[4-5]。一方面，我國可溶性鉀礦資源嚴重匾乏，國家每年花巨額外匯進口鉀肥仍難以滿足農(nóng)業(yè)上對鉀肥的需要[6-7]。另一方面，土壤自身含有大量的含鉀礦物，只是它們主要以穩(wěn)定的硅鋁酸鹽形式存在，其鉀不能為作物吸收利用[8]。土壤中的含鉀硅酸鹽礦物只有在理化因素和微生物的作用下，通過分化和分解逐步釋放出鉀，供作物生長利用。因此，利用微生物降解含鉀礦物就顯得尤為重要[9]。國內(nèi)外的研究表明，目前發(fā)現(xiàn)的解鉀菌株多為膠質(zhì)芽孢桿菌（Paenibacillus mucilaginosus）[10-11]，其在生物菌肥、生物冶金及污水處理方面有著廣泛的應(yīng)用前景[12]，因此，膠質(zhì)芽孢桿菌的研究受到廣泛關(guān)注。

本試驗以鉀長石粉作為唯一鉀源，通過選擇性培養(yǎng)，從獼猴桃大田土壤中分離出12株解鉀細菌，并通過分離、純化、復篩，得到1株解鉀能力較強的細菌JK3，研究該菌株的生理生化特征及它對鉀長石粉的降解特性，確定菌株的最適接種量、最適pH值、最適生長溫度及溶氧量對解鉀能力的影響，旨在確定該菌株的生長情況及解鉀能力，為開發(fā)新的成本低、效果好且不污染環(huán)境的解鉀菌，充分利用土壤中的鉀素資源提供科學依據(jù)，對發(fā)展綠色農(nóng)業(yè)具有十分重要的意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 土樣 土樣采自陜西省西安市周至縣獼猴桃園土壤，土樣采集方法為5點采樣法，去除表層土壤，用土鉆取深度為0～20 cm的土壤，將5個不同點的土樣混合為1份，裝入無菌樣品采集袋，標簽注明采樣信息，放入4 ℃冰箱保存。

1.1.2 礦樣 鉀長石粉過100目篩，然后用無菌水浸泡3 d，除去水溶性鉀[13]。

1.1.3 培養(yǎng)基 分離培養(yǎng)基[14]：蔗糖5.0 g，KH2PO4 0.5 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，CaCO3 5 g，瓊脂20 g，去離子水1.0 L，pH值7.2～7.5，121 ℃滅菌20 min。

選擇培養(yǎng)基：蔗糖5.0 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，CaCl2 0.1 g，F(xiàn)eCl3 0.005 g，鉀長石粉1.0 g，瓊脂20 g，去離子水 1.0 L，pH值7.2～7.5，121 ℃滅菌20 min。

1.2 方法

1.2.1 解鉀菌的富集 取3支250 mL錐形瓶，各裝入含無機鹽液體培養(yǎng)基100 mL，向錐形瓶中分別加入1 g土壤樣品，搖床培養(yǎng)3 d（溫度30 ℃，轉(zhuǎn)速180 r/min），吸取錐形瓶底部菌液進行轉(zhuǎn)接，富集解鉀菌，每次轉(zhuǎn)接前將菌液涂布到平板上計數(shù)。

1.2.2 解鉀菌的初篩 將富集培養(yǎng)基中的菌種轉(zhuǎn)接到含鉀長石無機鹽培養(yǎng)基的平板上，置于30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，出現(xiàn)菌落后，挑取單菌落轉(zhuǎn)接至新的固體培養(yǎng)基上，重復上述操作3次，將單菌落放入冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 解鉀菌的復篩 將初篩出的菌株轉(zhuǎn)接到裝有100 mL鉀長石液體培養(yǎng)基中，恒溫培養(yǎng)3 d，涂布，記錄菌數(shù)，同時檢測鉀長石的降解，在菌液中加入4 mL H2O2，121 ℃消解 30 min，4 000 r/min離心5 min[1]，取上清液，定容至100 mL，以不接菌處理為對照，用火焰分光光度計測量速效鉀含量，篩選出1株生長旺盛、降解能力強的菌株。

1.2.4 菌株形態(tài)學及生理生化特征 將分離純化得到的菌株在固體平板上進行劃線培養(yǎng)，在溫度為30 ℃的條件下培養(yǎng)2 d，觀察菌株生長狀況及菌落特征。

1.2.5 菌株16S rDNA序列分析及比對 選用細菌16S rDNA通用引物27F（5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′）、1 492R（5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′）建立PCR擴增體系進行擴增。PCR反應(yīng)體系（50 μL）：5×One Taq Standard Reaction Buffer 10 μL，10 mmol/L dNTPs 1 μL，10 μmol/L Forward Primer 1 μL，10 μmol/L Reverse Primer 1 μL，One Taq DNA Polymerase 1 μL，Template DNA 2.0 μL，Nuclease-Free Water 34 μL。擴增程序：94 ℃預變性10 min；94 ℃變性30 s，65 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共30個循環(huán)；72 ℃后延伸 10 min。產(chǎn)物經(jīng)純化后測定基因序列，利用BLAST將菌株的基因序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中的序列進行比較，選取相似性較高的模式菌株序列，用MEGA5.1中Neighbor-Joining法比較同源性，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.6 菌株解鉀能力測定 配制解鉀培養(yǎng)基（無鉀）按 100 mL 每瓶分裝于250 mL錐形瓶中，各加入0.1 g準確稱取的鉀長石粉，在121 ℃條件下滅菌20 min，每個錐形瓶接入2%待測菌懸液，30 ℃條件下?lián)u床培養(yǎng)5 d，菌液中加入 4 mL H2O2，121 ℃消解30 min，然后4 000 r/min離心5 min，取上清液，定容至100 mL，利用火焰分光光度計測定上清液中速效鉀含量。

1.2.6.1 最適生長溫度的測定 按2%接種量將菌株接入培養(yǎng)液中，調(diào)節(jié)pH值為7，將菌種接于解鉀液體培養(yǎng)基中，分別置于溫度為26、28、30、32、34 ℃的搖床中培養(yǎng)5 d，菌液中加入4 mL H2O2，121 ℃消解30 min，然后4 000 r/min離心 5 min，取上清液，定容至100 mL，以不接菌處理為對照，檢測速效鉀含量。

1.2.6.2 最適生長轉(zhuǎn)速的測定 按試驗得出的最適接種量將菌液接種到解鉀液體培養(yǎng)基中，調(diào)節(jié)pH值為7，溫度設(shè)置為 30 ℃，調(diào)節(jié)搖床轉(zhuǎn)速分別為140、180、200、220 r/min，培養(yǎng)5 d后，菌液中加入4 mL H2O2，121 ℃消解30 min，然后 4 000 r/min 離心5 min，取上清液，定容至100 mL，以不接菌處理為對照，檢測速效鉀含量。

1.2.6.3 最適初始pH值的測定 配制解鉀液體培養(yǎng)基，分組調(diào)節(jié)pH值為6、7、8、9，按最適初始接種量和最適生長轉(zhuǎn)速將菌液接種到解鉀菌篩選培養(yǎng)基中，在30 ℃條件下?lián)u瓶培養(yǎng) 5 d，菌液中加入4 mL H2O2，121 ℃消解30 min，然后 4 000 r/min 離心5 min，取上清液，定容至100 mL，以不接菌處理為對照，檢測速效鉀含量。

1.2.6.4 最適初始接種量測定 配制液體培養(yǎng)基，將菌液進行稀釋，按0.1%、0.5%、1%、1.5%、2%等5個接種量接入到解鉀培養(yǎng)基中，在30 ℃條件下?lián)u瓶培養(yǎng)5 d，菌液中加入 4 mL H2O2，121 ℃消解30 min，然后4 000 r/min離心5 min，取上清液，定容至100 mL，以不接菌處理為對照，檢測速效鉀含量。

1.2.6.5 碳源利用試驗 被測碳源為蔗糖、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、糖蜜、葡萄糖，濃度為1%，在配好的液體培養(yǎng)基中接入菌種，按前述試驗確定的最適培養(yǎng)條件將各樣品搖瓶培養(yǎng) 5 d，菌液經(jīng)消解，離心處理，取上清液測定速效鉀含量。

1.2.6.6 氮源利用試驗 被測氮源為酪蛋白胨、馬鈴薯汁[1]、硫酸銨、大豆蛋白胨、麩皮，氮源濃度為1%。接入菌種，按前述試驗確定的最適培養(yǎng)條件將各樣品搖瓶培養(yǎng)5 d，菌液經(jīng)消解，離心處理，取上清液測定速效鉀含量。

1.2.7 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)采用Excel 2010和SPSS 19統(tǒng)計軟件進行方差分析和多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 解鉀菌的篩選

對土壤樣品進行涂布處理，初步得到菌株56株，經(jīng)復篩，得到具有高效解鉀能力的菌株12株，通過火焰原子吸收分光光度計測量解鉀量。由表1可知，12株解鉀菌的解鉀能力均較強，相比于對照組均明顯增強。其中，JK2解鉀效果最弱，菌液中速效鉀含量為2 mg/L，比空白對照增加 5.26%；而菌株JK3培養(yǎng)液中速效鉀含量最高，達到 3.7 mg/L，比空白對照增加了94.74%，其解鉀能力最強。菌株JK12解鉀量為3.5 mg/L，與菌株JK3差異不顯著，菌株JK3的解鉀率明顯高于其他菌株，本試驗以JK3菌株為研究對象，對其菌落特征和解鉀特性作進一步研究。

2.2 菌落形態(tài)及生理生化特征

采用平板劃線法將JK3菌株進行純化，并轉(zhuǎn)接至固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)2 d后，觀察菌株形態(tài)。如圖1所示，菌株單菌落呈水滴狀，菌落無色透明，邊緣光滑，表面濕潤且黏稠，菌落直徑約為0.5 cm。2.3 16S rDNA測序分析

菌株JK3經(jīng)16S rDNA測序獲得1 400 bp的基因片段，將序列信息提交到GenBank數(shù)據(jù)庫中，利用BLAST將菌株的基因序列進行相似性比較，結(jié)果表明，菌株JK3與膠質(zhì)芽孢桿菌屬同源性很高，從16S rDNA序列相似性比較結(jié)果看，菌株JK3與膠質(zhì)芽孢桿菌相似性達到100%， 選取21株同源性較高的膠質(zhì)芽孢桿菌菌株序列與待測菌株序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，如圖2所示。從系統(tǒng)發(fā)育樹可以看出，菌株JK3與膠質(zhì)芽孢桿菌相似性達到100%，且處于同一分支，距離最近，鑒定菌株JK3為膠質(zhì)芽孢桿菌。

2.4 菌株解鉀能力研究

2.4.1 最適培養(yǎng)溫度 溫度的變化對菌株的生長有顯著影響，由圖3可看出，隨著溫度的升高，菌株解鉀能力逐漸增強，當溫度達到30 ℃時，解鉀量達到最高，菌液中的速效鉀含量達到5.82 mg/L，比28 ℃時增加了0.7 mg/L，而溫度為32 ℃時，解鉀量為5.13 mg/L，與28 ℃時差異不顯著，可能是溫度升高導致菌株生長受到抑制，使解鉀能力降低，因此確定菌株JK3的最適生長溫度為30 ℃。

2.4.2 最適培養(yǎng)轉(zhuǎn)速 由圖4可看出，不同搖床轉(zhuǎn)速對解鉀率有明顯影響，當搖床轉(zhuǎn)速增加時，菌株解鉀能力逐漸增強，當轉(zhuǎn)速達到200 r/min時，菌液中速效鉀含量最高，菌液中的速效鉀含量達到5.36 mg/L；當轉(zhuǎn)速達到220 r/min時，解鉀能力降低，菌液中速效鉀含量為4.70 mg/L，比200 r/min時顯著降低0.66 mg/L。其原因可能是轉(zhuǎn)速過高，產(chǎn)生的剪切力對菌體造成機械損傷，降低了菌株的解鉀能力[15]，說明菌株JK3的最適培養(yǎng)轉(zhuǎn)速為200 r/min。

2.4.3 最適培養(yǎng)pH值 不同pH值對菌株生長及解鉀能力有顯著影響。由圖5可看出，當pH值達到7時，解鉀量達到最大，菌液中的速效鉀含量達到6.1 mg/L，與其他pH值時有顯著差異；當pH值達到9時，解鉀能力為4.8 mg/L，與pH值為6時無顯著差異，而比pH值為8時低了0.6 mg/L，有顯著差異。由此確定菌株JK3的最適生長pH值為7，且菌株適合生長于中性或偏堿性的環(huán)境中，這對于菌株的大規(guī)模生產(chǎn)具有重要的指導意義。

2.4.4 最適初始接種量 由圖6可以看出，隨接種量的增加，速效鉀含量呈逐漸上升的趨勢；當接種量為1.5%時，菌液中速效鉀含量達到最大，為5.82 mg/L，比接種量為1.0%時高了 1.5 mg/L，且有顯著性差異；而當接種量達到2%時，解鉀量為5.83 mg/L，與1.5%時無顯著性差異。因此，從經(jīng)濟角度考慮，選取1.5%為最適接種量。

2.4.5 最佳初始碳源 不同碳源對菌株JK3的解鉀能力有顯著影響，以糖蜜為碳源時，菌液速效鉀含量最高，達到了 5.6 mg/L，其解鉀能力最強；以淀粉為碳源時，解鉀能力次之，菌液中速效鉀含量達到5.1 mg/L，比糖蜜低了0.5 mg/L，有顯著性差異；而以葡萄糖為碳源時，解鉀能力最弱，速效鉀含量為4.2 mg/L，與其他碳源相比，均存在顯著性差異。結(jié)果表明，該解鉀菌株對碳源的利用以雙糖和多糖為主，利用效率優(yōu)于單糖，其最適生長碳源為糖蜜。

2.4.6 最佳初始氮源 不同氮源對菌株JK3的解鉀能力有顯著影響，以麩皮（麩皮加水煮沸后過濾，取濾液）為氮源時，菌液速效鉀含量最高，達6.1 mg/L，其解鉀能力最強；以大豆蛋白胨為氮源時，解鉀能力次之，菌液中速效鉀含量達到5.4 mg/L，比麩皮低0.7 mg/L，且存在顯著性差異；而以硫酸銨為氮源時，解鉀能力最弱，速效鉀含量為4.3 mg/L，與其他氮源相比，均有顯著性差異。結(jié)果表明，菌株對有機氮的利用率高于無機氮，菌株最適生長氮源為麩皮濾液。

3 討論

隨著種植業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，農(nóng)作物產(chǎn)量和復種指數(shù)的不斷提高，土壤中耗鉀量的不斷增加，全國耕地土壤速效鉀含量逐年下降，南方各地土壤缺鉀情況更為嚴重。土壤中的含鉀硅酸鹽礦物只有在理化因素和微生物的作用下，才會通過分化和分解逐步釋放出鉀，供作物生長利用。土壤中含有大量的解鉀菌株[16]，李海龍等從秦嶺周至縣土壤中篩選出1株高效解鉀菌，解鉀率達到25.1%[17]；袁文功等從云南昆明白泥山土壤樣品中分離獲得1株硅酸鹽細菌，其解鉀量比空白組高出1.79倍[18]。研究表明，目前發(fā)現(xiàn)的解鉀菌株多為膠質(zhì)芽孢桿菌，其在生物菌肥、生物冶金及污水處理方面有著廣泛的應(yīng)用前景，因此，膠質(zhì)芽孢桿菌的研究受到廣泛關(guān)注[12]。本研究從周至縣獼猴桃園土壤中篩選出1株高效解鉀菌株，通過16S rDNA測序，并對序列進行比對確定其為膠質(zhì)芽孢桿菌，命名為JK3。

不同菌株解鉀能力也不相同，秦文旺等從鉀頁巖礦區(qū)分離篩選得到1株解鉀能力強的野生型膠質(zhì)芽孢桿菌，解鉀能力達到2.8 mg/L[19]；麻瑞陽從不同作物的土壤中篩選出12株解鉀菌株，解鉀能力最高達到9.61 mg/L[20]。研究表明，菌株JK3在最適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，解鉀量可達到6.1 mg/L，具有較強的解鉀能力。而不同的菌株培養(yǎng)條件對菌株解鉀能力也有顯著影響，試驗表明，菌株JK3在初始pH值為7、轉(zhuǎn)速 200 r/min、培養(yǎng)溫度30 ℃的條件下解鉀能力最強。接種量的選擇，綜合了菌株解鉀能力及經(jīng)濟效益等因素，確定最適接種量為1.5%，解鉀能力達到5.82 mg/L，與2%接種量時的5.83 mg/L無顯著差異。本試驗中，菌株JK3以糖蜜為唯一碳源時解鉀能力最強，而以葡萄糖為唯一碳源時解鉀能力最弱，分別是5.86、4.31 mg/L，說明菌株對多糖的利用優(yōu)于單糖。而對氮源的利用則表現(xiàn)為有機氮優(yōu)于無機氮，其解鉀能力分別為6.1、4.26 mg/L。

4 結(jié)論

本研究從獼猴桃園采集土樣，篩選到12株高效解鉀菌，通過鑒定和解鉀能力的測定，復篩出1株解鉀能力最強的菌株，利用16S rDNA基因序列分析方法對該菌株的分類信息進行鑒定，鑒定結(jié)果表明該菌株為膠質(zhì)芽孢桿菌，命名為菌株JK3，其解鉀量達 6.1 mg/L，具有較高的解鉀能力。通過試驗確定該菌株的最適培養(yǎng)條件為：初始接種量1.5%，搖床轉(zhuǎn)速200 r/min，培養(yǎng)溫度30 ℃，初始pH值7，最佳碳源為糖蜜，最佳氮源為麩皮，為菌株的開發(fā)利用提供數(shù)據(jù)支持和理論基礎(chǔ)。

參考文獻：

[1]劉五星. 膠質(zhì)芽孢桿菌解鉀作用與發(fā)酵條件研究及在煙草上的應(yīng)用[D]. 南京：南京師范大學，2003.

[2]郝艷淑，姜存?zhèn)}，夏 穎，等. 植物鉀的吸收及其調(diào)控機制研究進展[J]. 中國農(nóng)學通報，2011，27（1）：6-10.

[3]劉曉燕，何 萍，金繼運. 鉀在植物抗病性中的作用及機理的研究進展[J]. 植物營養(yǎng)與肥料學報，2006，12（3）：445-450.

[4]吳振芳. 內(nèi)切葡聚糖酶基因在畢赤酵母中高效表達及其結(jié)構(gòu)域重構(gòu)研究[D]. 成都：四川農(nóng)業(yè)大學，2009.

[5]季鵬章. 生物鉀肥及其在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用[J]. 云南熱作科技，1999，22（1）：45-46.

[6]趙晨曦，劉前剛，張志元. 磷鉀細菌解磷解鉀能力的研究[J]. 湖南農(nóng)業(yè)大學學報：自然科學版，2005，30（6）：519-521.

[7]唐 勇，陸 玲. 解磷微生物及其應(yīng)用的研究進展[J]. 天津農(nóng)業(yè)科學，2001，7（2）：1-5.

[8]朱向東，王宏庭. 土壤鉀素管理研究進展[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學，2013，41（11）：1274-1281.

[9]麻瑞陽，張愛民，惠小雙，等. 高效解磷解鉀菌 NX-11 菌株的分離篩選，鑒定及最佳培養(yǎng)條件的確定[J]. 華北農(nóng)學報，2013，28（2）：202-208.

[10]Sugumaran P，Janarthanam B. Solubilization of potassium containing minerals by bacteria and their effect on plant growth[J]. World journal of agricultural sciences，2007，3（3）：350-355.

[11]Calvaruso C，Turpault M-P，F(xiàn)rey-klett P. Root-associated bacteria contribute to mineral weathering and to mineral nutrition in trees：a budgeting analysis[J]. Applied and Environmental Microbiology，2006，72（2）：1258-1266.

[12]馮雅麗，王宏杰，李浩然，等. 一株產(chǎn)絮凝劑硅酸鹽細菌的篩選及其絮凝特性[J]. 中南大學學報：自然科學版，2008，39（5）：934-939.

[13]何齊莊，金 迪，彭清靜. 一株鉀長石分解菌的分離、鑒定及系統(tǒng)發(fā)育[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學，2010，38（1）：23-25.

[14]黨 雯，郜春花，張 強，等. 解鉀菌的研究進展及其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學，2014，42（8）：921-924.

[15]王 雪，袁曉凡，趙 兵，等. 膠質(zhì)芽孢桿菌培養(yǎng)條件及發(fā)酵工藝的研究進展[J]. 過程工程學報，2010，10（2）：409-416.

[16]Friedrich S，Platonova N，Karavaiko G，et al. Chemical and microbiological solubilization of silicates[J]. Acta biotechnologica，1991，11（3）：187-196.

[17]李海龍，谷 潔，張宏斌，等. 秦嶺山區(qū)硅酸鹽細菌的分離，篩選以及初步鑒定[J]. 西北農(nóng)業(yè)學報，2011，20（4）：194-199.

[18]袁文功，季秀玲，鄧 偉，等. 一株硅酸鹽細菌的分離及解鉀活性研究[J]. 中國微生態(tài)雜志，2012，24（3）：38-41.

[19]秦文旺，牧耀貴，呂利華，等. 一株解鉀高活性膠質(zhì)芽孢桿菌的篩選與育種[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學，2015，43（4）：434-439.

[20]麻瑞陽. 高效解磷解鉀菌株 NX-11 的分離篩選鑒定及作用效果分析[D]. 保定：河北農(nóng)業(yè)大學，2013.