楊俊生 蔡國(guó)祥

(1.江蘇省鹽城市亭湖區(qū)鹽東鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心 224050；2.江蘇省鹽城生物工程高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校 224051)

家蠶抗病毒藥物研究進(jìn)展

楊俊生1蔡國(guó)祥2*

(1.江蘇省鹽城市亭湖區(qū)鹽東鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心 224050；2.江蘇省鹽城生物工程高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校 224051)

闡述了抗病毒藥物、單克隆抗體、滅活疫苗在蠶桑生產(chǎn)方面的應(yīng)用研究進(jìn)展，以期為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)家蠶新抗病毒藥物提供參考。

家蠶；病毒??；抗病毒藥物；疫苗

家蠶病毒病有家蠶血液型膿病(NPV)、中腸型膿病(CPV)、膿核病(DNV)和病毒性軟化病(BmFV)四種，一旦發(fā)生，傳播極快，損失極大，廣大蠶農(nóng)深受其害，一般農(nóng)戶損失產(chǎn)量約20%，重害農(nóng)戶可導(dǎo)致顆粒無(wú)收。目前，生產(chǎn)上主要采用以消毒防病為主的預(yù)防措施，存在防治成本高、防治效果差、使用不方便及大面積使用化學(xué)藥劑消毒帶來(lái)環(huán)境污染等問(wèn)題。雖有少量抗病毒病化學(xué)藥物的中試產(chǎn)品投放市場(chǎng)，由于防治效果不超過(guò)60%，故均未能獲得國(guó)家農(nóng)業(yè)部頒發(fā)“獸藥的新藥證書(shū)”，個(gè)別實(shí)驗(yàn)室也曾研制出單克隆抗體用于治療及預(yù)防家蠶病毒病，但預(yù)防效果均未達(dá)到80%，且防治成本極高[1]，導(dǎo)致未能在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用。因此篩選高效價(jià)家蠶抗病毒病藥物，研制家蠶病毒病的高效價(jià)單克隆抗體及多克隆抗體，對(duì)于提高家蠶病毒的防治效果，提高蠶桑生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益，降低蠶桑生產(chǎn)成本，保護(hù)生態(tài)環(huán)境，有一定的現(xiàn)實(shí)意義。

1 抗病毒藥物研究進(jìn)展

研究發(fā)現(xiàn)5-氟尿嘧啶等尿嘧啶代謝類似物可作為抗病毒藥劑，據(jù)報(bào)道有效濃度為5×10-4～5×10-5mol/L的5-氟尿嘧啶，可使病毒性軟化病的發(fā)病率降低20%～30%；9-氨基乳酸吖啶能使核型多角體病發(fā)病率降低30%～60%;烷基化5'-鳥(niǎo)嘌呤核苷酸能使家蠶對(duì)NPV的抵抗性提高1 000倍以上；萘啶酮酸對(duì)家蠶核型多角體病和病毒性軟化病的發(fā)病率有明顯的抑制作用，但對(duì)質(zhì)型多角體病卻無(wú)效；果糖嗪對(duì)核型多角體病、質(zhì)型多角體病、病毒性軟化病的發(fā)生有一定的抑制作用[3]；家蠶添食聚胞肌苷也可對(duì)核型多角體病有抑制作用[4]。由于病毒是嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生，是明顯依靠宿主細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)合成的生物，某些病毒的核酸更直接整合于宿主細(xì)胞內(nèi)。所以對(duì)抗病毒藥物的研發(fā)提出很高的要求，必須選擇性地破壞或抑制細(xì)胞內(nèi)外病毒代謝，而對(duì)細(xì)胞，至少對(duì)未感染的細(xì)胞不產(chǎn)生致死性損傷。但是目前還沒(méi)有研制出只干擾病毒復(fù)制，而不影響宿主細(xì)胞正常代謝的，且能夠在生產(chǎn)上大面積推廣的抗病毒藥物[4～6]。

2 單克隆抗體在蠶桑生產(chǎn)上的應(yīng)用

關(guān)于單克隆抗體及多克隆抗體在家蠶病毒病防治中的應(yīng)用，也取得了一些進(jìn)展，最為成功的是應(yīng)用免疫卵黃抗體預(yù)防家蠶血液型膿病。卵黃抗體是產(chǎn)蛋雞受特定抗原刺激后產(chǎn)生特異性，并轉(zhuǎn)移、貯存在卵黃中的免疫球蛋白，故又稱卵黃免疫球蛋白?？贵w不但是生物科學(xué)研究中的一個(gè)主要工具，在被動(dòng)免疫治療中也有很大的實(shí)用價(jià)值。其價(jià)值在于，對(duì)進(jìn)入未免疫和免疫缺乏個(gè)體的有害抗原有特異性的結(jié)合作用，對(duì)動(dòng)物個(gè)體能很快地起到被動(dòng)保護(hù)作用。

免疫卵黃抗體是當(dāng)今生物科學(xué)研究領(lǐng)域的重要發(fā)現(xiàn)，國(guó)內(nèi)外不少學(xué)者進(jìn)行了大量研究，卵黃抗體作為一種具有生物活性的免疫球蛋白，在貯存、生產(chǎn)、加工、攝食及消化過(guò)程中保證其穩(wěn)定性是非常關(guān)鍵的。實(shí)驗(yàn)證明，免疫卵黃抗體具有較好的穩(wěn)定性，具有耐酸、耐堿、耐熱、抗離子強(qiáng)度、抗酶降解等性質(zhì)?；诿庖呗腰S抗體產(chǎn)量高、成本低、便于規(guī)?；a(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)[7]，對(duì)免疫卵黃抗體的研制具有潛在的學(xué)術(shù)研究?jī)r(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景，可在蠶病防治上發(fā)揮積極的作用。

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，同時(shí)將含免疫卵黃抗體的桑葉與病毒葉一起給家蠶添食，免疫卵黃抗體對(duì)NPV具有抑制作用，但先添病毒葉后再給予抗體葉，則無(wú)此抑制作用，表明卵黃抗體對(duì)家蠶血液型膿病有預(yù)防作用，但無(wú)治療作用。在添食免疫卵黃抗體后，通過(guò)對(duì)死籠率、繭層率、結(jié)繭率影響的調(diào)查，結(jié)果表明免疫卵黃抗體對(duì)家蠶生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)顯著不良影響，使用安全，且對(duì)人、畜、環(huán)境不會(huì)造成危害[9]，但其預(yù)防效果僅在80%左右，尚未達(dá)到在生產(chǎn)上大面積推廣要求。

3 滅活疫苗在蠶桑生產(chǎn)上的應(yīng)用

滅活疫苗在蠶桑生產(chǎn)的應(yīng)用，也取得了一定的進(jìn)展。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，同一細(xì)胞被2種病毒入侵時(shí)，往往產(chǎn)生2種完全不同的結(jié)果。一是2種病毒互不相干各自增值;另一種情況是1種病毒抑制另1種病毒的增值。第二種現(xiàn)象也被稱為干擾現(xiàn)象，這種干擾現(xiàn)象，不僅在昆蟲(chóng)病毒中能看到，在許多動(dòng)植物病毒中也能看到。對(duì)CPV來(lái)說(shuō)，取得的成果特別多。利用熱處理、紫外線照射等技術(shù)滅活的CPV病毒給蠶添食后，對(duì)活性CPV病毒的感染有干擾作用。關(guān)于這種干擾現(xiàn)象的機(jī)制，推斷是由家蠶食下不活化病毒后，其消化液中或中腸皮膜細(xì)胞靠圍食膜一面形成抗病毒狀的物質(zhì)，由此得以抑制病毒的感染，結(jié)果可看到病毒病發(fā)病受到抑制[9]。對(duì)于昆蟲(chóng)桿狀病毒來(lái)說(shuō)，其具有相對(duì)狹窄的宿主域。當(dāng)把苜蓿尺蠖核型多角體病毒(AcMNPV)添食給家蠶時(shí)，雖然它和家蠶核型多角體病毒(BmNPV) DNA序列的同源性有95%左右，但AcMNPV卻不能在家蠶細(xì)胞中很好地復(fù)制，對(duì)家蠶幼蟲(chóng)不具有致病能力，然而其基因組中的個(gè)別基因可在被接種該病毒的家蠶幼蟲(chóng)體內(nèi)表達(dá)，這些基因的表達(dá)可能對(duì)其感染的優(yōu)勢(shì)病毒BmNPV復(fù)制所需原料蛋白及轉(zhuǎn)錄因子形成競(jìng)爭(zhēng)，進(jìn)而抑制BmNPV在家蠶幼蟲(chóng)體內(nèi)的復(fù)制表達(dá)[10]。

4 展望

近幾年，我國(guó)科技工作者在人及家畜家禽的病毒病防治藥劑研究方面取得了突破性的進(jìn)展。國(guó)家醫(yī)療衛(wèi)生行政主管部門(mén)批準(zhǔn)上市治療皰疹病毒感染的藥物有：阿昔洛韋、伐昔洛韋、泛昔洛韋、阿糖腺苷，用于治療巨細(xì)胞病毒感染的藥物有：更昔洛韋、膦甲酸鈉；用于治療流感及呼吸道病毒感染的藥物有：拉米夫定、替比夫定、阿德福韋、恩替卡韋及重組人干擾素ɑ-2a、重組人干擾素ɑ-2b、聚乙二醇干擾素ɑ-2a等[11]。目前美國(guó)已有金剛甲烷、金剛乙胺、扎那米韋和奧司他韋四種藥劑批準(zhǔn)上市用于臨床治療人甲型流感，2013年4月5日，中國(guó)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局又批準(zhǔn)了抗流感新藥帕拉米韋氯化鈉注射液用于臨床治療甲型和乙型流感[12]。在疫苗方面，有七十多種滅活及減毒疫苗廣泛用于人的傳染病防治，有數(shù)十種疫苗用于家禽及家畜的傳染病防治,許多傳染病基本滅絕[13]。已有研究表明，一些人的病毒病治療藥劑對(duì)家蠶病毒病有治療效果，一些疫苗也對(duì)病毒病有一定的預(yù)防效果[8]。 因此借鑒人畜病毒病的治療藥劑治療家蠶病毒病，借鑒人畜制備單克隆抗體及多克隆抗體方法預(yù)防家蠶病毒病，從其中篩選出高效價(jià)抗家蠶病毒病藥物及高效價(jià)抗病毒病疫苗,是一條值得探索的路子。

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鹽城市農(nóng)業(yè)自主創(chuàng)新引導(dǎo)基金(項(xiàng)目編號(hào)：YK2015030)。

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