紫衫醇對大鼠肝纖維化的抑制作用及機(jī)制研究

葉軻，白寧，周樂杜，李勁東，王志明

（中南大學(xué)湘雅醫(yī)院 普通外科，湖南 長沙 410008）

肝纖維化常見的原因是由于酒精、自體免疫反應(yīng)、HBV和HCV病毒感染、非酒精性脂肪肝疾病及各種肝毒素等因素誘發(fā)肝細(xì)胞損傷[1]，造成一些其他類型肝細(xì)胞及遷移的炎性細(xì)胞活化，并釋放大量細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子導(dǎo)致肝星狀細(xì)胞或肌纖維母細(xì)胞活化、分化與增殖，合成大量細(xì)胞外基質(zhì)成分，并逐漸沉積從而引起肝纖維化[2]。2，4-二甲基亞硝胺（DMN）是有劇毒的肝毒性化合物[3]，有研究[4]證實DMN模型中肝組織病理學(xué)改變相似于人類酒精性肝纖維化的病理改變。且在停止DMN造模后自行恢復(fù)困難，是一種抗纖維化藥物治療的經(jīng)典模型[5]。紫杉醇具有抑制細(xì)胞分裂和增殖，抗腫瘤的作用[6]。本研究中通過紫衫醇對大鼠肝纖維化的抑制作用，研究肝星狀細(xì)胞TGF-β信號通路激活情況來探討紫杉醇抑制肝纖維化的具體分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物與細(xì)胞 Wistar雄性大鼠，體質(zhì)量 140～170 g，動物合格證編號 0278596，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，實驗動物生產(chǎn)許可證號為SCXK（京）2017-1023，飼養(yǎng)于中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院實驗動物中心，均飼養(yǎng)于（25±2）℃的屏障實驗室內(nèi)，每12 h光照明暗交替，自由進(jìn)食及飲水。大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6購自中科院細(xì)胞庫，用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)。

1.1.2 實驗儀器 RM2235 LEICA病理切片機(jī)、EG1150C LEICA生 物 組 織 冷 凍 機(jī)、EG1150H LEICA生物組織包埋機(jī)、ASP200 LEICA生物組織自動脫水機(jī)：德國萊卡公司；BX41OLYMPUS顯微鏡：日本OLYMPUS株式會社；Nikon ECLIPSE Ti顯微攝像系統(tǒng)：日本Nikon株式會社。PCR儀：美 國 ABI Veriti； 熒 光 定 量 PCR 儀： 美 國 ABI StepOnePlus；低溫高速離心機(jī)：美國Microfuge 20R；核算蛋白質(zhì)定量儀：美國Thermo NanoDrop 2000。

1.1.3 實驗藥品與試劑 紫杉醇購自深圳信立泰藥業(yè)有限公司，批號20160112；DMN購買于上海藍(lán)季生物公司，由日本東京化成工業(yè)株式會社生產(chǎn)，批號76F72-TF；甲醛溶液，500 mL/瓶，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號201507109；大鼠透明質(zhì)酸ELISA試劑盒購自上海藍(lán)基生物科技有限公司；α肌動蛋白（α-SMA）、纖連蛋白（fibronectin）以及I、III型膠原抗體均為英國Abcam公司產(chǎn)品；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、qPCR試劑盒為寶生物工程（大連）有限公司產(chǎn)品。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗動物分組與處理 將30只大鼠隨機(jī)均分為3組：正常對照組、肝纖維化模型組、肝纖維化模型+紫杉醇處理組。肝纖維化模型組、肝纖維化模型+紫杉醇組均采用DMN造模（用DMN 10 mg/kg腹腔連續(xù)注射7 d，造成大鼠肝臟廣泛性肝壞死，然后停藥，約14 d后，大鼠肝臟可呈纖維化表現(xiàn)），期間正常對照組以同樣的方式給予生理鹽水處理，以上連續(xù)7 d的注射完成后，于實驗第8天開始，肝纖維化模型+紫杉醇組大鼠給予紫杉醇液（1 mg/kg）尾靜脈注射，隔日1次，共3次，正常對照組與肝纖維化模型組則以同樣的方式給予同體積的生理鹽水。

1.2.2 標(biāo)本采取與處理 于實驗第14天，用2%戊巴比妥鈉按2 mL/100 g劑量腹腔注射麻醉大鼠，腹主動脈采血，血液 4℃下靜置 2 h 后，3 000r/min，15min離心，取上清分裝于1.5 mL離心管，于-80℃保存；取肝組織行甲醛液固定、石蠟包埋、切片。

1.2.3 動物實驗檢測指標(biāo)與方法 用全自動生化分析儀檢測大鼠血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總膽紅素（TBIL）、白蛋白（ALB），ELISA方法檢測透明質(zhì)酸（HA）透明質(zhì)酸水平，用免疫組化法檢測及肝星狀細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA的水平。

1.2.4 細(xì)胞實驗與分組 將大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6細(xì)胞以2×105個/孔的數(shù)量接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，待貼壁細(xì)胞融合度達(dá)到60%～70%，棄去含血清培養(yǎng)基，加入0.5%低血清DMEM培養(yǎng)基饑餓24 h，將細(xì)胞分為：空白對照組、TGF-β1處理組、紫杉醇+TGF-β1處理組，空白對照組加入10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h，TGF-β1處理組加入10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液與 5 ng/mL 終濃度 TGF-β1 液培養(yǎng) 24 h，紫杉醇+TGF-β1處理組加入10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液以及 500 nmol/L（預(yù)實驗 IC50為 459 nmol/L）紫杉醇+5 ng/mL終濃度 TGF-β1液培養(yǎng)24 h，然后進(jìn)行后續(xù)實驗。

1.2.5 細(xì)胞實驗檢測指標(biāo)與方法 HSC-T6細(xì)胞中纖連蛋白及I、III型膠原使用RT-PCR和Western blot檢測方法，操作按說明書或常規(guī)程序進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理。計量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，等級資料比較采用秩和檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 病理學(xué)檢測結(jié)果

病理學(xué)切片結(jié)果顯示，正常對照組肝組織結(jié)構(gòu)完全正常，具有完整的肝小葉結(jié)構(gòu)，可見正常肝組織，肝纖維化模型組可見明顯的肝纖維化病變，肝纖維化模型+紫杉醇組可見肝組織中度壞死，未見明顯壞死結(jié)節(jié)（圖1）。

圖1 各組大鼠肝組織病理學(xué)檢測情況（×100） A：正常對照組；B：肝纖維化模型組；C：肝纖維化模型+紫杉醇組Figure 1 Pathological fi ndings in the liver tissues of each group of rats (×100) A: Normal control group; B: Hepatic fi brosis model group; C: Hepatic fi brosis model plus paclitaxel group

2.2 血清學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果

與正常對照組比較，肝纖維化模型組與肝纖維化模型+紫杉醇組的AST、ALT、TBIL、HA均明顯升高，ALB水平明顯降低（均P＜0.05）；與肝纖維化模型組比較，肝纖維化模型+紫杉醇組的AST、ALT水平無統(tǒng)計學(xué)差異（均P＞0.05），TBIL、ALB、HA水平明顯改善（均P＜0.05）（表1）。

表1 各項血清學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果（n=10，±s）Table 1 Results of tests of serological variables (n=10, ±s)

表1 各項血清學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果（n=10，±s）Table 1 Results of tests of serological variables (n=10, ±s)

注：1）與正常對照組比較，P＜0.05；2）與肝纖維化模型組比較，P＜0.05Note:1) P＜0.05 vs. normal control group; 2) P＜0.05 vs. hepatic fibrosis group

組別 AST（IU/L） ALT（IU/L） TBIL（mg/dL） ALB（g/dL） HA（ng/mL）正常對照組 97.2±12.7 46.7±9.8 0.11±0.03 2.91±0.08 28.6±11.4肝纖維化模型組 180.3±69.11) 112.5±10.41) 0.81±0.471) 1.61±0.281) 1 331.5±524.11)肝纖維化模型+紫杉醇組 149.1±42.61) 112.3±44.51) 0.17±0.231),2) 2.42±0.511),2) 331.4±149.61),2)

2.3 肝星狀細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA表達(dá)檢測

正常對照組肝組織無明顯的α-SMA陽性表達(dá)，肝纖維化模型組可見廣泛α-SMA陽性表達(dá)，集中在纖維化病變區(qū)域，而在肝纖維化模型+紫杉醇組α-SMA陽性表達(dá)較前者明顯減少（圖3）；3組α-SMA陽性細(xì)胞數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)差異（均P＜0.05）（圖4）。

圖3 各組肝組織α-SMA的表達(dá)（×100） A：正常對照組；B：肝纖維化模型組；C：肝纖維化模型+紫杉醇處理組Figure 3 Detection of α-SMA expressions in the liver tissues in each group (×100) A: Normal control group; B: Hepatic fi brosis model group; C: Hepatic fi brosis model plus paclitaxel group

圖4 各組α-SMA陽性細(xì)胞數(shù)比較 注：1）與正對照組比較，P＜0.05；2）與肝纖維化模型組比較，P＜0.05Figure 4 Comparison of the numbers of α-SMA positive cells among groups Note: 1) P＜0.05 vs. normal control group; 2) P＜0.05 vs. hepatic fi brosis group

2.4 紫杉醇對TGF-β1誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞纖連蛋白及I、III型膠原表達(dá)的影響

RT-PCR結(jié)果顯示，TGF-β1處理組HSC-T6細(xì)胞纖連蛋白及I、III型膠原mRNA的表達(dá)均較空白對照組HSC-T6細(xì)胞明顯上調(diào)，而3種mRNA的表達(dá)在紫杉醇+TGF-β1處理組均較空白對照組升高，但均較TGF-β1處理組明顯降低，統(tǒng)計分析顯示，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）（圖5A）；Western blot檢測結(jié)果顯示，各組纖連蛋白及I、III型膠原的蛋白表達(dá)與其mRNA的表達(dá)趨勢一致，且半定量統(tǒng)計分析顯示，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）（圖5B）。

圖5 各組細(xì)胞纖連蛋白及I、III型膠原表達(dá)的檢測結(jié)果 A：mRNA表達(dá)情況；B：蛋白表達(dá)情況 注：1）與空白對照組比較，P＜0.05；2）與TGF-β1處理組比較，P＜0.05Figure 5 Expressions of fi bronectin and type I and III collagen in each group of cells A: The mRNA expressions; B: The protein expressions Note: 1) P＜0.05 vs. blank control group; 2) P＜0.05 vs. TGF-β1 treatment group

3 討 論

肝纖維化是肝臟對各種持續(xù)性損傷，發(fā)生組織修復(fù)反應(yīng)時因細(xì)胞外基質(zhì)合成、降解和沉積不平衡而引起的病理過程[7]，是慢性肝病的病理特征，也是進(jìn)一步向肝硬化發(fā)展的關(guān)鍵步驟[8]。在整個肝纖維化發(fā)病過程中，肝星狀細(xì)胞的活化、增殖是核心環(huán)節(jié)[9-10]。被激活的肝星狀細(xì)胞是合成細(xì)胞外基質(zhì)的主要細(xì)胞[11]。肝臟受損時在各種因素的刺激下，肝星狀細(xì)胞被激活主要表現(xiàn)為如下幾個方面：⑴ 轉(zhuǎn)化為肌纖維母細(xì)胞，快速發(fā)生形態(tài)學(xué)改變，脂滴、類維生素A丟失[12]；⑵ 表達(dá)多種細(xì)胞因子及受體；細(xì)胞大量增殖，合成大量的細(xì)胞外基質(zhì)[13]；⑶ 同時表達(dá)平滑肌α-SMA、結(jié)蛋白及波形蛋白，具有收縮功能[14]。目前認(rèn)為，肝星狀細(xì)胞是肝纖維化時細(xì)胞外基質(zhì)合成的最主要細(xì)胞，肝星狀細(xì)胞的活化是肝纖維化發(fā)生的關(guān)鍵。本研究結(jié)果顯示，肝纖維化模型組可見廣泛α-SMA陽性細(xì)胞表達(dá)，進(jìn)一步說明肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程中有大量肝星狀細(xì)胞的活化。

肝纖維化發(fā)病過程中，TGF-β是提高肝纖維化最有效的細(xì)胞因子，能夠抑制肝細(xì)胞的增殖，激發(fā)肝星狀細(xì)胞的活化，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生，并調(diào)節(jié)肝細(xì)胞的凋亡[15]。TGF-β家族包括一類細(xì)胞因子，它們都為結(jié)構(gòu)上相似一類小的多肽，分為幾種亞型，參與許多不同的生物學(xué)功能[16]。其中TGF-β1是目前研究的最為廣泛，被認(rèn)為是和肝損傷修復(fù)以及肝纖維化十分密切的一種細(xì)胞因子[17]。有研究[18]表明，TGF-β1水平在有病變的組織器官中會大大提高，尤其是在纖維病變的區(qū)域，外源性TGF-β1若用于實驗動物就會導(dǎo)致組織器官的纖維化發(fā)生以及細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)的過量沉積；實驗性抗TGF-β1的治療，包括中和抗體、可溶的II型受體、反義寡核苷酸、小分子抑制劑以及RNA干擾均能夠抑制纖維化的形成[19]。這些說明TGF-β1可以激活肝星狀細(xì)胞，并促進(jìn)其大量表達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)[20]。另外激活的肝星狀細(xì)胞可以自分泌或旁分泌TGF-β1，進(jìn)一步促進(jìn)肝星狀細(xì)胞激活，形成一個正反饋效應(yīng)[21]。因此，轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1是調(diào)控肝纖維化發(fā)生發(fā)展的核心物質(zhì)，兩者關(guān)系密切。本研究采用TGF-β1處理HSC-T6細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，HSC-T6細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)成分纖連蛋白及I、III型膠原mRNA與蛋白表達(dá)均顯著上調(diào)，再次證明了TGF-β1在促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積而導(dǎo)致肝纖維化的重要作用。

紫杉醇是一種穩(wěn)定已聚合微管和促進(jìn)微管聚合的天然藥物[21-22]。紫杉醇具有在有絲分裂時不能形成紡錘體和紡錘絲，抑制細(xì)胞分裂和增殖的藥理作用[23-24]。另外紫杉醇抑制有絲分裂所必需的微管網(wǎng)的正常動態(tài)再生，防止正常的有絲分裂紡錘體的形成，從而導(dǎo)致染色體斷裂并抑制細(xì)胞復(fù)制和移行[25]。本研究結(jié)果顯示，紫杉醇能有效抑制DMN誘導(dǎo)肝纖維化的發(fā)生，改善肝功能，且明顯抑制肝星狀細(xì)胞的活化；為進(jìn)一步探討紫杉醇抑制肝纖維化可能的機(jī)制，本研究在HSC-T6細(xì)胞上觀察了紫杉醇的作用，結(jié)果提示，紫杉醇抑制肝纖維化的機(jī)制與TGF-β1相關(guān)的信號通路有關(guān)。

綜上，本研究結(jié)果提示，紫杉醇可以通過抑制肝星狀細(xì)胞的激活而有效抑制DMN誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化的發(fā)生，其作用機(jī)制可能是通過抑制TGF-β信號通路，從而抑制肝星狀細(xì)胞激活和表達(dá)分泌細(xì)胞外基質(zhì)有關(guān)。

[1]Baffy G, Brunt EM, Caldwell SH. Hepatocellular carcinoma in nonalcoholic fatty liver disease: an emerging menace[J]. J Hepatol,2012, 56(6):1384–1391. doi: 10.1016/j.jhep.2011.10.027.

[2]劉雅靜, 夏金榮. 肝纖維化診斷方法研究[J]. 河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2013, 34(8):982–986. doi:10.3969/j.issn.1007–3205.2013.08.052.Liu YJ, Xia JR. Diagnostic methods for hepatic fi brosis[J]. Journal of Hebei Medical University, 2013, 34(8):982–986. doi:10.3969/j.issn.1007–3205.2013.08.052.

[3]祝靚靚, 吳學(xué)銀, 劉昕, 等. 2,4-二羥基二苯甲酮對DMN致小鼠急性肝毒性保護(hù)作用[J]. 中國公共衛(wèi)生, 2014, 30(2):206–208.doi:10.11847/zgggws2014–30–02–24.Zhu QQ, WuXY, Liu X, et al. Protective effect of 2,4 -dihydroxybenzophenone on acute liver toxicity induced by DMN in mice[J]. Chinese Journal of Public Health, 2014, 30(2):206–208.doi:10.11847/zgggws2014–30–02–24.

[4]傅大莉. 肝寶膠囊防治二甲基亞硝胺(DMN)致大鼠肝纖維化的作用機(jī)理研究[D]. 瀘州:瀘州醫(yī)學(xué)院, 2010.Fu DL. The effect of ganbao capsule on the prevention and treatment of liver fibrosis induced by DMN in rats[D]. Luzhou:Luzhou Medical College, 2013.

[5]麻莉. 雄芍湯干預(yù)DMN誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的代謝組學(xué)研究[D].武漢: 湖北中醫(yī)藥大學(xué), 2015.Ma L. Research of the metabonomic on Xiongshao decoction intervention on DMN induced liver fibrosis in rats[D]. Wuhan:Hubei University of Chinese Medicine, 2015.

[6]于衛(wèi)衛(wèi). 唑來膦酸與紫杉醇協(xié)同抑制惡性腫瘤細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)調(diào)亡的分子機(jī)制研究[D]. 天津: 天津醫(yī)科大學(xué), 2011.Yu WW. The study of molecular synergistic antitumor action and induced apoptpsis of Zoledronic acid and Paclitaxel[D]. Tianjin:Tianjin Medical University, 2011.

[7]何燕. 柴胡皂甙d防治二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的肝纖維化伴腎損傷的實驗研究[D]. 北京: 北京中醫(yī)藥大學(xué), 2007.He Y. Saikosaponin d preventing dimethylnitrosamine induced hepatic fi brosis with complicated renal injuries[D]. Beijing: Beijing University of Chinese Medicine, 2007.

[8]朱亞平, 卜淑蕊. 肝纖維化發(fā)病機(jī)制研究新進(jìn)展[J]. 肝臟, 2016,21(5):401–403. doi:10.3969/j.issn.1008–1704.2016.05.026.Zhu YP, Bu SX. New research progress of pathogenesis of hepatic fi brosis[J]. Chinese Hepatology, 2016, 21(5):401–403. doi:10.3969/j.issn.1008–1704.2016.05.026.

[9]鮑佳春, 袁鳳來, 陸偉國, 等. 肝星狀細(xì)胞激活與增殖相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肝纖維化中的作用及機(jī)制[J]. 中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué), 2009, 14(4):455–459.Bao JC, Yuan FL, Chen WG, et al. Effects and mechanisms of hepatic stellate cells(HSC)activation and proliferation-related signal transduction pathway in liver fi brosis[J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics, 2009, 14(4):455–459.

[10]郝禮森, 張曉嵐. 肝星狀細(xì)胞增殖過程中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及可能的抗肝纖維化治療靶點[J]. 臨床肝膽病雜志, 2009, 25(1):63–67.Hao LS, Zhang XL. Signaling in proliferation of hepatic stellate cells and potential therapeutic targets for treatment of hepatic fi brosis[J]. Journal of Clinical Hepatology, 2009, 25(1):63–67.

[11]焦黎, 武希潤, 王琦. 纖溶酶原激活物抑制因子-1對肝星狀細(xì)胞活化及細(xì)胞外基質(zhì)合成的影響[J]. 肝臟, 2011, 16(2):116–119.doi:10.3969/j.issn.1008–1704.2011.02.008.Jiao L, Wu XR, Wang Q. The effect of Plasminogen activator inhibitor type-1 on HSC and synthesis of extrocellar matrix[J].Chinese Hepatology, 2011, 16(2):116–119. doi:10.3969/j.issn.1008–1704.2011.02.008.

[12]李春輝, 潘理會, 申興斌, 等. 二甲基亞硝胺誘發(fā)大鼠肝纖維化發(fā)生機(jī)理的研究[J]. 承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2006, 23(2):116–119.doi:10.3969/j.issn.1004–6879.2006.02.006.Li CH, Pan LH, Shen XB, et al. Study on the mechanisms of hepatic fibrosis induced by DMN in rats[J]. Journal of Chengde Medical College, 2006, 23(2):116–119. doi:10.3969/j.issn.1004–6879.2006.02.006.

[13]汪志軍. ELF參與肝纖維化中星狀細(xì)胞活化以及再生結(jié)節(jié)形成的機(jī)制研究[D]. 華中科技大學(xué), 2011.Wang ZJ. Embryonic liver fodrin involved in stellate cell activation and formation of regeneration nodule in liver cirrhosis[D].Huazhong University of Science and Technology, 2011.

[14]季菊玲, 張錦生, 王雪晴, 等. 活化大鼠肝星狀細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)譜[J]. 中華肝臟病雜志, 2009, 17(12):921–924. doi:10.3760/cma.J.issn.1007–3418.2009.12.009.Ji JL, Zhang JS, Wang XQ, et al. Comprehensive proteome pro fi le of activated rat hepatic stellate cells[J]. Chinese Journal of Hepatology, 2009, 17(12):921–924. doi:10.3760/cma.J.issn. 1007–3418.2009.12.009.

[15]陳小亮. 轉(zhuǎn)化生長因子β1介導(dǎo)的信號通路在大鼠肝纖維化和肝星狀細(xì)胞增殖過程中的調(diào)節(jié)機(jī)制及苦參素的作用[D]. 合肥: 安徽醫(yī)科大學(xué), 2009.Chen XL. Mechanism of transforming growth factor β1 mediated pathways in regulating proliferation of hepatic stellate cells and interventional effect of kushenin[D]. Hefei: Anhui Medical University, 2009.

[16]廖磊. TGF-β1誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中的信號通路[D]. 上海:復(fù)旦大學(xué), 2006. doi: 10.7666/d.y953246.Liao L. Signaling pathways in TGF-β1 induced fibroblast transformation[D]. Shanghai: Fudan University, 2006. doi: 10.7666/d.y953246.

[17]陳未來, 潘陳為, 諸葛璐, 等. 姜黃素阻斷大鼠肝纖維化及其影響轉(zhuǎn)化生長因子-β1表達(dá)的研究[J]. 中國藥物與臨床, 2013,13(2):172–173. doi:10.11655/zgywylc2013.02.010.Chen WL, Pan CW, Zhu GL.et al. Curcumin blocking hepatic fibrosis in rats and its influence on expression of transforming growth factor β1[J]. Chinese Remedies & Clinics, 2013, 13(2):172–173. doi:10.11655/zgywylc2013.02.010.

[18]王軍, 徐陽, 袁向科, 等. 實驗性糖尿病鼠大血管病變TGF-β1和CTGF的表達(dá)及中藥的干預(yù)作用[J]. 天津中醫(yī)藥, 2012,29(3):266–269.Wang J, Xu Y, Yuan XK, et al. Expression of TGF-β1 and CTGF in rats with experimental diabetic macroangiopathy and intervention role of traditional Chinese medicine[J]. Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine, 2012, 29(3):266–269.

[19]李榮清, 金冶寧. TGF-β1在放射性纖維化形成中的作用及其意義[J]. 中國癌癥雜志, 2001, 11(3):267–269. doi:10.3969/j.issn.1007–3639.2001.03.028.Li RQ, Jin YY. Effect and significance of TGF-β1 in the process of radiation fibrosis[J]. China Oncology, 2001, 11(3):267–269.doi:10.3969/j.issn.1007–3639.2001.03.028.

[20]陳驤. 間歇壓力對大鼠肝星狀細(xì)胞I型膠原和TGF-β1表達(dá)影響的研究[D]. 重慶: 重慶大學(xué), 2008.Chen X. The effect of intermittent pressure on expression of type I collagen and TGF-β1 in rat hepatic stellate cells in vitro[D].Chongqing: Chongqing University, 2008.

[21]齊艷榮. 紫杉醇的制備[J]. 科技致富向?qū)? 2011, (18):142-.Qi YR. Paclitaxel preparation[J]. Keji Zhifu Xiangdao, 2011,(18):142.

[22]姜志軍, 謝朝輝, 丁柏英, 等. 紫杉醇、順鉑、四氫葉酸、氟尿嘧啶治療晚期胃癌近期療效觀察[J]. 中國高新技術(shù)企業(yè), 2007,(6):58. doi:10.3969/j.issn.1009–2374.2007.06.035.Jiang ZJ, Xie ZH, Ding BY, et al. Ef fi cacy observation of paclitaxel,cis-platinum, tetrahydrofolic acid and fl uorouracil in treatment of advanced gastric cancer[J]. China High-Tech Enterprises, 2007,(6):58. doi:10.3969/j.issn.1009–2374.2007.06.035.

[23]王淑芳. 紫杉醇致過敏性休克不良反應(yīng)1例[J]. 中國民康醫(yī)學(xué),2009, 21(7):封3. doi:10.3969/j.issn.1672–0369.2009.07.075.Wang SF. Paclitaxelal indeced lergic shock: a report of one case[J].Medical Journal of Chinese People's Health, 2009, 21(7):封3.doi:10.3969/j.issn.1672–0369.2009.07.075.

[24]郭惠玲. 紫杉醇抑制原代培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖的實驗研究[D]. 長春: 吉林大學(xué), 2004.Guo HL. Inhibition of taxol on proliferation of cultured human retinal pigment epithelial cells[D]. Changchun: Jilin University,2004.

[25]解藝佳. Notch2在細(xì)胞分裂阻滯后命運(yùn)調(diào)控中的功能研究[D]. 合肥: 中國科學(xué)技術(shù)大學(xué), 2015.Xie YJ. A research on the function of Notch2 in the determination of cell fate after mitotic arrest[D]. Hefei: University of Science and Technology of China, 2015.