厄洛替尼通過下調(diào)CD44表達抑制非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移的機制研究

王瑜玲 段媛媛 閆會敏 梁歡 張燕

·論著·

厄洛替尼通過下調(diào)CD44表達抑制非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移的機制研究

王瑜玲 段媛媛 閆會敏 梁歡 張燕

目的 探討表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)下調(diào)黏附分子CD44表達抑制非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移的機制。方法 采用MTT法檢測厄洛替尼對HCC827細(xì)胞株的增殖抑制效應(yīng)及計算藥物作用48 h的IC50；采用Transwell和劃痕實驗檢測3組[control、EGF(50 ng/ml)刺激組、厄洛替尼(0.323 μmol/L)處理組]細(xì)胞侵襲遷移能力的變化；采用流式細(xì)胞術(shù)及Western blot 方法分別從細(xì)胞及蛋白水平檢測3組[control、EGF(50 ng/ml)刺激組、厄洛替尼(0.323 μmol/L)處理組]細(xì)胞CD44表達水平變化。結(jié)果 MTT結(jié)果顯示，隨著藥物濃度升高，厄洛替尼對細(xì)胞的增殖抑制率也逐漸增大，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；IC50為0.323μmol/L。Transwell及劃痕實驗結(jié)果顯示，厄洛替尼阻斷EGFR信號通路后可降低細(xì)胞的侵襲遷移能力(P<0.05)。流式細(xì)胞術(shù)及Westernblot檢測三組細(xì)胞CD44表達水平變化結(jié)果顯示：當(dāng)使用EGF刺激細(xì)胞后，CD44表達明顯上調(diào)，而使用厄洛替尼阻斷EGFR信號通路后CD44表達則被明顯下調(diào)(P<0.05)。結(jié)果提示，厄洛替尼抑制腫瘤轉(zhuǎn)移可能與改變CD44表達有關(guān)。結(jié)論 使用厄洛替尼阻斷EGFR信號通路后，可間接下調(diào)與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的黏附分子CD44的表達，進而發(fā)揮抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。

非小細(xì)胞肺癌；EGFR；厄洛替尼；CD44；侵襲轉(zhuǎn)移

厄洛替尼為一種分子靶向藥物，是一種小分子化合物，可通過特異性抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶活性進而阻斷表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)信號傳導(dǎo)通路，發(fā)揮抑制腫瘤生長作用。美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(National Comprehensive Cancer Network,NCCN)推薦，針對EGFR突變晚期非小細(xì)胞肺癌患者，首選分子靶向治療。對于厄洛替尼抑制腫瘤細(xì)胞增殖的機制目前研究已較深入，結(jié)合近年臨床效果觀察發(fā)現(xiàn)，EGFR-TKI藥物在抑制腫瘤細(xì)胞增殖的同時，對部分腫瘤患者的整體轉(zhuǎn)移趨勢也有一定影響。但其發(fā)揮作用的具體機制目前尚不明了。而在腫瘤微環(huán)境中黏附分子家族是主導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移的代表因子之一，其中CD44為細(xì)胞表面糖蛋白受體，在多種惡性腫瘤中均有表達，可介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)間的黏附作用，在促進腫瘤向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移機制中發(fā)揮重要作用。結(jié)合在乳腺癌、頭頸部腫瘤等研究中發(fā)現(xiàn)[1,2]，EGFR信號通路與CD44之間存在著某種交叉關(guān)系，并協(xié)同影響腫瘤轉(zhuǎn)移。那么，在非小細(xì)胞肺癌中厄洛替尼抑制腫瘤轉(zhuǎn)移是否與改變CD44表達有關(guān)呢？遂本研究通過一系列體外實驗進行驗證，為尋找針對腫瘤轉(zhuǎn)移的新藥物靶點提供更多思路。

1 材料與方法

1.1 材料及試劑 HCC827(EGFR突變)購自上海中科院細(xì)胞庫，RPMI-1640培養(yǎng)基購自美國Gibco，胎牛血清購自以色列BI公司，胰蛋白酶購自美國Gibco，表皮生長因子(EGF)購自Sigma，厄洛替尼由羅氏公司惠贈，MTT粉購自Biotopped公司，CD44-FITC 流式單克隆抗體及同型對照均購自美國BioLegnd，CD44蛋白一抗購自Abcam，化學(xué)發(fā)光二抗購自bioworld公司，Matrigel基質(zhì)膠購自美國BD公司，Transwell小室購自美國Costar公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)：使用含20%胎牛血清RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)HCC827細(xì)胞株，隔天換液，4～5 d傳代，取處于對數(shù)生長期細(xì)胞進行實驗。

1.2.2 四甲基偶氮唑藍(MTT)法:取對數(shù)生長期細(xì)胞，10 000個/孔接種于96孔板中，培養(yǎng)至細(xì)胞單層鋪滿孔底。加入不同終濃度厄洛替尼(0、0.001、0.01、0.1、0.5、1、10 μmol/L)，每組6個平行復(fù)孔，并設(shè)置陰性對照組及無細(xì)胞調(diào)零組，培養(yǎng)48 h后加入20 μl MTT(5 g/L)，4 h后棄上清加入150 μl DMSO，震蕩至底部結(jié)晶全部溶解，酶標(biāo)儀測定492 nm波長下各孔吸光度(OD)值，計算藥物對細(xì)胞的增殖抑制率=(陰性對照組OD值-試驗組OD值)/陰性對照組OD值×100%，并采用直線回歸方法計算藥物半數(shù)抑制濃度(IC50)。

1.2.3 Transwell侵襲實驗：取按1∶8稀釋后的Matrigel基質(zhì)膠混液60 μl，均勻的鋪于transwell小室中，置入37℃培養(yǎng)箱中5～6 h，使Matrigel膠充分固化。無血清培養(yǎng)基制備單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為 105個/200 μl，上室加入200 μl細(xì)胞懸液，下室加入600 μl含10%血清培養(yǎng)基，按分組分別加入相應(yīng)處理因素。培養(yǎng)24 h后吸去上室液體并拭去上層未遷移細(xì)胞(切勿損傷底膜)，4%多聚甲醛固定30 min后室溫晾干，瑞士—姬姆薩染色(A液1 min，B液10 min)，顯微鏡下觀察細(xì)胞穿膜情況。每組隨機選擇5個視野，拍照并記錄各組穿膜細(xì)胞數(shù)。

1.2.4 劃痕實驗：收集對數(shù)生長期細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，接種于六孔板中，106個/孔，培養(yǎng)至細(xì)胞鋪滿板底。滅菌槍頭在板中央小心劃痕并記錄劃痕距離。按分組分別加入相應(yīng)處理因素，培養(yǎng)24 h后顯微鏡下觀察各組細(xì)胞遷移情況，拍照并記錄細(xì)胞遷移距離。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)：取對數(shù)生長期細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為105個/ml，接種于24孔板中，按分組[control、EGF(50 ng/ml)刺激組、厄洛替尼(0.323 μmol/L)處理組]加入不同處理因素。24 h后終止培養(yǎng)并收取細(xì)胞，加入5 μl CD44-FITC流式抗體及5 μl同型對照，室溫避光反應(yīng)30 min，鞘液洗2遍，200 μl鞘液重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞CD44表達水平。

1.2.6 Western blot：取對數(shù)生長期細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為106/孔,接種于6孔板中，并按1.2.5分組情況進行相應(yīng)處理。終止培養(yǎng)后收取細(xì)胞，每組加細(xì)胞裂解液50 μl，混勻后冰上裂解30 min，4℃低溫離心機高速(12 000 r/min)裂解30 min，取上清并進行蛋白濃度測定(BCA法)。根據(jù)上清體積加入相應(yīng)體積4×上樣緩沖液(3∶1)，混勻后沸水煮7～8 min。配制10%SDS-PAGE分離膠及5%濃縮膠，上樣蛋白量為60 μg，開始電泳、轉(zhuǎn)膜、5%脫脂牛奶室溫封閉2 h、一抗孵育過夜(4℃)、37℃二抗孵育1 h、化學(xué)發(fā)光顯色，拍照并進行半定量分析。

2 結(jié)果

2.1 厄洛替尼對細(xì)胞的增殖抑制作用 隨著厄洛替尼藥物濃度增高，對細(xì)胞的增殖抑制率逐漸增強。各個藥物濃度組對細(xì)胞的增殖抑制率不完全相同，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=552.998,P<0.05)；而48h厄洛替尼半數(shù)抑制濃度IC50=0.323μmol/L。見表1，圖1。

厄洛替尼(μmol/L)48h0100.00±0.000.0019.65±1.840.0127.66±1.870.145.9±1.210.554.36±1.60158.1±2.121071.74±1.01

2.2 厄洛替尼阻斷EGFR信號通路對HCC827細(xì)胞侵襲遷移能力的影響

圖1 不同濃度厄洛替尼對HCC827細(xì)胞的增殖抑制率曲線

2.2.1 厄洛替尼對細(xì)胞侵襲能力的影響：與對照組比較，EGF處理組細(xì)胞侵襲能力明顯增強，而厄洛替尼處理組穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少，細(xì)胞侵襲能力顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2，圖2、3。

表2 3組腫瘤細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)

注：與control比較，*P<0.05；與EGF刺激組比較，#P<0.05

注：A:control;B：EGF刺激組;C：加藥組

圖2 3組腫瘤侵襲能力(瑞士-吉姆薩染色×10)

圖3 3組腫瘤細(xì)胞侵襲能力檢測(*P<0.05)

2.2.2 厄洛替尼對細(xì)胞遷移能力影響：處理前后對比，EGF處理組細(xì)胞遷移能力明顯增強，而厄洛替尼組腫瘤細(xì)胞遷移能力則明顯減弱，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3,圖4、5。

2.3 厄洛替尼阻斷EGFR信號通路后對CD44細(xì)胞

組別遷移距離control114±24.08EGF刺激組227±19.24*加藥組39±12.94*#

注：與control比較，*P<0.05；與EGF刺激組比較，#P<0.05

未處理前

處理24 h后

圖5 3組腫瘤細(xì)胞遷移能力檢測

注：處理24h后各組細(xì)胞遷移距離(μm) ×4A:controlB：EGF刺激組C：加藥組

表達水平影響 與control組相比，EGF刺激組CD44表達水平明顯升高，厄洛替尼處理組CD44表達水平又明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；結(jié)果證明厄洛替尼可下調(diào)CD44細(xì)胞表達水平。見表4，圖6。

組別CD44+control25.87±3.46EGF刺激組48.37±2.21*加藥組15.50±1.11*#

注：與control比較，*P<0.05；與EGF刺激組比較，#P<0.05

2.4 厄洛替尼阻斷EGFR信號通路后對CD44蛋白

注：A：同型對照B：controlC：EGF刺激組D：加藥組

圖6 阻斷EGFR信號通路后CD44細(xì)胞表達水平變化

表達水平影響 與control組相比，EGF刺激組CD44蛋白表達水平明顯升高，加藥組CD44蛋白表達水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；進一步從蛋白水平證明厄洛替尼抑制腫瘤轉(zhuǎn)移可能與CD44表達變化有關(guān)。見表5，圖7。

圖7 阻斷EGFR信號通路后CD44蛋白表達水平變化

3 討論

EGFR-TKI藥物是目前臨床用于晚期非小細(xì)胞肺癌治療的首選藥物，其主要作用機制是通過抑制EGFR突變陽性腫瘤細(xì)胞的自身磷酸化過程，阻斷下游信號通路的傳遞，進而參與抑制腫瘤增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等病理行為[3,4]。盡管其對EGFR突變陽性的非細(xì)胞肺癌患者有顯著療效，但仍常因耐藥及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移而導(dǎo)致治療失敗[5-7]。而惡性腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移一直是腫瘤臨床治療失敗和患者死亡的主要原因，其病理過程極其復(fù)雜，并與腫瘤微環(huán)境關(guān)系密切。所以尋找更多針對腫瘤轉(zhuǎn)移或者聯(lián)合用藥靶點，對此類肺癌的治療意義重大。

表5 阻斷EGFR信號通路后CD44蛋白表達水平

組別CD44蛋白表達水平control0.72±0.03EGF刺激組0.83±0.04*加藥組0.21±0.03*

注：與control比較，*P<0.05

在腫瘤微環(huán)境中，黏附分子家族在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。黏附分子CD44是黏附分子家族一類重要的細(xì)胞表面糖蛋白受體，通過配體與受體結(jié)合的方式介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞，細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間的黏附作用；其表達上調(diào)，不僅可導(dǎo)致細(xì)胞間的黏附性增加，為腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移提供足夠動力[8]，亦會導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境中相關(guān)細(xì)胞因子的持續(xù)變化，引起胞內(nèi)信號傳遞發(fā)生及Ca2+水平增加等生物學(xué)行為[9]，參與并影響腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移過程中的眾多環(huán)節(jié)。

表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactor，EGFR)為具有酪氨酸激酶活性的蛋白受體，在多種惡性腫瘤中均有過表達，且在肺癌的所有驅(qū)動基因中所占比例最高。當(dāng)其與配體EGF結(jié)合后可激活其胞內(nèi)區(qū)的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，使其發(fā)生磷酸化，啟動下游一系列信號通路傳導(dǎo)，在腫瘤增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移及新生血管形成等生物學(xué)行為方面發(fā)揮重要作用[10-12]。結(jié)合既往在乳腺癌、頭頸部腫瘤研究中發(fā)現(xiàn)[1,2]，EGFR與CD44之間可形成大分子復(fù)合物，并可能存在某種交叉關(guān)系，協(xié)同影響腫瘤轉(zhuǎn)移進程。那么，在非小細(xì)胞肺癌中，EGFR信號通路與黏附因子CD44之間是否也存在這種交叉關(guān)系并協(xié)同影響轉(zhuǎn)移進程，以及他們在腫瘤微環(huán)境中是如何發(fā)揮協(xié)同作用的機制目前還尚不得知。

本實驗選用的HCC827細(xì)胞是EGFR基因位點上19外顯子缺失突變的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，并對厄洛替尼具有高度敏感性。而厄洛替尼在抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進腫瘤細(xì)胞凋亡方面的研究已漸趨成熟，但對抑制腫瘤轉(zhuǎn)移方面的機制目前還尚不明確。結(jié)合以上背景，我們猜想，EGFR-TKIs藥物可能不僅僅是作用于腫瘤細(xì)胞本身的抗增殖劑，也可能通過某種潛在機制影響腫瘤微環(huán)境中與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)因子的表達變化，導(dǎo)致相關(guān)信號傳導(dǎo)通路傳遞信息的能力減弱，從而在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮一定作用。所以，本實驗通過使用厄洛替尼阻斷EGFR信號通路后，觀察黏附分子CD44是否下調(diào)，來間接證明EGFR-TKIs藥物發(fā)揮抑制腫瘤轉(zhuǎn)移作用可能是通過下調(diào)黏附分子表達實現(xiàn)的。

首先我們通過MTT實驗進一步驗證了厄洛替尼對HCC827的增殖抑制作用，并篩選出厄洛替尼的半數(shù)抑制濃度IC50；而后我們通過Transwell小室侵襲實驗及劃痕實驗方法發(fā)現(xiàn)，EGF刺激細(xì)胞后腫瘤侵襲及遷移能力均顯著增加，而經(jīng)厄洛替尼處理后腫瘤的侵襲遷移能力又被顯著抑制，由此從功能水平上進一步證明了EGFR-TKI藥物在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。為了進一步證實厄洛替尼抑制腫瘤轉(zhuǎn)移可能與CD44表達改變有關(guān)，我們又通過流式細(xì)胞術(shù)及Westernblot的實驗方法發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用厄洛替尼處理細(xì)胞阻斷EGFR信號通路后，無論是在細(xì)胞水平還是在蛋白水平CD44的表達均顯著降低(P<0.05)；這一實驗結(jié)果表明，對于非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，黏附因子CD44可因EGFR信號通路的激活而表達上調(diào)，并在使用EGFR-TKI藥物阻斷EGFR信號通路后表達下調(diào)；綜合以上體外實驗結(jié)果我們推測，在非小細(xì)胞肺癌中，EGFR信號通路與黏附因子CD44之間可能存在某種交叉關(guān)系，并協(xié)同影響腫瘤轉(zhuǎn)移；并初步證明厄洛替尼發(fā)揮抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用很可能就是通過間接下調(diào)與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的黏附分子CD44的表達來實現(xiàn)的。

綜上所述，我們通過部分體外實驗初步得出EGFR-TKIs藥物可通過阻斷EGFR信號通路間接下調(diào)CD44表達，進而發(fā)揮抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移作用的結(jié)論；使我們初步了解到在非小細(xì)胞肺癌中EGFR信號通路與CD44之間可能也存在某種交叉關(guān)系，共同在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮著作用。但其具體機制及在此交叉信號通路中發(fā)揮關(guān)鍵作用的信號分子還需后續(xù)體外及體內(nèi)實驗進一步驗證?？傊?，對腫瘤生物學(xué)行為細(xì)節(jié)的更深入了解，是尋找更多新藥物靶點的重要途徑。

1BourguignonLY,GiladE,BrightmanA,etal.Hyaluronan-CD44interactionwithleukemia-associatedRhoGEFandepidermalgrowthfactorreceptorpromotesRho/Rasco-activation,phospholipaseCepsilon-Ca2+signaling,andcytoskeletonmodificationinheadandnecksquamouscellcarcinomacells.JBiolChem,2006,281:14026-14040.

2KimS,KilWH,LeeJ,etal.ZerumbonesuppressesEGF-inducedCD44expressionthroughtheinhibitionofSTAT3inbreastcancercells.OncolRep,2014,32:2666-2672.

3DienstmannR,DeDossoS,FelipE,etal.DrugdevelopmenttoovercomeresisitancetoEGFRinhibitorsinlungandcolorectalcancer.MolOncol,2012,6:15-26.

4MokT,WuYL,ThongprasertS,etal.PHAseⅢ,randomized,open-label,first-linestudyofgefitinib(G)versuscarboplatin/paclitaxel(C/P)inclinicallyselectedpatients(pts)withadvancednon-small-celllungcancer(NSCLC).AnnOncol,2008,19:1-4.

5MitsudomiT,KosakaT,EndohH,etal.Mutationsoftheepidermalgrowthfactorreceptorgenepredictprolongedsurvivalaftergefitinibtreatmentinpatientswithnon-smallcelllungcancerwithpostoperativerecurrence.ClinOncol,2005,23:2513-2520.

6SeuistLV,MartinsRG,SpigelD,etal.First-linegefitinibinpatientswithadvancednon-small-celllungcancerharboringsomaticEGFRmutations.JThoracOncol,2008,3:S143.

7TamuraK,OkamotoI,KashiiT,etal.MulticentreprospectivephaseIItrialofgefitinibforadvancednon-smallCelllungcancerwithepidermalgrowthfactorreceptormutations:ResultsoftheWestJapanThoracicOncologyGrouptriaI(WTOG0403).BrJCancer,2008,98:907.

8 馮靜,張燕,王瑜玲,等.EGFR與黏附分子家族間交叉信號通路在腫瘤發(fā)生中作用的研究進展.山東醫(yī)藥,2014,54:93-95.

9 李娜，張賀龍,整合素家族與腫瘤骨轉(zhuǎn)移相關(guān)性研究進展.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2011,19:579-582.

10SuzukiS,DobashiY,SakuraiH,etal.Proteinoverexpressionandgeneamplificationofepidermalgrowthfactorreceptorinnonsmallcelllungcarcinomas.Animmunohistochemicalandfluorescenceinsituhybridizationstudy.Cancer,2005,103:1265-1273.

11ItalianoA,VandenbosFB,OttoJ,etal.Comparisonoftheepidermalgrowthfactorreceptorgeneandproteininprimarynon-small-cell-lungcancerandmetastaticsites:implicationsfortreatmentwithEGFR-inhibitors.AnnOncol,2006,17:981-985.

12JorissenRN,WalkerF,PouliotN,etal.Epidermalgrowthfactorreceptor:mechanismsofactivationandsignalling.ExpCellRes,2003,284:31-53.

Study on the action mechanism of erlotinib in inhibiting metastasis of non-small cell lung cancer through down-regulating the expression of CD44 in vitro

WANGYuling*,DUANYuanyuan,YANHuimin*,etal.

TheFifthHospitalofShijiaxhuang,Shijiazhuang050011,China

Objective To investigate the action mechanism of erlotinib in inhibiting metastasis of non-small cell lung cancer (HCC827 cell line) through down-regulating the expression of CD44 in vitro.Methods MTT method was used to detect the inhibitory effects of erlotinib on cell proliferation of HCC827 cell line and to calculate IC50 after 48-hour drug intervention.The changes of invasion and migration ability of lung cancer cells in thee three groups,control group, EGF (50ng/ml) stimulation group and erlotinib (0.323μmol/L) intervention group, were detected by Transwell migration assay and scratch test. Moreover the expression levels of CD44 in the three groups were detected by flow cytometry and Western Blot,respectively.Results MTT assay showed that the inhibition rate of erlotinib on cell proliferation was increased with the increase of drug concentration (P<0.05),withIC50being0.323μmol/L.TranswellmigrationassayandscratchtestshowedthaterlotinibcoulddecreaseinvasionandmigrationabilityoflungcancercellsafterblockingEGFRsignalpathway(P<0.05).TheresultsbyflowcytometryandWesternBlotshowedthatafterthecellswerestimulatedbyEGF,theexpressionlevelsofCD44wereobviouslyincreasedinthreegroups,however,afterEGFRsignalpathwaywasblockedbyerlotinib,theexpressionlevelsofCD44weresignificantlydecreased(P<0.05),whichsuggestedthattheinhibitoryeffectsoferlotinibontumormetastasismightbecorrelatedtoregulatingtheexpressionlevelsofCd44.Conclution The erlotinib can block EGFR signal pathway to down-regulate indirectly the expression levels of CD44 that is closely correlated with tumor metastasis,and then which can play an important role in inhibiting tumor metastasis .

non-small cell lung cancer;EGFR;erlotinib;CD44;invasion and metastasis

10.3969/j.issn.1002-7386.2017.06.006

050024 河北省石家莊市第五醫(yī)院(王瑜玲、閆會敏);河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院(段媛媛)；河北省石家莊市第一醫(yī)院(梁歡、張燕)

張燕，050011 河北省石家莊市第一醫(yī)院腫瘤四科;

E-mail:13315978336@163.com

R

A

1002-7386(2017)06-0826-05

2016-09-12)