杏鮑菇多肽對鉛致大鼠氧化損傷的干預作用

吳艷麗 魏艷麗 馮翠萍 常明昌 孟俊龍 劉靖宇

（山西農(nóng)業(yè)大學食品科學與工程學院，山西太谷030801）

國內(nèi)外研究表明鉛可通過攻擊生物大分子，產(chǎn)生自由基，對機體的抗氧化防御系統(tǒng)造成影響，引發(fā)機體各系統(tǒng)及臟器的氧化損傷[1-3]，而膳食中蛋白質(zhì)、多肽、維生素、多糖類和酚類化合物等對鉛引起的氧化損傷具有一定的干預作用[4-8]。

杏鮑菇含有豐富的蛋白質(zhì)，經(jīng)堿性蛋白酶水解后制得500～3000 Da的杏鮑菇多肽，體外試驗表明其有清除DPPH·、O2-·及抑制脂質(zhì)過氧化的作用[9-11]，而杏鮑菇多肽對鉛的氧化損傷是否具有干預作用鮮見報道。因此，筆者通過建立動物模型研究杏鮑菇多肽對鉛的氧化損傷的干預作用，從而為確定杏鮑菇多肽是否能作為排鉛功能食品原料提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料①原料：杏鮑菇由山西農(nóng)業(yè)大學食用菌中心提供。杏鮑菇多肽采用文獻[9]的方法進行制備。采用堿提酸沉法，50℃、pH 12、料液比1∶55的條件下提取2.5 h得到蛋白質(zhì)，經(jīng)過Sephadex G-100凝膠純化后，利用堿性蛋白酶在pH 10.5、45℃、料水比1∶25、酶用量1.0%的條件下水解12 h，得到杏鮑菇多肽。②試驗動物：21日齡雄性SD大鼠，體重（55± 5）g，共27只，購于北京維通利華有限公司。③主要試劑：超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒、過氧化氫酶（CAT）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）測定試劑盒、丙二醛（MAD）測定試劑盒、蛋白定量試劑盒（南京建成生物工程研究所），醋酸鉛、冰醋酸、無水乙醇均為國產(chǎn)分析純。④主要儀器與設備：HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司），2100型可見光分光光度計（上海尤尼柯儀器有限公司），5417R冷凍離心機（德國艾本德股份公司），漩渦混勻器（上海精科實業(yè)有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗動物分組及樣品采集 將27只21日齡雄性SD大鼠適應性喂養(yǎng)7 d后，隨機分為三組，每組9只，分別為對照組（基礎(chǔ)飼料+蒸餾水）、染鉛組（基礎(chǔ)飼料+0.2%醋酸鉛水溶液）和試驗組（基礎(chǔ)飼料添加2%多肽+0.2%醋酸鉛水溶液），連續(xù)飼養(yǎng)60 d。

喂養(yǎng)結(jié)束后，采眼球血，靜置，4℃、4000 r/min離心10 min得血清，分裝后冷藏保存；取心臟、肝臟、腎臟0.5 g，加入4.5 mL的生理鹽水（按照組織與生理鹽水為1∶9的比例）進行勻漿，勻漿之后，4℃、4000 r/min離心10 min，取上清保存于-20℃中備用。

1.2.2 蛋白質(zhì)含量的測定 取血清及組織勻漿上清液，參照試劑盒說明測定其蛋白質(zhì)含量。

1.2.3 SOD、CAT、GSH-Px和MDA活性的測定 取血清及組織勻漿上清液，參照試劑盒說明進行測定。

1.3 試驗數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)采用Graphpad Prism 5軟件進行處理，以均數(shù)±標準差（X±S）表示，并經(jīng)t檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 杏鮑菇多肽對染鉛大鼠血清和臟器SOD活性的影響

圖1 杏鮑菇多肽對染鉛大鼠血清SOD活性的影響

圖2 杏鮑菇多肽對染鉛大鼠臟器SOD活性的影響

圖3 杏鮑菇多肽對染鉛大鼠血清CAT活性的影響

圖4 杏鮑菇多肽對染鉛大鼠臟器CAT活性的影響

圖5 杏鮑菇多肽對染鉛大鼠血清GSH-Px活性的影響

圖6 杏鮑菇多肽對染鉛大鼠臟器GSH-Px活性的影響

2.1.1 對染鉛大鼠血清SOD活性的影響 由圖1可知，與對照組相比，染鉛組大鼠血清SOD活性極顯著下降（P＜0.01）。與染鉛組相比，試驗組大鼠的血清SOD活性顯著升高（P＜0.05）。

2.1.2 對染鉛大鼠臟器SOD活性的影響 由圖2可知，與對照組相比，染鉛組肝臟、腎臟和心臟中SOD活性均顯著下降（P＜0.05或P＜0.01）。與染鉛組相比，試驗組各臟器中SOD活性均有所升高，其中心臟SOD活性顯著升高（P＜0.05），其它臟器的SOD活性差異不顯著。

2.2 杏鮑菇多肽對染鉛大鼠血清和臟器CAT活性的影響

2.2.1 對染鉛大鼠血清的CAT活性的影響 由圖3可知，與對照組相比，染鉛組大鼠血清CAT活性顯著下降（P＜0.05）。與染鉛組相比，試驗組加入杏鮑菇多肽后，血清CAT活性顯著升高（P＜0.05）。

2.2.2 對染鉛大鼠臟器CAT活性的影響 由圖4可知，與對照組比較，染鉛組中各臟器中CAT活性均下降，其中肝臟與心臟中CAT活性顯著下降（P＜0.05或P＜0.01）。與染鉛組相比，試驗組各臟器CAT活性均升高，其中肝臟和心臟中CAT活性顯著升高（P＜0.05）。

2.3 杏鮑菇多肽對染鉛大鼠血清和臟器GSH-Px活性的影響

2.3.1 對染鉛大鼠血清GSH-Px活性的影響 由圖5可知，與對照組相比，染鉛組大鼠血清GSH-Px活性極顯著下降（P＜0.01）。與染鉛組相比，試驗組血清GSH-Px活性顯著升高（P＜0.05）。

圖7 杏鮑菇多肽對染鉛大鼠血清MDA水平的影響

圖8 杏鮑菇多肽對染鉛大鼠臟器MDA水平的影響

2.3.2 對染鉛大鼠臟器GSH-Px活性的影響 由圖6可知，與對照組相比，染鉛組各臟器中GSH-Px活性均下降，其中肝臟和腎臟中GSH-Px活性顯著下降（P＜0.05）。與染鉛組相比，試驗組各臟器中GSH-Px活性均升高，其中肝臟GSH-Px活性顯著升高（P＜0.05）。

2.4 杏鮑菇多肽對染鉛大鼠血清和臟器MDA水平的影響

2.4.1 對染鉛大鼠血清MDA水平的影響 由圖7可知，與對照組相比，染鉛組大鼠血清MDA水平顯著升高（P＜0.05）。與染鉛組相比，試驗組血清MDA水平顯著下降（P＜0.05）。

2.4.2 對染鉛大鼠臟器MDA水平的影響 由圖8可知，與對照組比，染鉛組各臟器中MDA水平均極顯著升高（P＜0.01）。與染鉛組相比，試驗組各臟器MDA水平均下降，其中肝臟和腎臟的MDA水平顯著下降（P＜0.05或P＜0.01）。

3 小結(jié)與討論

生物活性肽是介于蛋白質(zhì)和氨基酸之間的分子聚合物，當機體以肽的形式攝入時，能夠被腸道直接吸收[12]。試驗所制備的杏鮑菇多肽經(jīng)過測定分子量在500～3000 Da[10]，屬于低分子聚合物。當給大鼠補充杏鮑菇多肽后，血清和臟器抗氧化酶的活性升高，MDA含量下降，差異顯著，說明杏鮑菇多肽可調(diào)節(jié)鉛引起的氧化酶和丙二醛的變化，緩解鉛造成的氧化損傷。其可能的機制一是杏鮑菇多肽作為外源抗氧化劑可直接清除自由基或調(diào)動機體內(nèi)源性抗氧化活性，增強機體抗氧化能力，從而緩解氧化損傷；二是杏鮑菇多肽能夠提供氨基、巰基或羧基與鉛發(fā)生絡合作用進而排出體外，使鉛的氧化損傷降低[13]。但詳細的機制還需要進一步研究。

大鼠染鉛后血清及各組織中抗氧化酶活性降低，丙二醛含量升高，抗氧化能力降低；而添加杏鮑菇多肽食料飼養(yǎng)大鼠，可提高其血清和臟器中抗氧化物酶活性和降低丙二醛的含量，緩解鉛造成的氧化損傷。