豬瘟的實(shí)驗診斷和防控措施

于艷萍

（黑龍江省動物衛(wèi)生監(jiān)督所，黑龍江哈爾濱 150001）

豬瘟的實(shí)驗診斷和防控措施

于艷萍

（黑龍江省動物衛(wèi)生監(jiān)督所，黑龍江哈爾濱 150001）

豬瘟是由黃病毒科瘟病毒屬的豬瘟病毒（HCV）引起豬的一種急性疫病。急性病例表現(xiàn)為發(fā)病急、高熱稽留和敗血癥；慢性病例表現(xiàn)為纖維素性壞死性腸炎。隨著飼養(yǎng)管理方式的變化和飼養(yǎng)管理技術(shù)水平的提高，各種疫（菌）苗的廣泛使用，豬瘟的發(fā)生和流行也發(fā)生了較大的變化，出現(xiàn)了非典型豬瘟、溫和型豬瘟，并常以散發(fā)流行，流行時還常與其他病原體一起形成混合感染或繼發(fā)感染。使豬瘟特征性臨床癥狀現(xiàn)地不明顯，并且常缺乏特征性病理變化。

豬瘟；實(shí)驗診斷；防控措施

1 實(shí)驗室診斷

豬瘟的實(shí)驗室診斷方法有本種動物接種試驗、雞新城疫病毒強(qiáng)化試驗、家兔接種驗、間接血凝試驗及其抑制試驗、反向間接血凝試驗、中和試驗、瓊脂擴(kuò)散試驗、熒光抗體試驗、酶標(biāo)抗體試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等。其中檢查病毒抗原的本動物種試驗，雖然確切而可靠，但手續(xù)繁雜、所需時間較長、費(fèi)用也較高，如非特別需要一般很少進(jìn)行。

（1）病料采集：采取病豬的扁桃體、脾、淋巴結(jié)（置冰瓶內(nèi)送檢，不加固定劑）。

（2）試驗方法：①免疫熒光染色法：該法是用來檢測組織材料中是否存在有豬瘟病毒（抗原）的方法。此法約3h即可作出診斷，歐美一些國家已規(guī)定為豬瘟的標(biāo)準(zhǔn)診斷法。免疫熒光染色法又分為直接法和間接法兩種。方法一：直接法。此法可因材料的處理方法不同而有兩種實(shí)驗程序。一是冰凍切片或觸片，經(jīng)丙酮固定15min、PBS液漂洗數(shù)次、以熒光抗體（市場有供應(yīng)，如購不到也要自己制作）染色（37℃，30min）、以PBS液浸洗2～3次、緩沖甘油封片。以熒光顯微鏡檢查，如見上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞內(nèi)有亮綠色熒光，即為陽性；呈青灰色或橙色無熒光者，則為陰性。二是將所取病豬組織先做成無菌懸液，接種于豬腎細(xì)胞單層培養(yǎng)物上，繼續(xù)培養(yǎng)24～72h，取出后用熒光抗體染色，熒光顯微鏡檢查，如見有亮綠色熒光斑，為陽性；反之為陰性。方法二：間接法。先用抗豬瘟抗體免疫羊，制備羊抗豬免疫球蛋白，用熒光素標(biāo)記做成羊抗豬熒光抗體。將病豬的組織切片或觸片分為兩組，對照組用正常豬血清，實(shí)驗組用抗豬瘟血清（1：4倍稀釋）處理30min，洗后，兩組同時用羊抗豬熒光抗體染色30min，漂洗、干燥、緩沖甘油封固，熒光顯微鏡下檢查，對照組無熒光，實(shí)驗組有熒光為陽性，均無熒光為陰性。

②雞新城疫病毒強(qiáng)化試驗：此法敏感性很高，幾乎能與易感豬接種法相比，故在日本已定為檢驗豬瘟病毒的標(biāo)準(zhǔn)方法。豬瘟病毒和雞新城疫病毒，單獨(dú)在豬睪丸細(xì)胞培養(yǎng)中均不產(chǎn)生細(xì)胞病變，但在接種豬瘟病毒3d后再接種雞新城疫病毒，不但可以產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變，并且可提高雞新城疫病毒的滴度。故可根據(jù)細(xì)胞病變的有無，間接地測知豬瘟病毒的存在。該強(qiáng)化試驗可被抗豬瘟血清所抑制，這種抑制作用除作上述試驗的對照組外，尚可用于豬瘟病毒的中和試驗。試驗方法：先將被檢材料接種于豬睪丸細(xì)胞培養(yǎng)物中，繼代適應(yīng)后再接種106蝕斑成單位的新城疫病毒，37℃培養(yǎng)3d。根據(jù)是否出現(xiàn)細(xì)胞病變進(jìn)行判定。同時應(yīng)設(shè)對照組。若試驗組出現(xiàn)有明顯的細(xì)胞病變，而對照組沒有出現(xiàn)細(xì)胞病變，則表示有豬瘟病毒存在。

③家兔接種試驗：豬瘟病毒不使家兔發(fā)病，亦無體溫反應(yīng)，但能使之產(chǎn)生免疫性；而豬瘟兔化弱毒苗能使家兔發(fā)生熱反應(yīng)。試驗時以病豬組織懸液或血液，除菌后肌肉接種家兔兩只。7d后另取未注射病豬組織懸液的家兔兩只作為對照，試驗兔和對照兔同時靜脈注射豬瘟兔化弱毒苗。每6h測溫一次，連續(xù)3d。如實(shí)驗組不出現(xiàn)定型熱反應(yīng)，而對照組出現(xiàn)定型熱反應(yīng)，即為陽性；如兩組均出現(xiàn)定型反應(yīng)則為陰性。

④酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：豬瘟ELISA診斷試劑盒，中國獸藥監(jiān)察所有供。該試劑盒用于檢測血清中的豬瘟病毒抗體，并且可以區(qū)分強(qiáng)毒（野毒）感染和弱毒（疫苗）免疫后所產(chǎn)生的抗體。操作方法按抗原說明書進(jìn)行，若OD值≥0.5，判為豬瘟強(qiáng)毒抗體陽性；若OD值＜0.5，判為豬瘟強(qiáng)毒抗體陰性。該試劑盒是進(jìn)行豬瘟抗體監(jiān)測、了解豬群強(qiáng)毒感染狀況和豬瘟流行病學(xué)調(diào)查十分有效的診斷試劑盒。

⑤間接血凝試驗：用豬瘟病毒抗原致敏的醛化紅細(xì)胞，檢測血清中的抗體。當(dāng)抗體滴度低于1：16時，應(yīng)及時接種豬瘟弱毒苗。

2 治療方法

目前還沒有治療豬瘟的有效藥物，對貴重豬種在病的早期，可采用注射高免血清進(jìn)行被動免疫來搶救。高免血清注射后沒有誘導(dǎo)期，可立即發(fā)揮作用，但存在免疫期短（約為兩周）和價格較高等問題?？关i瘟血清的治療量為1.0ml/kg；豬瘟苗原血清為2～3.0ml/kg，可作靜脈或肌肉注射。為了促使豬只的早日康復(fù)可配合以對癥療法、支持療法等進(jìn)行綜合性治療。同群的健康豬，可用抗豬瘟血清或豬瘟苗原血清作緊急預(yù)防接種，其劑量減半。

抗豬瘟血清生物藥廠很少生產(chǎn)，市場上一般購買不到，大、中型豬廠可以根據(jù)自身條件自己生產(chǎn)以備急用?？关i瘟血清的制備：挑選體重70～80kg，未經(jīng)過任何疫（菌）苗接種的健康豬，隔離飼養(yǎng)。首先每頭豬接種豬瘟兔化弱毒疫苗2.0ml。10d后進(jìn)行強(qiáng)化免疫，每頭豬接種豬瘟兔化弱毒疫苗10.0ml；10d后，每頭豬肌肉注射豬瘟血毒（豬血內(nèi)加抗凝劑）50.0ml；再過10d，每頭豬肌肉注射豬瘟血毒200.0ml；再過10d，每頭豬肌肉注射豬瘟血毒400.0ml。在第4次攻毒后10～12d，由頸動脈采血，一次采完，并分離血清，此血清即抗豬瘟血清。若一時不用，可加0.01%硫柳汞防腐，分裝無菌瓶內(nèi)，置4℃冰箱可保存2年。豬瘟苗原血清的制備：選用確知已經(jīng)豬瘟兔化弱毒疫苗免疫過的健康豬，再用200頭份的豬瘟兔化弱毒疫苗強(qiáng)化免疫一次。經(jīng)10～15d后，常規(guī)采血致死，按常規(guī)方法分離血清，加0.01%硫柳汞防腐，分裝無菌瓶內(nèi)備用，置4℃冰箱內(nèi)可保存2年。另外，患豬瘟痊愈豬的血清抗體滴度極高，也可收集保存?zhèn)溆谩?/p>

3 預(yù)防措施

該病傳染性極強(qiáng)，死亡率甚高，一旦發(fā)生，就會導(dǎo)致嚴(yán)重?fù)p失。因此，平時應(yīng)抓緊預(yù)防措施，杜絕該病的傳入；發(fā)生之后，應(yīng)立即采取緊急防疫措施，盡快撲滅疫情。（1）捕殺病豬。病豬一般以屠宰為宜，因為經(jīng)過治療，即使不死，也不易完全康復(fù)。從全局考慮，病豬存毒時間較長，保留病豬就等于保留傳染源，不利于撲滅豬瘟。（2）平時預(yù)防。養(yǎng)豬場應(yīng)經(jīng)常做好清潔衛(wèi)生工作，定期進(jìn)行消毒，禁止非工作人員進(jìn)、出，管理人員和運(yùn)輸車輛的進(jìn)、出都應(yīng)該進(jìn)行嚴(yán)格消毒。（3）自繁自養(yǎng)。養(yǎng)豬場應(yīng)貫徹自繁自養(yǎng)的方針，不從外地購入豬只。如確屬必需，則應(yīng)到飼養(yǎng)管理水平較高，疾病控制嚴(yán)密的豬場購入，豬只入場后應(yīng)隔離飼養(yǎng)2～3周，并進(jìn)行嚴(yán)格檢疫，確認(rèn)健康后方可并群飼養(yǎng)。（4）定期進(jìn)行免疫接種。我國的兔化毒疫苗是全世界使用最廣、也是最優(yōu)秀的疫苗，接種后1周可產(chǎn)生免疫力，免疫期持續(xù)1年以上。免疫接種不僅可保護(hù)接種豬不發(fā)生豬瘟，而且可以減少受HCV強(qiáng)毒攻擊時病毒的復(fù)制和向接觸豬的傳播。免疫接種應(yīng)制定行之有效的免疫程序，在豬群免疫前，應(yīng)對豬群進(jìn)行抗體水平檢測，根據(jù)抗體水平來確定接種時機(jī)。門常平等的研究表明，母源抗體滴度為1：32～1：64，此時攻毒可獲得100%保護(hù)，當(dāng)抗體滴度下降至1：16～1：32時尚能80%保護(hù)；當(dāng)?shù)味认陆抵?：8時，則完全不能保護(hù)。一般認(rèn)為，間接血凝試驗所測的血清抗體滴度低于1：16時，應(yīng)及時進(jìn)行免疫接種。為了克服體內(nèi)尚存抗體的干擾，可適當(dāng)加大免疫劑量。為了防止免疫接種后的免疫應(yīng)答受到母源抗體抑制，仔豬出生后應(yīng)立即接種豬瘟兔化弱毒疫苗，2h再讓仔豬吮吸初乳，這種哺乳前進(jìn)行豬瘟兔化弱毒疫苗免疫接種的方法，有效地預(yù)防了豬瘟的發(fā)生，現(xiàn)以廣泛推廣應(yīng)用。豬瘟免疫失敗時有發(fā)生，其中有許多是由于亞臨床感染豬瘟的懷孕母豬，病毒經(jīng)胎盤感染胎兒所致，早期感染多發(fā)生流產(chǎn)；中后期感染則產(chǎn)弱仔，這些豬可終生帶毒，形成持續(xù)感染，增加了豬場豬瘟不穩(wěn)定性。防止豬群亞臨床感染，可采用加大免疫劑量，母豬在配種前7～15d，一般以4頭份劑量進(jìn)行強(qiáng)化免疫，可取得良好效果。（5）緊急免疫接種。豬瘟兔化弱毒疫苗，安全性很好，免疫原性極佳，接種后4～6d即可產(chǎn)生對豬瘟的免疫力。成豬的免疫期可達(dá)18個月，乳豬的免疫期可達(dá)6個月。近年來的生產(chǎn)實(shí)踐證明，在豬場發(fā)生豬瘟?xí)r，除病豬和潛伏期豬外，對無癥狀的豬以4～5頭份的豬瘟兔化弱毒疫苗進(jìn)行緊急預(yù)防接種，可迅速撲滅疫情。進(jìn)行緊急免疫接種時，應(yīng)注意不得使用二聯(lián)或三聯(lián)疫苗，也不可應(yīng)用加有氫氧化鋁膠等佐劑的稀釋液，因佐劑能抑制早期免疫力的產(chǎn)生。

[1] 袁學(xué)華.豬瘟的實(shí)驗室診斷及防控凈化[A].中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會豬病防控學(xué)術(shù)研討會[C].2008：112.

于艷萍（1978—），女，黑龍江省巴彥縣人，碩士，高級獸醫(yī)師，主要從事獸醫(yī)工作。