樣品采集的注意事項(xiàng)

王玉鋒

（新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南新鄉(xiāng) 453003）

樣品采集的注意事項(xiàng)

王玉鋒

（新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南新鄉(xiāng) 453003）

樣品的采集、保存、運(yùn)輸和處理決定著檢測(cè)工作的成敗，是實(shí)驗(yàn)室操作質(zhì)控體系的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。本文綜述了樣品的采集、記錄、保存和運(yùn)輸以及樣品處理的注意事項(xiàng)，為給實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作提供合格的檢測(cè)樣品提供參考。

樣品；樣品采集；注意事項(xiàng)

檢測(cè)樣品是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的對(duì)象，檢測(cè)樣品的質(zhì)量與樣品的采集、保存、運(yùn)輸和處理密切相關(guān)，決定著檢測(cè)工作的成敗，是實(shí)驗(yàn)室操作質(zhì)控體系的第一個(gè)環(huán)節(jié)。[1]

1 樣品的采集

1.1 病原微生物樣品的采集

（1）剖檢動(dòng)物時(shí)要無(wú)菌操作，做好動(dòng)物保定和技術(shù)人員的個(gè)人防護(hù)。（2）為防止疫病傳播及污染環(huán)境，要做好動(dòng)物尸體的無(wú)害化處理工作和環(huán)境消毒。（3）根據(jù)初步判斷病因采集相應(yīng)部位的樣品。如檢測(cè)抗體，則采集血液；檢測(cè)病原，則要根據(jù)檢測(cè)病原的種類，采集相應(yīng)部位的組織、分泌物、內(nèi)容物等。（4）對(duì)采集的樣品做好標(biāo)記和記錄。（5）進(jìn)行調(diào)查流行病學(xué)、環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測(cè)、抗體監(jiān)測(cè)以及群體健康狀況評(píng)估時(shí)，采集樣品的數(shù)量應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)上的要求及各個(gè)飼養(yǎng)階段的比例分布。（5）無(wú)論采集的樣品是血液還是組織器官，樣品采集的全過(guò)程都需要無(wú)菌操作，充分做好樣品采集技術(shù)人員的防護(hù)工作。

1.2 常規(guī)樣品的采集

（1）血樣采集 采集全血要根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加相應(yīng)的抗凝劑；采集血清需要將全血在室溫下靜置3h左右，禁止日光直射及反復(fù)的搖晃和震蕩血液，待血清析出后分離血清，放置于4℃的冰箱里冷藏保存；如果放置時(shí)間較長(zhǎng)，則需放于-20℃的冰箱保存，禁止反復(fù)凍融。（2）眼、鼻、泄殖腔、呼吸道、咽等拭子的采集 用無(wú)菌PBS液保存所采集的拭子，PBS液的量沒(méi)過(guò)拭子即可，放于-20℃的冰箱保存，如果需要保存時(shí)間很長(zhǎng)，則需要放置于-70℃的冷凍柜保存，PCR檢測(cè)時(shí)需用50%的甘油生理鹽水保存，同樣是沒(méi)過(guò)試子即可，做實(shí)驗(yàn)前需要反復(fù)凍融幾次。如果進(jìn)行的是細(xì)菌學(xué)檢測(cè)，則可立即接種培養(yǎng)基或涂片染色。（3）組織器官的采集 應(yīng)采集病灶及病灶周圍的組織為樣品，而且所采臟器組織塊以1.5cm*1.5cm*1.5cm大小為宜，每塊單獨(dú)放于無(wú)菌容器中，采集過(guò)程中要確保樣品不受擠壓、不受冷凍，更應(yīng)保證樣品的新鮮。如果采集的樣品是用來(lái)冷凍切片的，那就需要將采集的組織臟器放置于0～4℃的環(huán)境下冷藏，要求盡快進(jìn)行切片并且檢測(cè)；注意如果作的是石蠟切片，則需用濃度為10%甲醛液固定；對(duì)于進(jìn)行PCR檢測(cè)的樣品，則需保持樣品的新鮮，如7天之內(nèi)可檢測(cè)的，則保存于-20℃的環(huán)境下。如果檢測(cè)時(shí)間在一個(gè)月之后甚至更長(zhǎng)，則需將樣品放置于-70℃的環(huán)境下保存。如果是用來(lái)檢測(cè)細(xì)菌時(shí)，則應(yīng)立即涂片并固定。（4）如果采集的樣品（膿汁、分泌物、血液等）是供顯微鏡檢查的，則應(yīng)盡快固定并涂片，整個(gè)操作過(guò)程均保持無(wú)菌操作。

2 樣品的登記記錄

送往實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的樣品應(yīng)附帶兩份送檢單，一份跟隨樣品，一份存檔備案；送檢單的內(nèi)容包括受檢單位、地址、動(dòng)物種類、存欄量、被采樣動(dòng)物的臨床癥狀以及被采樣動(dòng)物的免疫狀況（免疫病種、疫苗種類或性質(zhì)、疫苗癖好、疫苗廠家、免疫次數(shù)、末次免疫劑量、末次免疫至采樣的間隔天數(shù)）。

3 樣品的儲(chǔ)藏和運(yùn)輸

所采集的樣品應(yīng)在最短時(shí)間內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室。如果在24h內(nèi)能送到實(shí)驗(yàn)室處理檢測(cè)，則需將樣品放于4℃的無(wú)菌容器中，派專業(yè)技術(shù)人員送達(dá)；如果需要郵寄，則需將樣品放于裝有防震材料的保溫箱中，同時(shí)放入冰塊運(yùn)輸；如果樣品是玻片、觸片以及涂片，則需在其上邊做好標(biāo)記并放入玻片盒中，同時(shí)另需附加說(shuō)明。以上各類樣品都需要標(biāo)注上詳盡的標(biāo)簽。

4 樣品的處理

樣品在送往實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)之前，都需要進(jìn)行處理。（1）組織及實(shí)質(zhì)器官樣品的處理 對(duì)于死亡的動(dòng)物尸體，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)通常采集其組織、器官、胚胎作為檢測(cè)樣品。為保證動(dòng)物尸體不被其他微生物及病菌的污染，應(yīng)盡快解剖采集，在冬季，需要在畜禽死亡后6h以內(nèi)采集器官、組織和胚胎等，夏季則要在畜禽死亡后4h內(nèi)采集相應(yīng)的器官組織。對(duì)于即將死亡的畜禽，則需要放血死亡后采集。（2）滲出物以及分泌物的處理 用稀釋液將所采集的分泌物和滲出物作2倍稀釋，在室溫下放置反應(yīng)1h左右，然后取其上清液供實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)使用。（3）鼻試子、口腔試子、泄殖腔試子等各種試子的處理 將試子在保存液中充分的搖晃、震蕩、刷洗后取其上清液作為檢測(cè)樣品。

5 細(xì)菌檢測(cè)樣品的處理

對(duì)于無(wú)菌的樣品，則在接種前不需要任何處理；對(duì)于有雜菌生長(zhǎng)的樣品，則可以通過(guò)選擇培養(yǎng)基來(lái)抑制其生長(zhǎng)；對(duì)于檢測(cè)樣品為奶以及尿等且含菌量較少時(shí)，則可以用過(guò)濾法或離心法作集菌處理。

6 血清樣品的處理

血清樣品用于血清學(xué)診斷，除商品試劑盒特殊要求外，一般不做特殊處理。

[1] 閆若潛，李桂喜，孫清漣.動(dòng)物疫病防控工作指南（第二版）[M].中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社， 2011.

王玉鋒（1978—），女，河南農(nóng)業(yè)大學(xué)。