楊立志，姜雪敏

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江雞西 158100）

高效液相色譜法測定利肺片中五味子醇甲、五味子甲素及五味子乙素含量

楊立志，姜雪敏

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江雞西 158100）

目的建立測定利肺片中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法采用Agilent Extend－C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 m)，以乙腈－水為流動相梯度洗脫，流速為1.0 mL／min，檢測波長為220 nm。結(jié)果3種成分進樣量線性范圍分別為五味子醇甲0.025 8～0.515 0 g（r＝1.000 0），五味子甲素0.026 5～0.530 9 g（r＝1.000 0），五味子乙素0.026 0～0.521 0 g （r＝1.000 0）；平均回收率依次為97.35%，97.54%，97.58%，RSD分別為0.48%，0.55%，0.44%（n＝6）。結(jié)論該方法操作簡便，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于利肺片的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；利肺片；五味子醇甲；五味子甲素；五味子乙素；含量測定

利肺片是由五味子、白及、枇杷葉、牡蠣、百部、甘草、百合、冬蟲夏草、蛤蚧粉制成的中成藥，具有驅(qū)癆補肺、鎮(zhèn)咳祛痰的功效，可用于治療肺結(jié)核咳嗽、咯痰咯血、氣虛哮喘、慢性支氣管炎[1]。目前，該藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未對方中任何藥物進行定性或定量測定，不能有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量。為此，筆者參考文獻(xiàn)[2－14]，建立了測定利肺片中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量的高效液相色譜（HPLC）法，并進行了方法學(xué)驗證，為更好地控制該藥品的質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC－2010A型高效液相色譜儀（株式會社島津制作所）；AG285型電子分析天平（瑞士梅特勒托利多公司）；KQ－400KDE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

五味子醇甲對照品（批號為110857－200608，純度為100.00%），五味子甲素對照品（批號為110764－201010，純度為99.60%），五味子乙素對照品（批號為110765－200508，純度為100.00%），均購于中國食品藥品檢定研究院；利肺片（通化民泰藥業(yè)股份有限公司，批號為140101，吉林百姓堂藥業(yè)有限公司，批號為150602，150801）；水為超純水，乙腈（Merck公司）為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Extend－C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：流動相A為乙腈，流動相B為水，梯度洗脫（0～20 min，A為30%；20～70 min，A為30%～80%）；流速：1.0 mL／min；柱溫：30℃；進樣量：10 μL；檢測波長：220 nm。理論板數(shù)按五味子乙素峰計算均應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液制備

混合對照品溶液：稱取五味子醇甲對照品10.30 mg，五味子甲素對照品10.66 mg，五味子乙素對照品10.42 mg，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋，制成質(zhì)量濃度分別為0.515，0.533，0.521 mg／mL的對照品貯備液。再分別量取對照品貯備液各1 mL，置20 mL容量瓶中，制成每1 mL含五味子醇甲25.75 μg、五味子甲素26.54 μg、含五味子乙素26.05 μg的混合對照品溶液。

供試品溶液：取本品適量，研細(xì)，稱取2.0 g（平均片重為0.435 7 g），精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理40 min（功率400 W，頻率40 Hz），放冷至室溫，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，即得。

陰性對照品溶液：按照利肺片處方工藝制成不含五味子的空白樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干撓試驗：精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖（見圖1）。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液相應(yīng)位置上有相同保留時間的色譜峰，表明陰性對照無干擾。

線性關(guān)系考察：分別精密吸取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品混合溶液1，2，5，10，15，20 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對照品進樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程，五味子醇甲為Y＝7.000 0×106X－9.856 5× 102，r＝1.000 0（n＝6）；五味子甲素，Y＝8.000 0× 106X＋1.909 9×103，r＝1.000 0（n＝6）；五味子乙素，Y＝8.000 0×106X＋1.323 1×103，r＝1.000 0（n＝6）。結(jié)果表明，五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素進樣量分別在0.0258～0.5150μg，0.0265～0.5309μg，0.0260～0.521 0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密吸取混合對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，計算峰面積。結(jié)果，五味子醇甲峰面積平均值為1 877 849，RSD＝0.86%（n＝6）；五味子甲素峰面積平均值為2 049 349，RSD＝0.92%（n＝6）；五味子乙素峰面積平均值為2 031 295，RSD＝1.02%（n＝6）。表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一供試品溶液，在室溫下放置0，2，4，8，12，24 h后，分別進樣10 μL，記錄峰面積。結(jié)果，五味子醇甲峰面積平均值為1 820 881，RSD＝0.82%（n＝6）；五味子甲素峰面積平均值為2 027 508，RSD＝0.79%（n＝6）；五味子乙素峰面積平均值為2 019 439，RSD＝0.90%（n＝6）。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：稱取同一批樣品（批號為140101）6份，依法制備供試品溶液，測定含量。結(jié)果五味子醇甲平均含量為0.070 mg／片，RSD＝0.75%，五味子甲素平均含量為0.072 mg／片，RSD＝0.91%，五味子乙素平均含量為0.071 mg／片，RSD＝1.01%。表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量的同一批樣品（批號為140101，五味子醇甲含量為0.070 mg／片，五味子甲素含量為0.072mg／片，五味子乙素含量為0.071mg／片）約1.0 g，以2份為1組，共3組，分別置25 mL容量瓶中，分別精密加入五味子醇甲對照品溶液（161.0μg／mL）、五味子甲素對照品溶液（165.0 μg／mL）和五味子乙素對照品溶液（163.0 μg／mL）0.8，1.0，1.2 mL，加甲醇稀釋至刻度，稱定質(zhì)量，超聲處理40 min，放冷至室溫，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，作為供試品溶液。按2.1項下色譜條件進樣測定，并計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果（n＝6）

2.4 樣品含量測定

取市售利肺片3批，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量。結(jié)果見表2。

表2 含量測定結(jié)果（mg／片，n＝9）

3 討論

3.1 檢測波長選擇

經(jīng)檢測，五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素最大紫外吸收波長均在（220±2）nm，本研究中采用220 nm，則3種被測成分均有較大吸收。

3.2 流動相選擇

應(yīng)用2015年版《中國藥典（一部）》中五味子含量測定項下的流動相，3種被測成分未能達(dá)到較好分離，以乙腈－水為流動相，梯度洗脫，則使分離度更好，故選用后者為流動相。

3.3 檢測對象選擇

方中五味子為主藥，五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素是其主要成分，且含量高，易于測定，故采用測定處方中五味子的成分含量來控制該制劑的質(zhì)量。

3.4 樣品提取溶劑選擇

分別考察了甲醇、70%甲醇、乙酸乙酯，結(jié)果表明，以甲醇為溶劑提取效果較好，故以甲醇為溶劑。

3.5 樣品提取時間選擇

用甲醇分別提取20，40，60 min，結(jié)果表明，20 min提取的含量低于提取40 min和60 min，且提取40 min 和60 min含量基本相同，故確定提取時間為40 min。

[1]WS3－B－2152－96.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第十一冊）[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：66－67.

[3]單鑫，陸兔林，毛春芹，等.HPLC同時測定復(fù)方五味含片中葛根素、甘草苷、甘草酸銨、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2014，30（1）：82－84.

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Content Determination of Schisandrin，Deoxyschizandrin and Schisandrin B in Lifei Tablets by HPLC

Yang Lizhi，Jiang Xuemin

（Jixi Inspection and Testing Center for Food and Drug，Jixi，Heilongjiang，China158100）

ObjectiveTo develop an HPLC method for the content determination of Schisandrin，Deoxyschizandrin and Schisandrin B in Lifei Tablets.MethodsThe separation was performed on an Agilent Extend－C18column(250 mm×4.6 mm，5 m).The mobile phase was Acetonifrile－Water，gradient elution，with the flowing rate of 1.0 mL／min.The detection wave length was 220 nm.ResultsThe linear ranges of Schisandrin，Deoxyschizandrin and Schisandrin B were 0.025 8－0.515 0 μg（r＝1.000 0），0.026 5－0.530 9 μg （r＝1.000 0）and 0.026 0－0.521 0 μg（r＝1.000 0），respectively.The average recoveries were 97.35%，97.54%and 97.58% respectively，RSD＝0.48%，0.55%，0.44%(n＝6），respectively.ConclusionThe method is simple，reproducidle and accurate，and can be used in the content determination of Schisandrin，Deoxyschizandrin and Schisandrin B in Lifei Tablets.

HPLC；Lifei Tablets；Schisandrin；Deoxyschizandrin；Schisandrin B；content determination

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)02－0038－03

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.02.011

2016－09－23；

2016－10－15)

楊立志（1977－），男，大學(xué)本科，副主任藥師，主要從事食品藥品檢驗檢測工作，（電話）0467－6103377。