Xpert MTB/RIF試驗在縣（區(qū)）基層結(jié)核病實驗室診斷疑似肺結(jié)核中的應用價值

鐘麗云+李靜

摘 要 目的：探索Xpert MTB/RIF試驗在縣（區(qū)）基層結(jié)核病實驗室診斷疑似肺結(jié)核中的應用價值。方法：選取2015年3—6月在惠州市博羅縣慢性病防治站就診的疑似肺結(jié)核患者的痰樣本110份，分別進行涂片抗酸染色法、固體培養(yǎng)法和比例法藥敏、Xpert MTB/RIF試驗檢測。以固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果為標準，評估涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗檢測痰樣本中結(jié)核分枝桿菌的敏感度及特異性；以比例法藥敏試驗檢測結(jié)果為標準，評估Xpert MTB/RIF試驗檢測結(jié)核分枝桿菌對利福平耐藥的敏感度和特異性。結(jié)果：在110份痰樣本中，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性的有48份，陽性率為43.64%。以固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果為標準，涂片抗酸染色法檢測的敏感度為83.33%，低于Xpert MTB/RIF試驗檢測的91.67%，但差異無統(tǒng)計學意義（χ2=1.523 8， P>0.05）；特異性為90.32%，稍高于Xpert MTB/RIF試驗檢測的88.70%，但差異也無統(tǒng)計學意義（χ2=0.085 9， P>0.05）。以固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果為標準，涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗檢測的K值分別為0.752和0.821，涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗檢測結(jié)果與固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果均具有較好的一致性。以比例法藥敏試驗檢測結(jié)果為標準，Xpert MTB/RIF試驗檢測結(jié)核分枝桿菌對利福平耐藥的敏感度和特異性分別為87.50%和94.59%。結(jié)論：Xpert MTB/RIF試驗檢測操作簡單、快速，可用于檢測結(jié)核分支桿菌及其對利福平的耐藥性，檢測結(jié)果具有較高的敏感度和特異性，且與固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果有較好的一致性，具有在縣（區(qū)）基層結(jié)核病實驗室推廣應用的潛力。

關鍵詞 Xpert MTB/RIF試驗 結(jié)核分枝桿菌 對利福平耐藥

中圖分類號：R521； R446.5 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1533（2017）05-0041-03

Applied value of Xpert MTB/RIF test for diagnosis of tuberculosis in the primary laboratory

ZHONG Liyun1*， LI Jing2（1. Clinical Laboratory， Chronic Disease Prevention and Control Station of Boluo Country in Huizhou City， Guangdong 516100， China； 2. Clinical Laboratory， Huizhou Institution for Tuberculosis Prevention and Control， Guangdong 516100， China）

ABSTRACT Objective： To discuss the applied value of Xpert MTB/RIF test for diagnosis of tuberculosis in the primary laboratory. Methods： One hundred and ten cases of sputum samples collected from patients with suspected pulmonary tuberculosis were analyzed by phlegm smear microscopic exam， plate culture， proportional drug sensitivity test and Xpert MTB/ RIF detection， respectively and their sensitivity and specificity to Mycobacterium tuberculosis in sputum samples were evaluated. Results： There were 48 cases of Mycobacterium tuberculosis positive specimens with positive rate of 43.64%. The sensitivity of phlegm smear microscopic exam was lower while the specificity was a little bit higher than those of Xpert MTB/RIF detection（83.33% vs 91.67% and 90.32% vs 88.70%） when taking plate culture as gold standard， however their differences showed no statistical significance （P>0.05）. The kappa value was 0.752 for phlegm smear microscopic exam and 0.821 for Xpert MTB/ RIF detection， indicating that the detective results of both methods showed a good coincidence with plate culture. The sensitivity and specificity of Xpert MTB/RIF detection were 87.50% and 94.59% when taking proportional drug sensitivity test as standard. Conclusion： The Xpert MTB/RIF detection is fast and easy to operate with high sensitivity and specificity and a good coincidence with plate culture and can effectively detect Mycobacterium tuberculosis and its resistance to rifampicin， and is worthy of clinical use in primary laboratory.

KEY WORDS Xpert MTB/RIF test； Mycobacterium tuberculosis； rifampicin resistance

肺結(jié)核是一種由結(jié)核分枝桿菌感染所引起的肺部感染性疾病，具有傳染性、高致死率等特點，嚴重威脅著人們生命健康，已引起臨床的普遍關注。目前，耐多藥肺結(jié)核病例日益增多，給我國結(jié)核病防治工作帶來了嚴峻挑戰(zhàn)。世界衛(wèi)生組織指出，高效和以人為本的檢測診斷技術的普及是控制結(jié)核病的基礎，同時及時、準確和可靠的藥敏試驗亦有重要意義。近年來，隨著分子生物學診斷技術的迅速發(fā)展，Xpert MTB/RIF試驗在結(jié)核病的快速診斷及對利福平耐藥檢測中的應用受到國內(nèi)外專家和學者的廣泛關注[1-2]。為此，本研究以在惠州市博羅縣慢性病防治站就診的疑似肺結(jié)核患者的110份痰樣本為對象，分別采用涂片抗酸染色法、固體培養(yǎng)法、比例法藥敏試驗和Xpert MTB/RIF試驗進行檢測，以探索Xpert MTB/RIF試驗在結(jié)核分枝桿菌及其對利福平耐藥檢測中的應用價值，尤其是用于縣（區(qū)）基層結(jié)核病實驗室的潛力，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年3—6月在惠州市博羅縣慢性病防治站就診的疑似肺結(jié)核患者的痰樣本110份，所有樣本在采集前患者均未接受過抗結(jié)核藥物治療。

1.2 檢測方法

對110份疑似肺結(jié)核患者的痰樣本分別進行涂片抗酸染色法、固體培養(yǎng)法、比例法藥敏試驗和Xpert MTB/RIF試驗檢測。Gene Xpert System及其試劑由美國Cepheid公司提供。

1）涂片抗酸染色法檢測參照《痰涂片鏡檢標準化操作及質(zhì)量保證手冊》中的操作要求[3]進行。

2）固體培養(yǎng)法檢測參照《結(jié)核病實驗室標準化操作與網(wǎng)絡建設》中的要求[4]進行，具體操作如下：先用4%的NaOH溶液處理，然后通過無菌操作方法將樣本接種在培養(yǎng)基（改良的羅氏培養(yǎng)基）斜面上，于37 ℃下分別培養(yǎng)3和7 d，觀察培養(yǎng)基的變化情況，此后每周觀察1次，記錄細菌的生長情況，直至出現(xiàn)陽性結(jié)果。若60 d后無細菌生長，則判斷結(jié)果為陰性。菌落的生化實驗菌種鑒定和比例法藥敏試驗檢測參照《結(jié)核病診斷實驗室檢驗規(guī)程》[5]進行。

3）Xpert MTB/RIF試驗檢測的操作方法為：將1 ml痰樣本置于前處理管中，加入2倍痰樣本體積的痰樣本處理液，旋渦振蕩器上振蕩15 ～ 30 s，靜置15 min并使痰樣本充分液化，然后取2 ml緩慢轉(zhuǎn)移至反應盒中，將反應盒置于檢測系統(tǒng)中進行全自動檢測，最后直接在檢測系統(tǒng)窗口讀取結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計數(shù)資料采用百分比的形式表示，計數(shù)資料間的比較采用卡方檢驗，P>0.05表示差異沒有統(tǒng)計學意義。涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗檢測結(jié)果與固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果的一致性比較采用Kappa檢驗，K≥0.75表示一致性良好。

2 結(jié)果

2.1 涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗檢測結(jié)核分枝桿菌的結(jié)果

在110份痰樣本中，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性的有48份，陽性率為43.64%。以固體培養(yǎng)法檢查結(jié)果為標準，涂片抗酸染色法檢測結(jié)核分枝桿菌（表1）的敏感度、特異性、陽性預測率、陰性預測率和準確性分別為83.33%、90.32%、86.96%、87.54%和87.27%，而Xpert MTB/RIF試驗檢測結(jié)核分枝桿菌（表2）的敏感度、特異性、陽性預測率、陰性預測率和準確性分別為91.67%、88.70%、86.27%、93.22%和90.00%。涂片抗酸染色法檢測的敏感度為83.33%，低于Xpert MTB/RIF試驗檢測的91.67%，但差異無統(tǒng)計學意義（χ2=1.523 8， P>0.05）；特異性為90.32%，略高于Xpert MTB/RIF試驗檢測的88.70%，但差異也無統(tǒng)計學意義（χ2=0.085 9， P>0.05）。以固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果為標準，涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗檢測的K值分別為0.752和0.821，涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗檢測結(jié)果與固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果均具有較好的一致性。

2.2 Xpert MTB/RIF試驗檢測結(jié)核分枝桿菌對利福平耐藥的結(jié)果

經(jīng)菌種鑒定，在48份陽性樣本中，有3份為非結(jié)核分枝桿菌，其余45份為結(jié)核分枝桿菌。Xpert MTB/RIF試驗的耐藥檢出率為20.00%，稍高于比例法藥敏試驗的17.78%（表3），但差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.072 5， P>0.05）。以比例法藥敏試驗檢測結(jié)果為標準，Xpert MTB/RIF試驗檢測結(jié)核分枝桿菌對利福平耐藥的敏感度和特異性分別為87.50%和94.59%。

3 討論

結(jié)核分支桿菌的固體培養(yǎng)法、涂片抗酸染色法等檢測方法是臨床上診斷結(jié)核病的經(jīng)典方法，其中固體培養(yǎng)法是檢測結(jié)核分枝桿菌的金標準方法，具有較高的敏感度和特異性，但需時過長。涂片抗酸染色法檢測結(jié)核分枝桿菌雖然快捷、簡便，但對樣本的含菌量有要求，如是含菌量較低的肺外樣本，則易出現(xiàn)漏診。此外，涂片抗酸染色法檢測亦不能區(qū)分結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌。比例法藥敏試驗是目前臨床上用來檢測結(jié)核分枝桿菌是否對利福平耐藥的金標準方法，但其檢測需時非常長，可能對患者治療產(chǎn)生一定的負面影響。Xpert MTB/RIF試驗是一種集樣品準備、定量聚合酶鏈反應擴增和熒光檢測于一身的體外檢測方法，其采用一次性試劑盒，自動完成檢測，操作簡便且僅需時2 h左右，同時檢測過程中不易受到干擾，可用作臨床上檢測結(jié)核分枝桿菌及其對利福平耐藥情況的首選方法[6]。世界衛(wèi)生組織已推薦Xpert MTB/RIF試驗為中低收入國家結(jié)核病和耐多藥結(jié)核病檢測的主要方法[7]。

本研究結(jié)果顯示，在110份痰樣本中，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性的有48份，陽性率為43.64%。以固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果為標準，涂片抗酸染色法檢測的敏感度為83.33%，低于Xpert MTB/RIF試驗檢測的91.67%；特異性為90.32%，稍高于Xpert MTB/RIF試驗檢測的88.70%。這說明，Xpert MTB/RIF試驗檢測結(jié)核分支桿菌的敏感度和特異性均較好，與涂片抗酸染色法檢測結(jié)果相當（差異沒有統(tǒng)計學意義）。以固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果為標準，涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗檢測的K值分別為0.752和0.821，涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗檢測結(jié)果與固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果的一致性也均較好。以比例法藥敏試驗檢測結(jié)果為標準，Xpert MTB/RIF試驗檢測結(jié)核分枝桿菌對利福平耐藥的敏感度和特異性分別為87.50%和94.59%，與國內(nèi)其他研究結(jié)果相似。81 bp核心突變區(qū)是耐利福平結(jié)核分枝桿菌耐藥基因的主要集中區(qū)域，Xpert MTB/RIF試驗正是通過檢查rpoB基因的該核心突變區(qū)而檢測耐利福平結(jié)核分枝桿菌的。Xpert MTB/RIF試驗檢測平均需時約2 h，而涂片抗酸染色法檢測平均需時1 d，固體培養(yǎng)法檢測需時1個月以上，比例法藥敏試驗檢測則需時2個多月才能得到結(jié)果。顯然，Xpert MTB/RIF試驗檢測的時間成本更低、效率更高。本研究結(jié)果說明，Xpert MTB/RIF試驗檢測操作簡單、快速，可有效檢測結(jié)核分支桿菌及其對利福平的耐藥情況，具有較高的敏感度和特異性，且與固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果有較好的一致性，適合在縣（區(qū)）基層結(jié)核病實驗室中應用，有助于結(jié)核病的早期篩查、早期診斷和早期治療。

參考文獻

[1] 劉家云， 郝曉柯. 結(jié)核病實驗室診斷方法新進展[J]. 臨床檢驗雜志， 2013， 31（2）： 115-117.

[2] 劉建俠. Xpert MTB/RIF技術在基層定點醫(yī)院肺結(jié)核病診斷中的應用價值[J]. 中國實驗診斷學， 2016， 20（6）： 928-930.

[3] 趙雁林， 姜廣路. 痰涂片鏡檢標準化操作及質(zhì)量保證手冊[M]. 北京： 中國協(xié)和醫(yī)科大學出版社， 2009： 4-9.

[4] 趙雁林， 劉志敏. 結(jié)核病實驗室標準化操作與網(wǎng)絡建設[M]. 北京： 人民衛(wèi)生出版社， 2013： 227-280.

[5] 中國防癆協(xié)會基礎專業(yè)委員會. 結(jié)核病診斷實驗室檢驗規(guī)程[M]. 北京： 中國教育文化出版， 2006： 17-18.

[6] 高文鳳， 龍波， 楊筠， 等. Xpert MTB/RIF技術在結(jié)核病診斷及耐藥檢測中的應用[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2016， 26（13）： 1858-1859.

[7] 徐禮鋒， 祝進， 朱晟梅， 等. Xpert MTB/RIF檢測結(jié)核分枝桿菌和利福平耐藥性的應用研究[J]. 中華臨床感染病雜志， 2016， 9（1）： 66-68.