魏鳳，張文通，苗立中，沈志強(qiáng)*,

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

一起雞心包積液病例的診治*

魏鳳1，張文通2，苗立中1，沈志強(qiáng)*1,2

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

2 臨床癥狀

肉雞雞群表現(xiàn)減食，精神沉郁，羽毛蓬亂，頭及翅膀下垂；嗜睡，臥地。

3 病理變化

剖檢病雞發(fā)現(xiàn)：個(gè)別雞肌肉出血；個(gè)別腺胃與肌胃交界處出血；腎臟腫大出血；心包大量淡黃色積液(如圖1所示)；肝臟顏色淡黃、腫脹及質(zhì)碎，脾臟腫大出血。

圖1 心包積液

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 病料處理 取發(fā)病或病死肉雞的肝臟和脾臟，添加少量鹽水，用勻漿器進(jìn)行研磨；勻漿液反復(fù)凍融三次，離心取上清。上清凍存至-80℃冰箱。

4.2 病毒RT-PCR鑒定

4.2.1 引物設(shè)計(jì) 根據(jù) GenBank KU877428的mRNA序列，利用Prime 5.0軟件，設(shè)計(jì)擴(kuò)增長度約749bp基因。引物合成單位為生工生物工程（上海）股份有限公司。擴(kuò)增IBDV VP3的引物序列如下：

上游引物：5′-TCTTCGACACGTCCATCAACT-3′

下游引物：5′-TTACACGGCGTTGCCTGT-3′

4.2.2 病毒RNA基因組提取 Trizol法提取病毒RNA。詳細(xì)操作方法如下：將上述4.1中-80℃凍存的上清為提取病毒 RNA基因組的樣本；取1.5ml EP管 (注：提RNA所用到的EP管均需DEPC處理)1個(gè)，先加入250μl上清、再加入750μl Trizol試劑，渦旋混勻、室溫靜置5min；再加入200μl氯仿，然后上下顛倒搖動(dòng)數(shù)次、室溫靜置10min；以 4℃ 12,000rmp離心 10min；取上層液體400μl加入至另1新的1.5ml EP管中，再加入異丙醇（預(yù)冷的）200μl，混勻于-20℃放置 30min；以4℃ 12,000rmp離心10min；棄上清液，用75%乙醇溶液（預(yù)冷的）洗滌沉淀；以 4℃ 12,000rmp離心10min；棄上清液，將該EP管放置室溫或37℃溫箱干燥10min；加入30μl含DEPC的滅菌水，得到的溶液即為病毒的RNA基因組。

4.2.3 病毒的 RT-PCR 反轉(zhuǎn)錄步驟為：取1.5ml EP管 (注：提 RNA所用到的 EP管均需DEPC處理)1個(gè)，加入RNA提取物10μl、下游引物（20μM）2μl，70℃水浴10min；取出后再加入 5× first stand buffer 4μl、dNTP(10mM)3μl、M-MLV酶1.0μl，放置42℃水浴60min；取出后放置70℃水浴15min。得到的溶液即為cDNA。

PCR體系：cDNA4μl、上游引物（20μM）和下游引物（20μM）各 0.5μl、10×PCR Buffer2.5μl、dNTP (10mM)1.0μl、滅菌水16.5μl。PCR反應(yīng)程序：94℃3min、94℃30s、55℃45s、55℃45s，35個(gè)循環(huán)。

PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳：將PCR產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠（濃度為1%）電泳檢測。電泳結(jié)果與設(shè)計(jì)擴(kuò)增大小片段相符 （設(shè)計(jì)片段大小為749bp）。結(jié)果見圖2。

圖2 IBH的RT-PCR結(jié)果

病毒的RT-PCR鑒定結(jié)果顯示該發(fā)病雞群病原為Ⅰ群禽腺病毒。

5 治療

5.1 所有發(fā)病雛雞舍應(yīng)徹底清掃，用2%次氯酸鈉溶液消毒。

5.2 減小飼養(yǎng)密度，加強(qiáng)通風(fēng)換氣。

5.3 對所有發(fā)病雞群的雛雞雞群進(jìn)行補(bǔ)液，補(bǔ)充Vc和電解質(zhì)。

5.4 對發(fā)病雞舍所有雞群緊急接種Ⅰ群禽腺病毒高免卵黃抗體。

5.5 發(fā)病雞舍附近其他雞舍緊急接種Ⅰ群禽腺病毒滅活疫苗。

通過以上措施的治療與控制，1周后回訪該養(yǎng)殖場，發(fā)病雞群明顯好轉(zhuǎn)并且已幾乎未見死亡病雞。

[1] 殷震，劉景華主編.動(dòng)物病毒學(xué)（第二版）[M]．北京：科學(xué)技術(shù)出版社，1997．

[2] 陳鴻軍.最新管關(guān)注：腺病毒引起的HHS[J]．中國家禽，2004,26（19）：30．

[3] 袁萬哲，李玉保，王建昌，等．雞心包積液-肝炎綜合征的初步研究[J]．中國獸醫(yī)科學(xué)，2016,46（2）：157-160．

S858.31

C

1673-1085（2017）03-0026-02

1 發(fā)病情況調(diào)查

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系家禽創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目SDAIT-13-011-09。

魏鳳（1979-），女，漢族，助理研究員，主要從事獸用生物制品研究，hzndzwt1@163.com。

2017-02-17

雞包涵體肝炎 （Inclusion Body Hepatitis, IBH）是由Ⅰ群禽腺病毒 （Fowl adenovirusⅠ, FAV-Ⅰ）引起的一種急性傳染病。該病最早發(fā)生在巴基斯坦卡拉奇市安卡拉地區(qū)，所以也稱之為安卡拉病[1]。該病特征性病理變化為心包囊積液和肝炎。目前該病已在我國多地流行，可造成肉雞、蛋雞乃至水禽發(fā)病死亡，已嚴(yán)重影響?zhàn)B禽業(yè)健康發(fā)展[2-3]。2016年11月，山東德州某養(yǎng)雞場發(fā)生了以心包淡黃色積液和肝臟淡黃色出血腫脹為特征的疑似雞包涵體肝炎病例，現(xiàn)將診斷過程介紹如下。

山東德州某養(yǎng)雞，2016年11月，3周齡肉雞中零星出現(xiàn)發(fā)病，3d之后群體發(fā)病或散發(fā)死亡?？股刂委煙o效。發(fā)病率約為10%，病死率達(dá)40%。