樊 英，李天保，刁 菁，李 樂，于曉清，劉恩孚，葉海斌

（山東省海洋生物研究院，山東省海水養(yǎng)殖病害防治重點實驗室，山東青島266104）

黨參對仿刺參免疫和消化功能的影響

樊 英，李天保，刁 菁，李 樂，于曉清，劉恩孚，葉海斌*

（山東省海洋生物研究院，山東省海水養(yǎng)殖病害防治重點實驗室，山東青島266104）

本文探討了植物源黨參對仿刺參機體免疫功能和腸道消化功能的影響。試驗過程中黨參提取物以微膠囊制劑的形式，按照鼠尾藻粉質(zhì)量的1%、2%、4%添加到基礎(chǔ)飼料中，第14、28、42、56天取樣測定體腔液免疫因子和腸道消化酶活性。結(jié)果顯示：2%黨參微膠囊制劑對仿刺參體腔細(xì)胞數(shù)量、吞噬活性及呼吸爆發(fā)活性有顯著影響 （P＜0.05），第28天活性最高。而且，體腔細(xì)胞上清液CLS中超氧化物歧化酶（SOD）、酸性磷酸酶（ACP）、一氧化氮合成酶（NOS）活性在第28天最高（P＜0.05），分別為67.4 U/mL，2.65 U/100 mL，10.9 U/mL，而酚氧化酶活性（PO）在第42天活性最高（P＜0.05），為77.7 U/mL。仿刺參腸道內(nèi)容物蛋白酶、淀粉酶、褐藻酸梅活性在第28天最高，分別為62.8 U/g·min，57.8 U/100 mL，0.3 U/g·min，與對照組差異顯著（P＜0.05）。投喂試驗結(jié)束后，通過致病菌燦爛弧菌攻毒試驗進(jìn)行免疫增強劑黨參的效果評價。結(jié)果顯示：2%黨參微膠囊制劑對仿刺參的免疫保護(hù)率最強，其累積死亡率僅有21.3%。故黨參可通過提高仿刺參機體免疫因子活性和腸道消化酶活性，從而間接提高仿刺參抗病能力。

免疫增強劑；黨參；仿刺參；免疫；消化；抗病力

近年來，仿刺參 （Apostichopus japonicus，Se lenka）已成為北方養(yǎng)殖業(yè)最大的養(yǎng)殖品種之一，然而，隨著養(yǎng)殖規(guī)?；⒓s化的發(fā)展，仿刺參病害的發(fā)生頻率及程度越來越高，自“腐皮綜合征”發(fā)生以來，尋求綠色環(huán)保、無公害的免疫增強劑便成為預(yù)防仿刺參疾病發(fā)生的研究熱點（馬悅欣等，2006；張春云等，2006）。

黨參（Codonopsis pilosula）是桔梗科多年生草本植物的根莖，富含多種營養(yǎng)成分，如多糖、酚類、甾醇類、皂甙等。據(jù)報道，黨參多糖是黨參的一種重要的組成成分，具有多種生物學(xué)活性，包括增強免疫力、抗腫瘤、抗氧化、降血脂等（樊長征和洪巧瑜，2016；宴永新等，2013）。而且還可作為動物機體的一種營養(yǎng)飼料，加速代謝效率，提高轉(zhuǎn)化速度，從而增強吸收效率。本文在基礎(chǔ)飼料中添加不同比例的黨參，研究其對仿刺參免疫及消化功能的影響，旨在為黨參作為免疫增強劑提供有力的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 黨參提取物純度高達(dá)85%，由西安寶雞生物有限公司提供，實驗室內(nèi)制備黨參微膠囊（銳孔凝固浴方式制備，其包埋率達(dá)85%），備用；健康仿刺參，初始體重為（19.00±2.00）g；基礎(chǔ)飼料是海泥與鼠尾藻粉按1∶1溶于過濾海水中并煮沸；SOD、ACP、T-NOS等試劑盒均購于南京建成生物工程研究所，其他試劑均為國藥集團(tuán)化學(xué)分析純。

1.2 試驗條件 水溫16～18℃，pH 7.8～8.2，鹽度31‰～32‰，溶解氧>5 mg/L；仿刺參飼養(yǎng)于圓形玻璃鋼桶（直徑65 cm，高65 cm）內(nèi)，16頭/桶，足量投喂，暫養(yǎng)7 d后用于試驗；試驗中連續(xù)充氣，每日吸除糞便，換水50%；隔日倒池，自然光照（室內(nèi)）。

1.3 試驗設(shè)計 試驗分5個處理組，對照組投喂海泥和鼠尾藻粉基礎(chǔ)飼料，微膠囊空白對照組投喂1%空白微膠囊，試驗組按照鼠尾藻粉質(zhì)量的1%、2%、4%進(jìn)行黨參微膠囊添加。設(shè)平行組和重復(fù)試驗。

試驗投喂周期8周，每天下午3∶00進(jìn)行飽食投喂，每天上午9∶00進(jìn)行糞便吸除、換水。

試驗期間第14、28、42、56天取樣，檢測體腔液相關(guān)免疫指標(biāo)及腸道內(nèi)容物消化酶活性。

投喂試驗結(jié)束后進(jìn)行致病菌燦爛弧菌攻毒感染試驗，通過累積死亡率檢測免疫保護(hù)效果。

1.4 試驗方法

1.4.1 體腔細(xì)胞計數(shù) （TCC） 隨機挑取仿刺參，解剖得體腔液，體腔液與抗凝劑（0.02 mol/L EGTA，0.48 mol/L NaCl，0.02 mol/L KCl，0.07 mol/L Tris-HCl，pH 7.6）按體積比為1∶1充分混合，通過血球計數(shù)板進(jìn)行體腔細(xì)胞計數(shù)。然后離心8 min （5000 r/min，4℃），棄上清液，迅速用4℃冰凍的等滲緩沖液（0.001 mol/L EGTA，0.53 mol/L NaCl，0.01 mol/L Tris-HCl，pH 7.6）將體腔細(xì)胞沉淀物濃度調(diào)整到2×106cells/mL，迅速用液氮保存并貯存于-80℃冰箱中用于分析。

1.4.2 體腔細(xì)胞破碎物上清液（CLS）的制備 體腔細(xì)胞樣品于4℃下解凍并加入PMSF（0.1 m mol/L），用超聲波勻漿6 s（輸出22 kHz，0℃），離心8 min（10000 r/min，4℃）。所得上清液（CLS）用于免疫指標(biāo)的測定。

1.4.3 吞噬活性的測定 取100 μL抗凝體腔液加入96孔板中，貼壁 30 min后棄上清液，加入100 μL（0.001 mol/L）中性紅溶液，室溫吞噬30 min，用生理鹽水洗掉未被吞噬的中性紅，加入100 μL細(xì)胞裂解液 （冰醋酸與無水乙醇按1∶1體積比配制），裂解 20 min，測定其在波長540 nm處的吸光值，以試驗條件下每106個體腔細(xì)胞對應(yīng)的吸光值來表示吞噬活性。

1.4.4 呼吸爆發(fā)活性測定 準(zhǔn)確吸取200 μL體腔細(xì)胞懸液，然后加入等體積的2 mg/mL的NBT（溶在含2%NaCl的Tris-HCl中，pH 7.6），室溫下避光反應(yīng)1 h，500 r/min離心5 min，去除上清，用等滲緩沖液洗滌后加入200 μL甲醇，室溫固定10 min，800 r/min離心8 min，去除上清，50%的甲醇洗滌3次，去除上清于室溫下晾干；干燥后加入120 μL KOH（2 mol/L）和140 μL DMSO，充分溶解后測定其在波長620 nm下的吸光值。

1.4.5 酚氧化酶（PO）活性的測定 取50 μL制備的CLS樣品與50 μL胰蛋白酶溶液（0.1 mg/mL）放入96孔板中，充分混勻，室溫下溫育10 min，然后加入50 μL左旋多巴（L-DOPA）溶液（3 mg/mL），室溫下溫育10 min，立刻在495 nm下測定吸光值，以試驗條件下每毫升樣品每分鐘吸光度值每增加0.001定義為一個酶活力單位（U/mL）。

1.4.6 超氧化物歧化酶 （SOD）、酸性磷酸酶（ACP）和一氧化氮合成酶（NOS）活性測定 CLS樣品中SOD、ACP和T-NOS活性使用南京建成試劑盒測定。SOD酶活性單位定義為每毫升樣品在1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)到50%時所對應(yīng)的SOD量為1個酶活性單位，活性表示為U/mL；CLS中ACP酶活性單位定義為每100 mL樣品在30 min產(chǎn)生1 mg酚為1個酶活性單位，活性表示為U/100 mL。T-NOS活性定義為在提供充足的底物的條件下一氧化氮合成酶每分鐘產(chǎn)生1 nmol NO所需要的酶量，活性表示為U/mL。

1.4.7 腸道內(nèi)容物樣品的獲取 隨機挑取仿刺參，在冰盤中取出腸道，稱取0.5 g，加入10倍體積（v/w）的預(yù)冷重蒸水，在冰浴中（0~4℃）組織勻漿5 min，10000 r/min冷凍離心15 min，取上清液測定消化酶活力。

1.4.8 腸道內(nèi)容物上清液蛋白酶活性的測定 福林酚法：試管中加入0.5%的酪蛋白溶液1.0 mL和pH 7.2的磷酸緩沖液2.0 mL，40℃保溫5 min，加入粗酶液0.5 mL，保溫20 min，立即加入10%三氯乙酸1.0 mL終止反應(yīng)。取出常溫離心（3000 r/min）10min后得上清液1mL，加入0.4mol/L的碳酸鈉溶液2.5 mL，再加入1.0 mol/L的福林試劑1.0 mL，于40℃恒溫水浴顯色20 min，然后在680 nm波長下比色測定，對照管在加入粗酶液前加入三氯乙酸使酶失活，其他同測定管。蛋白酶活力單位定義：在pH 7.2和 40℃下保溫20 min，1 g刺參消化道1 min水解酪蛋白產(chǎn)生1 μg酪氨酸即為1個蛋白酶活力單位。

1.4.9 腸道內(nèi)容物上清液淀粉酶活性的測定 淀粉—碘顯色法：向試管中加入0.5%可溶性淀粉5 mL，于37℃水浴中預(yù)熱5 min，加入粗酶液1.0 mL，充分混勻后，37℃水浴反應(yīng)7.5 min，再加入0.01 mol/L碘應(yīng)用液5.0 mL終止反應(yīng)，然后稀釋到50 mL，立即充分混勻后660 nm處比色?？瞻撞患用敢?，其他同測定管。淀粉酶活力定義為：pH 7.0條件下，在 （37±1）℃條件下保溫30 min，100 mL酶液中的淀粉酶完全水解淀粉10 mg為1個淀粉酶活力單位。

1.4.10 腸道內(nèi)容物上清液褐藻酸酶活性的測定3，5-二硝基水楊酸法：用0.2 mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH 5.6）溶解褐藻酸鈉，配成0.5%的溶液作為反應(yīng)底物。取500 μL粗酶液，加入2 mL底物，40℃反應(yīng)1 h后沸水浴5 min終止反應(yīng)，將粗酶液置于沸水浴中滅活5min作為對照。在上述條件下以每分鐘水解褐藻酸鈉釋放出相當(dāng)于1.0 μmol/L葡萄糖含量時所需的酶量為1個酶活力單位U/mL。

1.4.11 攻毒感染試驗 攻毒感染試驗使用的燦爛弧菌由中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所提供，活化后的燦爛弧菌經(jīng)胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）28℃培養(yǎng)24 h，用無菌生理鹽水調(diào)整濃度為108cfu/mL。試驗結(jié)束后，隨機抽取10頭仿刺參進(jìn)行攻毒試驗，每頭仿刺參經(jīng)體壁注射劑量為0.l mL的燦爛弧菌稀釋液2次，對照組注射相同量的生理鹽水，及時記錄仿刺參的日死亡情況，14 d后結(jié)束感染試驗并統(tǒng)計其累積死亡率。計算公式如下：

累積死亡率/%=仿刺參累積死亡數(shù)量/初始數(shù)量×100。

1.5 數(shù)據(jù)處理 試驗數(shù)據(jù)利用軟件SPSS 17.0進(jìn)行單因素方差分析，并進(jìn)行多重比較，顯著性水平為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 黨參對仿刺參體腔細(xì)胞數(shù)量、吞噬活性、呼吸爆發(fā)活性的影響 從圖1a中可以看出，黨參可顯著影響仿刺參體腔細(xì)胞數(shù)量（P＜0.05）。在投喂第28天，2%試驗組仿刺參體腔細(xì)胞數(shù)量達(dá)到最高水平（9.2×106cells/mL），其次是4%試驗組（8.7×106cells/mL）。

圖1b反映的是黨參對仿刺參體腔細(xì)胞吞噬活性的影響。在投喂第28天，2%試驗組仿刺參體腔細(xì)胞吞噬活性達(dá)到最高水平，與對照組比較差異性顯著（P＜0.05）；然而，當(dāng)投喂第56天時，試驗組仿刺參體腔細(xì)胞吞噬活性與對照組之間無顯著差異（P＞0.05）。

從圖1c中可看出，黨參對仿刺參體腔細(xì)胞呼吸爆發(fā)活性同樣產(chǎn)生了影響。投喂第28天，2%試驗組和1%試驗組仿刺參體腔細(xì)胞呼吸爆發(fā)活性達(dá)到相同水平，并且與對照組比較差異顯著（P＜0.05）。在投喂第42天時，4%試驗組仿刺參體腔細(xì)胞呼吸爆發(fā)活性較對照組顯著增強（P＜0.05）。

2.2 黨參對仿刺參CLS中SOD、ACP、NOS、PO活性的影響 從圖1d中得出，投喂第14天時，2%試驗組仿刺參CLS中SOD活性達(dá)到最高水平（67.4 U/mL），與對照組差異顯著（P＜0.05），但其他試驗組之間無顯著性差異（P＞0.05）。

從圖1e中得出，投喂第28天時，2%試驗組仿刺參CLS中ACP活性達(dá)到最高水平 （2.65 U/ 100 mL），與對照組（1.29 U/100 mL）差異顯著（P＜0.05）。4%試驗組仿刺參CLS中ACP活性在投喂第42天達(dá)到最高水平，且時間延長，活性降低。

從圖1f中得出，投喂第28天時，2%試驗組仿刺參CLS中NOS活性水平最高，與對照組及其他試驗組之間都存在顯著性差異（P＜0.05）。投喂第42天時，4%試驗組仿刺參CLS中NOS活性水平最高，與對照組及其他試驗組之間都存在顯性差異（P＜0.05）。

從圖1g中得出，投喂第42天時，2%試驗組仿刺參CLS中PO活性水平最高，與對照組及其他試驗組之間都存在顯著性差異（P＜0.05）；投喂第28天時，4%試驗組仿刺參CLS中PO活性水平最高；投喂第56天時，PO活性有所下降。

2.3 黨參對仿刺參腸道內(nèi)容物蛋白酶、淀粉酶、褐藻酸酶活性的影響 從圖1h中看出，投喂第28天時，2%試驗組仿刺參腸道內(nèi)容物溶液中蛋白酶活力最高，達(dá)到62.8 U/g·min，與對照組和其他試驗組之間存在顯著性差異（P＜0.05）；然而，在投喂第56天時，試驗組仿刺參蛋白酶活性與對照組則無顯著性差異（P＞0.05），表明隨著投喂時間的延長，蛋白酶活性出現(xiàn)下降的趨勢。

圖1i顯示，2%黨參投喂組腸道內(nèi)容物上清液中淀粉酶活力在第28天時，達(dá)到最大，與其他試驗組及對照組之間差異顯著（P＜0.05）；在第42天、第56天時，淀粉酶活力比第28天有所降低，但仍比對照組要高。

從圖1j中得出，2%黨參投喂試驗組腸道內(nèi)容物上清液中褐藻酸酶活力在第28天達(dá)到最大（0.3 U/g·min），與其他試驗組及對照組之間差異顯著（P＜0.05）；而在第42天、56天時，褐藻酸酶活力發(fā)生了下降現(xiàn)象。

2.4 攻毒感染試驗結(jié)果 從表1中可看出，黨參可有效提高仿刺參機體免疫力。經(jīng)燦爛弧菌感染后，2%試驗組仿刺參在攻毒14 d內(nèi)累積死亡率為21.3%，而對照組累積死亡率高達(dá)44.6%，且對照組出現(xiàn)死亡的時間較試驗組早。

表1 燦爛弧菌攻毒后14 d內(nèi)仿刺參累積死亡率（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）

3 討論

3.1 黨參對仿刺參機體免疫功能的影響 免疫增強劑是一類通過不同作用方式提高機體免疫功能的物質(zhì)，可單獨或同時與抗原使用增強機體免疫應(yīng)答。目前，研究使用的免疫增強劑很多（張琴等，2011；王淑嫻等，2010；陳效儒等，2010；樊英等，2010；李繼業(yè)，2008），其對不同動物的作用機理也逐漸被熟悉，主要集中于機體細(xì)胞免疫和體液免疫相關(guān)的免疫因子變化。研究表明，黃芪多糖、茯苓多糖能夠顯著增強仿刺參體腔細(xì)胞免疫活性，并且不同的給予方式可產(chǎn)生不同程度的效果（王淑嫻等，2010；樊英等，2010）。不同的免疫增強劑由于不同的成分結(jié)構(gòu)、作用機理、使用對象及使用方法，產(chǎn)生的作用效果也不同。研究表明，黨參對人或小鼠等動物機體免疫存在著顯著的促進(jìn)作用（樊長征和洪巧瑜，2016；宴永新等，2013）。對于無特異性免疫的仿刺參來說，體腔細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的主要防線之一。本研究結(jié)果表明，黨參對仿刺參體腔細(xì)胞數(shù)量、吞噬活性及呼吸爆發(fā)活性均產(chǎn)生了顯著影響，不同程度地增強了機體抗病力。表明黨參可能作為營養(yǎng)物質(zhì)促進(jìn)了細(xì)胞分裂、增殖，從而提高了體腔細(xì)胞的數(shù)量；然而，體腔細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活性和吞噬活性也被黨參的多種營養(yǎng)成分激活。已有的研究也證實，多糖、維生素、甘草酸等物質(zhì)也可不同程度地促進(jìn)體腔細(xì)胞生物活性（張琴等，2011；陳效儒等，2010；Wang等，2008）。

圖1 黨參對仿刺參免疫和消化功能的影響

體液免疫系統(tǒng)中含有多種免疫酶，也不同程度的影響著機體的免疫功能。SOD是反映抗氧化能力的一個重要指標(biāo)，可間接反映機體抗病力或抗逆境的能力（樊英等，2010；李繼業(yè)，2008）。ACP是非特異性軟體動物體內(nèi)溶酶體的重要標(biāo)志酶。有研究表明，在海參免疫系統(tǒng)中，ACP被證實具有調(diào)理素作用，能誘導(dǎo)阿米巴細(xì)胞對外來物質(zhì)進(jìn)行吞噬和包囊，從而間接反映機體的免疫功能和抵抗外界侵害的能力（孫永欣，2008）。NOS誘導(dǎo)產(chǎn)生的NO能夠與活性氧中間體及硫醇等相互作用產(chǎn)生不同類型的活性氮中間體，從而對病原生物起到殺滅作用。PO是仿刺參體內(nèi)重要的異物識別系統(tǒng)。每當(dāng)入侵的異物將該系統(tǒng)激活后，其中的酚氧化酶就將酚催化成黑色素，黑色素及其中間產(chǎn)物具有抗微生物活性，即將一些病原體殺死（常杰，2010）。本研究結(jié)果表明，黨參能夠明顯促進(jìn)仿刺參CLS中SOD活性，提高機體抗氧化能力，說明黨參中的甙類或膽堿等成分可能與消除氧自由基的作用相關(guān)；ACP活性也表現(xiàn)出顯著的變化，其中以2%試驗組在第28天提高程度最強，且添加量與免疫效果之間呈現(xiàn)不規(guī)律的變化趨勢，當(dāng)添加量為4%時ACP活性反而降低；并且在第42天、56天時活性有所降低，但下降趨勢緩慢，故黨參的添加時間與刺參體腔液ACP活性之間存在一定的相關(guān)性，但長時間添加對機體免疫無利。PO值在投喂42 d后顯著提高，可能原因是酚氧化物酶原遇到復(fù)雜營養(yǎng)生物成分時被細(xì)胞內(nèi)的結(jié)合蛋白識別，激活形成大量的PO。PO系統(tǒng)也體現(xiàn)了機體遇到異物時的免疫反應(yīng)靈敏性和平衡性，機體在充分的反應(yīng)后及時消除異物并能夠恢復(fù)常態(tài)（常杰，2010）。NOS在黨參的作用下加速催化L-精氨酸，在體內(nèi)合成與多種免疫活性有關(guān)的內(nèi)源性NO，通過阻止DNA、蛋白質(zhì)或脂質(zhì)合成而產(chǎn)生抗菌和抗病毒的活性（Howe等，2002；Karu-Piah等，1993）。同時，微膠囊劑型的添加方式很大程度地降低了黨參提取物的水溶率，在之后的推廣示范應(yīng)用中更易形成規(guī)?；?。本試驗中不同的添加量表現(xiàn)了不同的作用效果，其中以2%微膠囊試驗組效果最好，與對照組差異顯著 （P＜0.05），但隨著時間的延長，免疫酶的活性反而降低，表明黨參的作用效果與給予劑量、給予時間之間都存在著明顯的相關(guān)性，且不成正比例關(guān)系，這可能與黨參自身的結(jié)構(gòu)、免疫調(diào)節(jié)機制以及仿刺參機體免疫系統(tǒng)特征有關(guān)。

3.2 黨參對仿刺參腸道消化功能的影響 黨參具有多種營養(yǎng)成分，不僅可提高機體對有害刺激的抵抗能力，增強巨噬細(xì)胞的吞噬能力，還具有調(diào)整胃腸運動功能，在特異性免疫缺乏的情況下能夠有效發(fā)揮其調(diào)節(jié)功能，通過促進(jìn)消化功能間接提高機體抗病力。仿刺參腸道消化酶種類很多，主要是蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶和褐藻酸酶（任慶印，2012；唐黎等，2010）。本試驗結(jié)果表明，仿刺參腸道蛋白酶活性極高，這與袁成玉（2006）、任慶印等（2013）的研究結(jié)果一致，黨參提取物對其表現(xiàn)了明顯的增強作用，其次是淀粉酶活性，可能黨參的不同活性成分顆粒鏈接到不同的細(xì)胞受體上，因其本身的結(jié)構(gòu)特征改變細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和呈遞作用等，促使淀粉酶分泌和表達(dá)，提高了其效果；也可能是投喂黨參后仿刺參腸道微生態(tài)環(huán)境發(fā)生改變，促進(jìn)了細(xì)菌的繁殖代謝，從而增強酶活性，具體機制尚需進(jìn)一步研究。仿刺參腸道中褐藻酸酶活性相對較低，任慶?。?012）研究表明，褐藻酸酶大部分存在于仿刺參前腸，能夠首先分解細(xì)胞壁，保證其他物質(zhì)的繼續(xù)消化，有利于營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。

[1]常杰.對蝦和刺參敏感免疫學(xué)指標(biāo)的篩選和評價：[博士學(xué)位論文][D].青島：中國海洋大學(xué)，2010.

[2]陳效儒，張文兵，麥康森，等.飼料中添加甘草酸對刺參生長、免疫及抗病力的影響[J].水生生物學(xué)報，2010，34（4）：731～738.

[3]樊英，王淑嫻，葉海斌，等.黃芪多糖對仿刺參非特異性免疫功能的影響[J].水產(chǎn)科學(xué)，2010，29（6）：321～324.

[4]樊長征，洪巧瑜.黨參對人體各系統(tǒng)作用的現(xiàn)代藥理研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2016，10：39～43.

[5]孔偉麗.免疫增強劑及疫苗對刺參（Apostichopus japonicus）免疫酶活性及抗病力影響的初步研究：[碩士學(xué)位論文][D].青島：中國海洋大學(xué)，2008.

[6]李繼業(yè).養(yǎng)殖刺參免疫學(xué)特征與病害研究：[博士學(xué)位論文][D].青島：中國海洋大學(xué)，2007.

[7]馬悅欣，徐高蓉，張恩鵬，等.仿刺參幼參急性口圍腫脹癥的細(xì)菌性病原[J].水產(chǎn)學(xué)報，2006，30（3）：377～382.

[8]任慶印.刺參（Apostichopus japonicus）在夏眠過程中生理代謝調(diào)控機制的研究：[碩士學(xué)位論文][D].青島：中國海洋大學(xué)，2012.

[9]任慶印，潘魯青.刺參消化酶性質(zhì)與活性分步的研究[J].海洋湖沼通報，2013，2：51～56.

[10]孫永欣.黃芪多糖促進(jìn)刺參免疫力和生長性能的研究：[博士學(xué)位論文] [D].大連：大連理工大學(xué)，2008.

[11]唐黎，王吉橋，許重，等.仿刺參4種消化酶活力的周年變化[J].上海海洋大學(xué)學(xué)報，2010，19（6）：768～771.

[12]王淑嫻，李天保，樊英，等.茯苓多糖對刺參體腔液中免疫因子活性的影響[J].飼料研究，2010，1：59～61.

[13]晏永新，張麗，賈海芳，等.黨參多糖口服液對小鼠免疫功能的影響[J].中國獸藥雜志，2013，47（3）：18～20.

[14]張春云，王印庚，榮小軍.養(yǎng)殖刺參腐皮綜合癥病原菌的分離與鑒定[J].水產(chǎn)學(xué)報，2006，30（l）：118～123.

[15]袁成玉，張洪，吳垠，等.微生態(tài)制劑對幼刺參生長及消化酶活性的影響[J].水產(chǎn)科學(xué)，2006，25（12）：612～615.

[16]張琴，麥康森，張文兵，等.飼料中添加硒酵母和維生素E對刺參生長、免疫力及抗病力的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報，2011，23（10）：1745～1755.

[17]張琴，麥康森，張文兵，等.飼料中添加硒酵母和維生素E對刺參生長、免疫力及抗病力的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報，2011，23（10）：1745～1755.

[18]Howe D，Barrows L，Lindstrom N，et al.Nitric oxide inhibits Coxjella burnetii rePlieation and ParasitoPhorous vacuole maturation[J].Infeet.Immun，2002，70：5140～5147.

[19]KaruPiah G，Xie Q，Buller R，et al.Inhibition of viral replieation by interferon-γ-induced nitric oxide synthase[J].Seienee，1993，261：1445～1448.

[20]Wang K，Liu Z，Xu Y，et al.Effect of L-ascorbic acid asimmunity enhancer for juvenile sea cucumber，Apostichopus japonicu [J].J Biotechnol，2008，136（1）：556～557.■

The study was conducted to investigate the effect of Codonopsis pilosula（C.pilosula）microcapsules on the immunity，digestion and resistance against Vibrio splendidus infection of Apostichopus japonicus.The basic feed was supplemented with 1%，2%，4%C.pilosula microcapsules on the rate of Sargassum thunbergii.Immune indices and digestive enzymes were tested on the 14th，28th，42thand 56thdays.The results showed that 2%C.pilosula microcapsules could significantly improve the total coelomocytes counts（TCC），phagocytic activity and outbreak of respiratory activity after 28 days （P＜0.05）；Moreover，superoxide dismutase（SOD），acid phosphatase（ACP），nitric oxide synthase（T-NOS）activities in coelomocytes lysate supernatants（CLS）were 67.4 U/mL，2.65 U/100 mL，10.9 U/mL，and its activity were the highest on the 28thday.；but phenoloxidase（PO）activity in the CLS was the highest on the 42thday.Again protease，amylase and alginase activities in intestinal content were 62.8 U/g·min，57.8 U/100 mL，0.3 U/g·min on the 28thday，and its activity were the highest. After feeding for 56 days，sea cucumbers from each treatment were challenged with V.splendidus.Cumulative incidence and mortality of sea cucumbers fed with C.pilosula were found to be lower than that of the control，especially 2%treatment，the mortality rate was only 21.3%.The results indicated that quantitative diet supplemented with C.pilosula stimulated the immunity and digestion of A.japonicus，thus enhanced their resistance against V.splendidus.

immunostimulants；Codonopsis pilosula；Apostichopus japonicus；immunity；digestion；resistance

S816.7

A

1004-3314（2017）07-0020-06

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20170704

海洋公益性行業(yè)科研專項經(jīng)費項目（201305005）

*通訊作者