董偉杰 秦世炳 蘭汀隆 范俊 唐愷 李元 嚴廣璇 王桂榮 黃海榮

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·論著·

Xpert MTB/RIF技術(shù)在骨關(guān)節(jié)結(jié)核臨床診斷中的應(yīng)用研究

董偉杰 秦世炳 蘭汀隆 范俊 唐愷 李元 嚴廣璇 王桂榮 黃海榮

目的 評價利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增檢測技術(shù)(GeneXpert MTB/RIF，簡稱“Xpert技術(shù)”)快速診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核及其耐藥性的臨床應(yīng)用價值。方法 2015年11月至2016年10月連續(xù)收集首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院的272例疑似骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者的病灶標本，每份標本行涂片抗酸桿菌檢查、BACTEC MGIT 960分枝桿菌培養(yǎng)、羅氏培養(yǎng)和Xpert技術(shù)檢測；羅氏培養(yǎng)陽性的結(jié)核分枝桿菌行絕對濃度法藥物敏感性試驗(DST)檢測。以臨床診斷參考標準(CRS)為金標準，評價涂片抗酸桿菌檢查、BACTEC MGIT 960分枝桿菌培養(yǎng)、羅氏培養(yǎng)和Xpert技術(shù)檢測骨關(guān)節(jié)結(jié)核病灶標本中結(jié)核分枝桿菌感染的敏感度和特異度。以DST為金標準，評價Xpert技術(shù)檢測病灶標本中結(jié)核分枝桿菌利福平耐藥性的敏感度和特異度。結(jié)果 以CRS為金標準，涂片抗酸桿菌檢查、BACTEC MGIT 960分枝桿菌培養(yǎng)、羅氏培養(yǎng)和Xpert技術(shù)檢測的敏感度分別為23.90%(60/251)、47.81%(120/251)、25.50%(64/251)和78.09%(196/251)；21例非骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者標本中4種技術(shù)檢測結(jié)果均為陰性。以DST為金標準，17例對利福平耐藥的標本中，Xpert技術(shù)檢測利福平耐藥全部陽性。結(jié)論 Xpert技術(shù)檢測骨關(guān)節(jié)結(jié)核標本中結(jié)核分枝桿菌的敏感度和特異度高，并且可同時檢測結(jié)核分枝桿菌對利福平是否耐藥，值得推薦用于臨床早期診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核。

結(jié)核,骨關(guān)節(jié)； 核酸擴增技術(shù)； 診斷技術(shù)和方法； 抗藥性； 評價研究

在21世紀，結(jié)核病仍然是一個威脅全球公共衛(wèi)生安全的嚴重問題，對結(jié)核病進行及時準確的早期診斷對控制結(jié)核病疫情至關(guān)重要。肺外結(jié)核是指結(jié)核分枝桿菌通過呼吸系統(tǒng)感染而使人患肺結(jié)核，由肺部病變通過血液或淋巴系統(tǒng)播散到人體的各個臟器，發(fā)生在肺部以外任何解剖部位的結(jié)核病。在中國，肺外結(jié)核患者約占全部結(jié)核病患者的10%～20%，骨關(guān)節(jié)結(jié)核約占肺外結(jié)核患者的11.3%～34.5%[1]。骨關(guān)節(jié)結(jié)核病變組織由于處于循環(huán)終末端，病灶中結(jié)核分枝桿菌數(shù)量少，加之脊柱等深部病灶病變組織直接獲取困難，傳統(tǒng)的培養(yǎng)及涂片法面臨陽性率低、時效性差等劣勢，直至目前骨關(guān)節(jié)結(jié)核的早期診斷仍然面臨挑戰(zhàn)。

2010年由美國的Cepheid公司研發(fā)的利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增檢測技術(shù)GeneXpert MTB/RIF(簡稱“Xpert技術(shù)”)問世，并在秘魯、南非、阿塞拜疆及印度的肺結(jié)核多中心試驗中進行了驗證[2]，同年即得到WHO的推薦應(yīng)用于肺結(jié)核的快速診斷[3]。2013年WHO又推薦Xpert技術(shù)應(yīng)用于肺外結(jié)核的診斷，但以淋巴結(jié)結(jié)核、結(jié)核性胸膜炎及結(jié)核性腦膜炎為主[4]。Xpert技術(shù)作為全球第一套全自動一體化半巢式熒光PCR檢測系統(tǒng)，以rpoB基因為靶基因，將PCR檢測的3個步驟(樣品準備、DNA擴增和檢測)集成于一體。該技術(shù)在專有的反應(yīng)盒中完成核酸提取、擴增與熒光檢測，通過檢測rpoB基因是否突變來判斷對利福平是否耐藥，在100 min內(nèi)即可報告結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群是否感染和對利福平的耐藥情況。

由于骨關(guān)節(jié)結(jié)核發(fā)病率低，以脊柱結(jié)核危害最大，標本獲取的便利性和量均受限，Xpert技術(shù)用于骨關(guān)節(jié)結(jié)核臨床診斷中的國內(nèi)國外可借鑒的數(shù)據(jù)較少。為探討Xpert技術(shù)在骨關(guān)節(jié)結(jié)核早期診斷中的可行性，本研究通過對Xpert技術(shù)與羅氏培養(yǎng)及BACTEC MGIT 960檢測結(jié)果的對比，就Xpert技術(shù)的診斷敏感度和特異度進行分析。

對象和方法

一、 研究對象

選取2015年11月至2016年10月期間，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院骨科收治的疑似骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者272例。男137例，女135例；中位年齡為42歲(15～76歲)。根據(jù)臨床診斷標準分為骨關(guān)節(jié)結(jié)核組251例和非骨關(guān)節(jié)結(jié)核組21例。骨關(guān)節(jié)結(jié)核組診斷脊柱結(jié)核者171例，診斷關(guān)節(jié)結(jié)核者80例。所有患者通過手術(shù)或穿刺獲得至少4 ml的膿液或組織標本，然后進行涂片抗酸桿菌檢查、BACTEC MGIT 960、羅氏培養(yǎng)、藥物敏感性試驗(簡稱“藥敏試驗”)和Xpert技術(shù)檢測。

二、 試驗方法

1.標本處理：膿液標本依照N-乙酰-L-半胱氨酸(NALC)-氫氧化鈉法進行標本處理[5]。干酪、肉芽及死骨組織在加入適量磷酸鹽緩沖液后，應(yīng)用微型研磨器Fast-prep-24(美國MP Biomeidcals公司)進行勻漿，之后直接接種[6]。

2.涂片抗酸桿菌檢查：按照文獻[7]中的標準化操作程序執(zhí)行。

3. BACTEC MGIT 960分枝桿菌培養(yǎng)：取2 ml標本用于培養(yǎng)，嚴格按照BACTEC MGIT 960系統(tǒng)操作說明書進行，培養(yǎng)時間設(shè)定為42 d。儀器報告陽性后，取培養(yǎng)液進行涂片鏡檢，若查到抗酸桿菌則為陽性；若未見抗酸桿菌則為陰性。

4.羅氏培養(yǎng)：接種后的改良羅氏培養(yǎng)基置于37 ℃環(huán)境下進行分枝桿菌培養(yǎng)，每周檢查1次細菌的生長狀態(tài)，直至有菌落生長為止。以結(jié)核分枝桿菌標準株H37Rv作為陽性對照，以空白管作為陰性對照[5]。

5.絕對濃度法藥敏試驗：按照中國防癆協(xié)會基礎(chǔ)專業(yè)委員會制定的《結(jié)核病診斷實驗室檢驗規(guī)程》[5]進行。

6. Xpert技術(shù)檢測：按照Xpert MTB/RIF操作說明書進行。取1 ml標本于有螺旋蓋的無菌管中，然后加入2 ml 標本處理液，旋緊管蓋，在渦旋振蕩器上渦旋振蕩10 s，室溫靜置10 min，在渦旋振蕩器上再次渦旋振蕩10 s，室溫靜置5 min，使標本充分液化。吸取2 ml 液化標本至Xpert反應(yīng)試劑盒，然后將反應(yīng)試劑盒放置到檢測模塊，儀器開始進行自動化檢測。反應(yīng)結(jié)束后，在檢測系統(tǒng)窗口下可直接觀察測試結(jié)果。

三、 臨床診斷標準

[8]中關(guān)于骨關(guān)節(jié)結(jié)核診斷的指導(dǎo)意見，本研究臨床診斷為骨關(guān)節(jié)結(jié)核標準為：(1)患者臨床癥狀、體征與影像學(xué)(包括X線攝影、CT及MRI檢查)發(fā)現(xiàn)的局部結(jié)核病的膿腫、死骨表現(xiàn)相符；(2)病灶標本的病理學(xué)提示為干酪樣壞死并為朗罕細胞肉芽腫；(3)病灶標本的微生物學(xué)檢測證實為結(jié)核分枝桿菌感染；(4)規(guī)律抗結(jié)核藥物治療6個月以上，結(jié)核中毒癥狀及局部癥狀消失。以上全部符合診斷為骨關(guān)節(jié)結(jié)核。

四、統(tǒng)計學(xué)分析

采用Excel 2010軟件收集試驗數(shù)據(jù)，應(yīng)用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。以臨床診斷標準作為金標準，計算涂片抗酸桿菌檢查、BACTEC MGIT 960分枝桿菌培養(yǎng)、羅氏培養(yǎng)和Xpert技術(shù)檢測標本中結(jié)核分枝桿菌的敏感度和特異度及95%CI。敏感度=真陽性數(shù)/(真陽性數(shù)+假陰性數(shù))×100%，特異度=真陰性數(shù)/(真陰性數(shù)+假陽性數(shù))×100%。

結(jié) 果

一、 各種方法檢測MTB的比較

細菌學(xué)檢測結(jié)果：272例患者病灶標本中，按照臨床診斷標準分為骨關(guān)節(jié)結(jié)核組251例，非骨關(guān)節(jié)結(jié)核組為21例。涂片抗酸染色檢查陽性60例(23.90%)，95%CI為18.80%～29.70%；陰性21例(100.00%)，95%CI為83.90%～100.00%。BACTEC MGIT 960分枝桿菌培養(yǎng)陽性120例(47.81%)，95%CI為41.50%～54.20%；陰性21例(100.00%)，95%CI為83.90%～100.00%。羅氏培養(yǎng)陽性64例(25.50%)，95%CI為20.20%～31.40%；陰性21例(100.00%)，95%CI為83.90%～100.00%。Xpert技術(shù)檢測陽性為196例(78.09%)，95%CI為72.50%～83.00%，陰性21例(100.00%)，95%CI為83.90%～100.00%(表1)。120例患者的標本進行BACTEC MGIT 960培養(yǎng)陽性者，經(jīng)菌種鑒定均為MTB感染。

表1 各種檢測方法診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核的敏感度和特異度

注 表中括號外數(shù)值為“敏感度(%)”或“特異度(%)”；“敏感度”括號內(nèi)數(shù)值分子為真陽性數(shù)，分母為真陽性數(shù)+假陰性數(shù)；“特異度”括號內(nèi)數(shù)值分子為真陰性數(shù)，分母為真陰性數(shù)+假陽性數(shù)

二、 Xpert技術(shù)與絕對濃度法藥敏試驗檢測利福平耐藥性的比較

羅氏培養(yǎng)陽性的64例患者標本中，9例因標本量未做藥敏試驗，采用絕對濃度法藥敏試驗檢測結(jié)果對利福平耐藥者有17例，證實為MDR-TB者有9例。196例Xpert技術(shù)檢測陽性的患者中，rpoB基因突變的患者有29例。以絕對濃度法藥敏試驗為金標準，檢測結(jié)果對利福平耐藥的17例患者中，Xpert技術(shù)檢測均存在rpoB基因突變。

討 論

一、 Xpert技術(shù)快速檢測對臨床的應(yīng)用價值

抗酸染色涂片、BACTEC MGIT 960液體培養(yǎng)及羅氏培養(yǎng)等傳統(tǒng)技術(shù)診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核的敏感度在本研究中不超過50.00%，抗酸染色涂片結(jié)果回報時間為1～2 d，BACTEC MGIT 960液體培養(yǎng)技術(shù)結(jié)果回報時間為2周左右，羅氏培養(yǎng)結(jié)果回報時間為3～4周，如果加上藥敏試驗，回報時間為6～8周[9]，在科學(xué)技術(shù)不斷進步的現(xiàn)代社會，明顯不能適應(yīng)臨床需求。傳統(tǒng)PCR技術(shù)由于假陽性的問題在21世紀初曾被禁用，隨著2010年Xpert技術(shù)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用，這種半自動的巢式PCR技術(shù)解決了標本處理過程中的污染問題，將核酸擴增、提取及熒光檢測融為一體，大大地提高了生物安全度，同時按照本研究的結(jié)果，在骨關(guān)節(jié)結(jié)核診斷中的敏感度達到驚人的78.09%，將骨關(guān)節(jié)結(jié)核的診治進程大大提前。

Xpert技術(shù)以rpoB基因為靶點，在獲取診斷結(jié)果同時可以探測到基因是否突變，從而可以證實標本是否對利福平耐藥，我國作為全球耐多藥結(jié)核病高負擔(dān)國家，骨關(guān)節(jié)結(jié)核耐藥情況亦不鮮見[10]。如果不能及時發(fā)現(xiàn)耐藥，往往導(dǎo)致病灶清除手術(shù)失敗，出現(xiàn)多次手術(shù)的現(xiàn)象，給患者及社會帶來巨大經(jīng)濟損失。本研究中，傳統(tǒng)羅氏培養(yǎng)在64例陽性患者中，發(fā)現(xiàn)了17例利福平耐藥者；而Xpert技術(shù)在196例患者中發(fā)現(xiàn)了29例患者，不僅將耐藥治療的時間大大提前了4～6周，并且發(fā)現(xiàn)了傳統(tǒng)技術(shù)不能鑒別出來的耐藥患者，保證了治療的成功率，節(jié)省了大量的治療經(jīng)費，帶來了良好的社會效益。

二、Xpert技術(shù)在國內(nèi)骨關(guān)節(jié)結(jié)核領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀

由于骨關(guān)節(jié)結(jié)核所提供的標本為膿液和肉芽組織，與肺結(jié)核患者的痰標本在性質(zhì)方面存在較大差異，因此需針對不同性質(zhì)標本進行預(yù)處理。根據(jù)WHO關(guān)于不同組織的預(yù)處理做出的推薦，使Xpert技術(shù)應(yīng)用在骨關(guān)節(jié)結(jié)核的診斷具有一定的可行性。2013年，WHO推薦Xpert技術(shù)用于診斷肺外結(jié)核。2014年李力韜等[11]采用Xpert技術(shù)對骨關(guān)節(jié)結(jié)核臨床標本進行了結(jié)核分枝桿菌對利福平的耐藥性檢測的驗證性研究，得出的結(jié)論是Xpert技術(shù)能夠同時對骨關(guān)節(jié)結(jié)核標本行結(jié)核分枝桿菌檢測與對利福平的耐藥性檢測，具有很好的臨床應(yīng)用價值，但此研究標本為標本庫的冷凍菌株，不能很好地反映在臨床中的實際應(yīng)用價值。2015年Gu 等[12]驗證了Xpert技術(shù)在骨關(guān)節(jié)結(jié)核的臨床應(yīng)用價值，得出的結(jié)果是Xpert技術(shù)對骨關(guān)節(jié)結(jié)核診斷的敏感度是82.00%，特異度是100.00%，從一定程度上說明Xpert技術(shù)在臨床上用于診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核的可行性。2016年唐愷等[13]在膝關(guān)節(jié)結(jié)核診斷中以臨床診斷為參考標準，應(yīng)用Xpert檢測技術(shù)的敏感度為69.00%，特異度為90.00%。本研究的樣本量為272例，以臨床診斷標準為金標準，骨關(guān)節(jié)結(jié)核組診斷脊柱結(jié)核者171例，診斷關(guān)節(jié)結(jié)核者80例，涵蓋了骨關(guān)節(jié)結(jié)核的所有常見發(fā)病部位，應(yīng)用Xpert技術(shù)檢測的敏感度為78.09%，特異度為100.00%，以更大的樣本量再次證實Xpert技術(shù)在骨關(guān)節(jié)診斷中的必要性和可行性。

三、骨關(guān)節(jié)結(jié)核檢測的金標準選擇及現(xiàn)狀

在肺結(jié)核對Xpert技術(shù)的診斷試驗中，多采用結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)為金標準[2, 9, 14-15]，這與痰液標本的易獲取及含菌量高有很大關(guān)系。

骨關(guān)節(jié)結(jié)核屬于肺外結(jié)核的一種，很多患者從發(fā)病到最終確診往往需要幾個月到幾年的時間，嚴重影響了治療的及時性。隨著影像學(xué)技術(shù)的發(fā)展，尤其是MRI技術(shù)的推廣應(yīng)用，使得骨關(guān)節(jié)結(jié)核診斷所需時間有所提前。但結(jié)核病的細菌學(xué)診斷作為最直接可靠的診斷金標準，由于骨關(guān)節(jié)結(jié)核病灶標本不易獲得及培養(yǎng)陽性率低的原因，使得細菌學(xué)診斷在骨關(guān)節(jié)結(jié)核的診斷中沒能很好地發(fā)揮作用。骨關(guān)節(jié)結(jié)核因為屬于少見疾病，從業(yè)人員少，至今尚未制定出合理的、令人信服的診斷標準，在全國范圍內(nèi)如何科學(xué)合理地推行臨床試驗是一個亟待解決的迫切問題。本研究采用的骨關(guān)節(jié)結(jié)核臨床診斷標準需要符合以下所有4條：(1)患者臨床癥狀、體征與影像學(xué)(包括X線攝影、CT及MRI檢查)發(fā)現(xiàn)的局部結(jié)核病的膿腫、死骨表現(xiàn)相符；(2)病灶標本的病理學(xué)提示為干酪樣壞死并為朗罕細胞肉芽腫；(3)病灶標本的微生物學(xué)檢測證實為結(jié)核分枝桿菌感染；(4)規(guī)律抗結(jié)核藥物治療6個月以上，結(jié)核中毒癥狀及局部癥狀消失。該標準過于嚴苛，目的是為了盡量減少疑似病例，在一個相對理想的環(huán)境下對Xpert技術(shù)進行評價，未來有必要采用相對寬松的標準以檢驗Xpert技術(shù)在真實世界中對骨關(guān)節(jié)結(jié)核的診斷效率。

四、骨關(guān)節(jié)結(jié)核標本的獲取與Xpert技術(shù)的限度

本研究中90%以上的標本為通過手術(shù)獲取，而手術(shù)獲取的標本由于患者在術(shù)前通常進行了抗結(jié)核藥物治療，會影響檢測的敏感度；如何在日后通過穿刺技術(shù)獲得標本，同時減輕病灶負荷是日后發(fā)展的方向。

Xpert技術(shù)要在骨關(guān)節(jié)結(jié)核快速診斷中發(fā)揮作用，也需要與臨床穿刺技術(shù)相結(jié)合，以便在疾病早期獲得有意義的病灶組織標本；尤其是在占骨關(guān)節(jié)結(jié)核發(fā)病率50%以上的脊柱結(jié)核的診斷中，穿刺技術(shù)應(yīng)該得到更多重視。

Xpert技術(shù)在骨關(guān)節(jié)結(jié)核應(yīng)用中受到限制的另外一個因素是標本獲取量的問題。在疾病早期穿刺獲得的標本中，除非患者病灶內(nèi)存在較多膿液，否則無法提供同時滿足病理、傳統(tǒng)培養(yǎng)及Xpert技術(shù)檢測所需的標本量，即使是在開放手術(shù)中所獲得的標本，亦同時面臨這一問題。因為在中國由于老年人骨關(guān)節(jié)結(jié)核發(fā)病呈上升趨勢，但老年患者病灶一般相對較局限，以侵蝕椎間盤及相鄰終板為主，提供病灶標本的量一般不會超過2 ml。因此，未來如何利用少于2 ml的標本來進行分子生物學(xué)檢測仍然是一個亟待解決的問題。

五、Xpert技術(shù)臨床應(yīng)用的性價比

Xpert技術(shù)臨床檢測的費用是涂片及羅氏培養(yǎng)檢測法的2倍，中國是一個發(fā)展中國家，如何在推廣過程中進一步降低價格也是一個非常迫切需要解決的問題。Meyer-Rath等[16]對南非推行Xpert技術(shù)作為常規(guī)手段來檢測結(jié)核病所帶來的醫(yī)療費用的大幅提升進行了初步測算，認為目前要實現(xiàn)這一篩查目標只適合于中等以上發(fā)達國家。由于我國幅員遼闊，各地經(jīng)濟發(fā)展不平衡，在一定程度上制約了Xpert技術(shù)的推廣應(yīng)用。但對于可疑耐藥的患者仍然有必要優(yōu)先進行Xpert技術(shù)的檢測，以對治療方案進行及時調(diào)整，希望日后國家的衛(wèi)生政策能基于此做出相應(yīng)的調(diào)整。

綜上所述，Xpert技術(shù)作為一種全自動的分子生物學(xué)檢測技術(shù)，大大減少了對標本的人工處理步驟，不僅使生物安全度得到大幅提升，保護了實驗室操作人員的健康與安全，而且通過集成一系列模塊與熒光探測技術(shù)，使得結(jié)果獲取時間較液體培養(yǎng)及固體培養(yǎng)由以周計算縮短到以小時計算；在臨床如果能與穿刺技術(shù)結(jié)合，將使骨關(guān)節(jié)結(jié)核的實時快速診斷成為現(xiàn)實。

參 考 文 獻

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(本文編輯：薛愛華)

Study on GeneXpert MTB/RIF for rapid diagnosis of bone and joint tuberculosis and detection of rifampin resistance

DONGWei-jie,QINShi-bing,LANTing-long,FANJun,TANGKai,LIYuan,YANGuang-xuan,WANGGui-rong,HUANGHai-rong.

DepartmentofOrthopedics,BeijingChestHospital,CapitalMedicalUniversity;BeijingBoneandJointTuberculosisDiagnosisandTreatmentCenter,Beijing101149，China

QINShi-bing,Email:qinsb@sina.com

Objective To evaluate the performance of a real-time polymerase-chain reaction (PCR) assay, Xpert MTB/RIF (Xpert), for the rapid diagnosis of bone and joint tuberculosis (BJTB) and the detection of rifampin (RFP) resistance. Methods The specimens were obtained from 272 patients who were suspected to be BJTB when they visited the Beijing Chest Hospital between November 2015 and October 2016. Smear, BACTEC MGIT 960 culture，L?wenstein-Jensen’s solid culture and Xpert were performed for each specimen, and L-J culture based drug susceptibility testing (DST) was conducted for all the recovered isolates. The sensitivity and specificity of Xpert in detectingMycobacteriumtuberculosiswere assessed in comparison to a composite reference standard (CRS). The sensitivity and specificity of Xpert for detection of RFP resistance was assessed in comparison to the DST results. Results The sensitivities of Smear, BACTEC MGIT 960, culture and Xpert were 23.90% (60/251), 47.81% (120/251), 25.50% (64/251) and 78.09% (196/251) respectively. The results of these 4 techniques were negative in 21 non-tuberculosis patients. Seventeen RFP-resistant isolates were identified by culture based DST. Xpert was 100% concordant with MGIT based DST for the detection of RFP resistance. Conclusion With high sensitivity and specificity, and its ability to detect drug resistance simultaneously in less than 2 h, Xpert is feasible and valuable to be recommended as a quick diagnostic tool for BJTB in clinical practice.

Tuberculosis, osteoarticular; Nucleic acid amplification techniques; Diagnostic techniques and methods; Drug resistance; Evaluation study

10.3969/j.issn.1000-6621.2017.04.006

北京市科技計劃課題(D141107005214002)

101149 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院骨科 北京骨關(guān)節(jié)結(jié)核診療中心(董偉杰、 秦世炳、蘭汀隆、范俊、唐愷、李元、嚴廣璇)，北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所 國家結(jié)核病臨床實驗室 北京市耐藥結(jié)核病研究重點實驗室(王桂榮、黃海榮)

秦世炳, Email:qinsb@sina.com

2017-02-28)