李 香 李曉艷 許義紅 孫曉惠 劉 杰 嚴(yán) 銳 田 敏

(黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，貴州 都勻 558003)

野棉花為毛茛科銀蓮花屬植物打破碗花花的根(Anemone hupehensis Lem.)或全草，多年生草本植物，苗藥野棉花又稱米花棍。主要含白頭翁素、多糖等成分，由于采集方便、療效顯著，在貴州黔南苗族聚集區(qū)被廣泛用于腳氣腫痛、風(fēng)濕骨痛、跌打損傷、癰疽腫毒、蜈蚣咬傷等癥候的治療[1]，通過查閱相關(guān)文獻資料，其多糖具有一定生物活性，不同藥用部位多糖比較未見相關(guān)報道。本實驗測其不同部位多糖含量，為其擴大藥用資源研究提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：Cary100型雙光束紫外可見分光光度計(北京安捷倫公司)；AE240型電子天平(瑞士METTLER)；SG-4050C型數(shù)顯水浴鍋(上海碩光公司)；100g手搖式高速中藥粉碎機(DTT-100)；HS10260D型超聲清洗機。

1.2 藥材：野棉花采自貴州省都勻市，經(jīng)黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校魏學(xué)軍教授鑒定為毛茛科銀蓮花屬植物打破碗花花(Anemone hupehensis Lem.)全草。藥材采集后干燥粉碎過篩，備用。

1.3 試劑與試藥：葡萄糖對照品(天津市化學(xué)試劑供銷公司)；濃硫酸(濟南試劑總廠)；苯酚(上海試劑三廠)；所用試劑均為分析純；實驗用水為蒸餾水等。

2 方法與結(jié)果

2.1 葡萄糖對照品溶液的制備：精密稱取干燥于1050C至恒重的葡萄糖對照品10.02mg，于105℃干燥至恒重，置50mL容量瓶中，加蒸餾水溶解稀釋定容至刻度，搖勻，得濃度為0.2004mg·mL-1的葡萄糖對照品溶液。

2.2 苯酚試劑的配制[2]：稱取苯酚約200g，加0.2g碳酸氫鈉和0.3g鋁片，進行蒸餾，收集182℃處餾分。稱取蒸餾苯酚10g，加蒸餾水溶解并稀釋至250mL，搖勻置棕色瓶中避光保存。

2.3 供試品溶液的制備[3-6]：精密稱量0.9218g野棉花根粉末置具塞錐形瓶中，精密加入1mol·L-1NaOH溶液50mL，精密稱定，進行超聲45min，取出放冷稱重，加入同濃度NaOH溶液補足損失的重量，搖勻濾過，精密吸取續(xù)濾液10mL置50mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋定容至刻度，即得試樣溶液。

2.4 測定波長的選擇： 取0.2004mg·mL-1的葡萄糖對照品溶液0.1 mL，置具塞試管中，加入4%的苯酚溶液1.0mL，5.0mL濃硫酸，搖勻放置40 min。蒸餾水同法操作空白對照，在400-700nm波長范圍內(nèi)掃描，取樣品液0.2mL，同法操作。樣品與葡萄糖對照品在488nm波長處有最大吸收，因此選取488nm為該實驗多糖含量測定波長。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 取已配置好的葡萄糖對照品溶液10 mL置容量瓶中，加蒸餾水稀釋制得0.1mg·mL-1葡萄糖對照品溶液。精密吸取該對照品溶液0.1，0．2，0．3，0．4，0．5，0．6，0．7，0．8mL，分別置具塞試管中，加入4%的苯酚溶液1mL，濃硫酸5mL，加蒸餾水補足至8mL刻度，搖勻，放置40min。取蒸餾水2.0mL同法操作空白對照，測定吸光值，以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)(μg·mL-1)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程：A=0.0745C+0.0109，R=0.9996。表明在濃度1.430～10.00μg·mL-1范圍內(nèi)濃度與吸光度有良好線性關(guān)系。

2.6 精密度實驗：精密量取0.5mL樣品溶液，置具塞試管中，加入4%的苯酚溶液1mL，濃硫酸5mL，加蒸餾水補至8mL刻度，搖勻放置40min后測定吸光值，重復(fù)測定6次，RSD=1.01%，結(jié)果表明精密度良好。

2.7 重復(fù)性實驗：精密稱取干燥至恒重野棉花根樣品6份，每份約0.9g，同2.3項下制備供試液，精密吸取該供試液0.5mL，置具塞試管中，加入4%的苯酚溶液1mL，濃硫酸5mL，加蒸餾水補至8mL刻度，搖勻放置40min，測定吸光值。RSD=1.91%,表明儀器重復(fù)性較好。

結(jié)果見表1。

表1 重復(fù)性實驗(n=6)

2.8 穩(wěn)定性實驗：精密稱取干燥至恒重的樣品約0.9g，1份，同2.7項操作，在20，40， 60，80，100,120min，分別測定其吸光度。RSD=0. 28%，結(jié)果表明供試液顯色后2h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 加樣回收率實驗[6]：精密稱定干燥至恒重的樣品約約0.45g，9份，分為3組，依2.3項法制備供試液,分別加入80%，100%，120%葡萄糖對照品溶液，按2.7項操作，依次測定吸光度，計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率實驗(n=9)

注：回收率%=(測得總量-樣品含量)/加樣量×100%。

實驗結(jié)果表明試驗方法可行。

2.10 樣品不同部位多糖含量測定：取干燥至恒重的野棉花不同部位即根、莖、葉約0.9g，每個部位各3份，按“2.3”方法制備供試品溶液，按2.7項操作，依次測定吸光度，結(jié)果見表3。

表3 不同部位野棉花多糖的含量測定結(jié)果(n=9)

3 結(jié)果

野棉花為毛茛科銀蓮花屬植物打破碗花花的根(Anemone hupehensis Lem.)或全草，苗藥亦稱米花棍。主要含白頭翁素、多糖等成分，由于其采集方便、療效顯著，在貴州苗族聚集區(qū)被廣泛應(yīng)用，通過比較不同藥用部位多糖含量，為其下一步藥效學(xué)研究及藥用資源擴大應(yīng)用提供依據(jù)。本實驗采用超聲技術(shù)提取野棉花多糖，測定野棉花不同藥用部位藥多糖的含量。結(jié)果表明野棉花根多糖含量最高，3個不同藥用部位多糖的含量有差異。

[1]邱德文，杜江.中華本草苗藥卷[M].貴陽：貴州科技出版社，2005,12：503-504.

[2] 舒曉燕,劉慧,梁靜,等.川附子粗多糖提取工藝的研究[J].中藥材,2006,29(12): 1349-1352.

[3] 林麗清,黃麗英,鐘添華, 等.金線蓮多糖的分離純化與含量測定[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2007,27(8): 1037-1039.

[4] 張玉萌.紫草多糖的研究概況[J].中國新醫(yī)藥,2004,3(4):54-55.

[5] 李香，彭小冰，汪云偉.黔產(chǎn)不同產(chǎn)地馬齒莧多糖的含量測定[J].黔南民族醫(yī)專學(xué)報, 2013,26(1):6-8.

[6] 李香，彭小冰，汪云偉,等.黔產(chǎn)馬齒莧多糖的含量測定[J].貴州科學(xué),2012,30(5):27-29.