血滯通膠囊與阿托伐他汀鈣聯(lián)合用藥對(duì)ApoE—/—小鼠的調(diào)血脂作用

李欣悅+吳詠梅+梁偉+周雨亭+湯世民+孫桂波+孫曉波

[摘要] 目的 考察血滯通膠囊與阿托伐他汀聯(lián)合用藥對(duì)ApoE-/-小鼠的調(diào)血脂作用。 方法 將125只6周齡雄性ApoE-/-小鼠依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組、ApoE-/-模型組、阿托伐他汀組、血滯通組、血滯通+阿托伐他汀組，每組25只。ApoE-/-模型組和藥物處理組小鼠均給予高脂飼料喂養(yǎng)，空白對(duì)照組小鼠給予普通飼料喂養(yǎng)。藥物處理組小鼠每日灌胃給藥，空白對(duì)照組和ApoE-/-模型組小鼠則灌胃等體積的生理鹽水。給藥2、4、6、8、10周時(shí)分別測(cè)定血清三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平。 結(jié)果 給藥2、4、6、8、10周后，與空白對(duì)照組比較，ApoE-/-模型組小鼠血清中TG、TC、LDL-C均顯著升高（P < 0.05或P < 0.01），HDL-C顯著下降（P < 0.05或P < 0.01）；與模型組比較，血滯通組小鼠血清HDL-C水平顯著升高（P < 0.05或P < 0.01），TG、TC、LDL-C水平降低（P < 0.05或P < 0.01）；與阿托伐他汀組比較，血滯通+阿托伐他汀組HDL-C水平顯著升高（P < 0.05或P < 0.01），TG、TC和LDL-C水平顯著降低（P < 0.05或P < 0.01）。 結(jié)論 血滯通膠囊具有調(diào)血脂作用，且血滯通與阿托伐他汀聯(lián)合應(yīng)用效果優(yōu)于阿托伐他汀單用。

[關(guān)鍵詞] 血滯通；阿托伐他?。桓咧Y；ApoE-/-小鼠

[中圖分類(lèi)號(hào)] R589.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）03（a）-0012-05

Blood lipid regulation effects of Xuezhitong Capsules combined with Atorvastatin in ApoE-/- mice

LI Xinyue1 WU Yongmei1 LIANG Wei2 ZHOU Yuting3 TANG Shimin1 SUN Guibo4 SUN Xiaobo4

1.College of Pharmacy， Changchun University of Chinese Medicine， Jilin Province， Changchun 130117， China； 2.Dongfang Pharmaceutical Co. Ltd.， Jilin Province， Changchun 130103， China； 3.College of Biological Science and Engineering， Beifang University of Nationalities， Ningxia Hui Autonomous Region， Yinchuan 750021， China； 4.Institute of Medicinal Plant Development， Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College， Beijing 100193， China

[Abstract] Objective To study the blood lipid regulation effects of Xuezhitong Capsules combined with Atorvastatin in ApoE-/- mice. Methods One hundred and twenty-five male ApoE-/- mice aged six weeks old were divided into control group， ApoE-/- model group， Atorvastatin group， Xuezhitong group and Xuezhitong+Atorvastatin group by random number table method， with 25 mice in each group. The mice of ApoE-/- model group and drug treatment groups were fed with high fat diet， while the mice of control group were fed with normal diet. The mice of drug treatment groups were given the corresponding drugs， the control group and ApoE-/- model group were given equivalent volume of normal saline. After drug administration for 2， 4， 6， 8， 10 weeks， the levels of serum total cholesterol （TC）， triglyceride （TG）， high density lipoprotein cholesterol （HDL-C） and low density lipoprotein cholesterol （LDL-C） were detected. Results After drug administration for 2， 4， 6， 8， 10 weeks， compared with those of control group， the levels of TG， TC and LDL-C in ApoE-/- model group were increased significantly （P < 0.05 or P < 0.01）， the level of HDL-C was decreased significantly （P < 0.05 or P < 0.01）. Compared with those of model group， the level of HDL-C in Xuezhitong group was increased （P < 0.05 or P < 0.01）， and the levels of TG， TC and LDL-C were decreased significantly （P < 0.05 or P < 0.01）. Compared with those of Atorvastatin group， the level of HDL-C in Xuezhitong+Atorvastatin group was increased significantly （P < 0.05 or P < 0.01）， and the levels of TG， TC and LDL-C were decreased significantly （P < 0.05 or P < 0.01）. Conclusion Xuezhitong can regulate the blood lipid effectively， and the combined effect of Xuezhitong and Atorvastatin is better than that of Atorvastatin alone.

[Key words] Xuezhitong； Atorvastatin； Hyperlipemia； ApoE-/- mice

相關(guān)流行病學(xué)研究顯示，中國(guó)成人血脂異常發(fā)生率約為18.6%[1]，且逐年增高，并呈年輕化趨勢(shì)[2]。高脂血癥是指脂代謝異常，導(dǎo)致血清三酰甘油（TG）和/或總膽固醇（TC）和/或低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平過(guò)高和/或高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平過(guò)低的代謝紊亂性疾病[3]。高脂血癥為常見(jiàn)的多發(fā)性疾病，與糖尿病、肥胖、脂肪肝、高血壓病、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的形成密切相關(guān)[4]，因此高脂血癥的預(yù)防對(duì)控制心腦血管疾病的發(fā)生有重大意義[5]。西藥治療高脂血癥個(gè)體針對(duì)性較差，藥理作用靶點(diǎn)較為單一，治療主要以緩解癥狀為主，需長(zhǎng)期維持治療[6-7]。目前常用的降脂藥物為貝特類(lèi)與他汀類(lèi)藥物，但兩者均具有一定的肝腎毒性[8-9]。調(diào)脂藥物的開(kāi)發(fā)和新靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)已成為全球關(guān)注的熱點(diǎn)，我國(guó)調(diào)脂藥物的市場(chǎng)也以每年10%～30%的速度持續(xù)增長(zhǎng)，特別是中藥市場(chǎng)[10]。血滯通膠囊是以薤白為原料的單方制劑，薤白為百合科蔥屬植物小根蒜Allium macrostemon Bge.或薤Allium chinense G. Don的干燥鱗莖[11]，可通陽(yáng)散結(jié)，行氣導(dǎo)滯?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，薤白可用于預(yù)防及治療心絞痛、心肌梗死、動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病[12]。ApoE-/-小鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)，在數(shù)周內(nèi)可形成高脂血癥的典型病變，可用于防治高脂血癥藥物的篩選。本研究以高脂飼料喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠高脂血癥模型血脂水平變化為考察指標(biāo)，考察血滯通膠囊和阿托伐他汀合用和單用分別對(duì)其的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

6周齡雄性ApoE-/-小鼠125只，體重18～20 g，SPF級(jí)，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司提供，動(dòng)物合格證編號(hào)為SCXK（京）2012-0001。分籠飼養(yǎng)，自由飲水，普通飼料喂養(yǎng)，溫度（24±2）℃，濕度（50±5）%。

1.2 儀器與試劑

AL104-IC電子天平，Mettler Toledo公司；M1000酶標(biāo)儀，Tecan公司。血滯通膠囊（內(nèi)容物為淡棕黃色顆?；蚍勰兴獬?，味微辣，由吉林省東方制藥有限公司，產(chǎn)品批號(hào)：20160402）；阿托伐他汀鈣片（購(gòu)于輝瑞制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：M90502）；小鼠HDL-C酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒（貨號(hào)：EXP210621，批號(hào)：201605）、小鼠LDL-C ELISA試劑盒（貨號(hào)：EXP 210622，批號(hào)：201605）、小鼠TC ELISA試劑盒（貨號(hào)：EXP210602，批號(hào)：201605）、小鼠TG ELISA試劑盒（貨號(hào)：EXP210617，批號(hào)：201605）購(gòu)自北京易科拜德科技有限公司。

1.3 動(dòng)物分組及給藥

125只ApoE-/-小鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為5組，每組25只?？瞻讓?duì)照組：普通飼料喂養(yǎng)；ApoE-/-模型組：高脂飼料喂養(yǎng)；阿托伐他汀組：阿托伐他汀鈣（6 mg/kg）灌胃給藥，給予高脂飼料喂養(yǎng)；血滯通組：血滯通（800 mg/kg）灌胃給藥，給予高脂飼料喂養(yǎng)；血滯通+阿托伐他汀組：阿托伐他汀鈣（6 mg/kg）灌胃給藥，血滯通（800 mg/kg）灌胃給藥，給予高脂飼料喂養(yǎng)。藥物處理組小鼠每日灌胃給藥，空白對(duì)照組和模型組小鼠則灌胃等體積的生理鹽水。

1.4 血脂測(cè)定

于給藥2、4、6、8、10周時(shí)取小鼠（n = 5），禁食12 h，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，ELISA試劑盒測(cè)定血清TG、TC、LDL-C和HDL-C。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

利用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用非配對(duì)的t檢驗(yàn)和One-way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血滯通膠囊給藥2周后各組血脂水平比較

血滯通膠囊給藥2周后，與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠血清中TG、TC、LDL-C均顯著升高（P < 0.05），HDL-C顯著下降（P < 0.05）。見(jiàn)圖1。

2.2 血滯通膠囊給藥4周后各組血脂水平比較

血滯通膠囊給藥4周后，與空白對(duì)照組比較，ApoE-/-模型組小鼠血清中TG、TC、LDL-C均顯著升高（P < 0.05），HDL-C水平顯著下降（P < 0.05）。與血滯通組比較，血滯通+阿托伐他汀組給藥4周TG、TC和LDL-C水平有降低趨勢(shì)，HDL-C水平有升高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)圖2。

2.3 血滯通膠囊給藥6周后各組血脂水平比較

血滯通膠囊給藥6周后，與空白對(duì)照組比較，ApoE-/-模型組小鼠血清中TG、TC、LDL-C均顯著升高（P < 0.05），HDL-C水平顯著下降（P < 0.05）。與ApoE-/-模型組比較，血滯通組可以顯著降低血清中TC、TG、LDL-C的水平（P < 0.01或P < 0.05），顯著升高HDL-C的水平（P < 0.05）；與血滯通組比較，血滯通+阿托伐他汀組能夠顯著降低TG、TC和LDL-C的水平（P < 0.01或P < 0.05），顯著升高HDL-C的水平（P < 0.05）。見(jiàn)圖3。

2.4 血滯通膠囊給藥8周后各組血脂水平比較

血滯通膠囊給藥8周后，與空白對(duì)照組比較，ApoE-/-模型組小鼠血清中TG、TC、LDL-C均顯著升高（P < 0.01），HDL-C水平顯著下降（P < 0.01）。與ApoE-/-模型組比較，血滯通組可以顯著降低血清中TC、TG、LDL-C的水平（P < 0.01），升高HDL-C的水平（P < 0.05）；與血滯通比較，血滯通+阿托伐他汀組給藥8周能夠顯著降低TG、TC和LDL-C的水平（P < 0.01），升高HDL-C的水平（P < 0.05）。見(jiàn)圖4。

2.5 血滯通膠囊給藥10周后各組血脂水平比較

血滯通膠囊給藥10周后，與空白對(duì)照組比較，ApoE-/-模型組小鼠血清中TG、TC、LDL-C均顯著升高（P < 0.01），HDL-C水平顯著下降（P < 0.01）。與ApoE-/-模型組比較，血滯通組可以顯著降低血清中TG、TC、LDL-C的水平（P < 0.01），升高HDL-C的水平（P < 0.05）；與血滯通組比較，血滯通+阿托伐他汀組給藥10周能夠顯著降低TG、TC和LDL-C的水平（P < 0.01），顯著升高HDL-C的水平（P < 0.01）。見(jiàn)圖5。

3 討論

高血脂會(huì)加大血液的黏度，危害冠狀動(dòng)脈，形成粥樣硬化，導(dǎo)致冠心病、心肌梗死、高血壓病、脂肪肝等疾病，TC每增高1 mmol/L，缺血性腦卒中發(fā)病率會(huì)增加20%[13-14]。目前，臨床前高脂血癥動(dòng)物模型的制備方法有先天性、基因缺陷和化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)三種方式[15]。ApoE-/-小鼠目前是國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的研究高脂血癥較好的動(dòng)物模型[16]。本研究采用長(zhǎng)期給予ApoE-/-小鼠高脂飼料建立的高脂血癥模型，形成率高，死亡率低，抵抗力強(qiáng)，與人患病機(jī)制較相似[17-18]。

血滯通膠囊為藥食兩用藥材薤白提取加工而得，采用現(xiàn)代化生產(chǎn)工藝，除藥用輔料外無(wú)任何外源性添加物質(zhì)，是天然的純植物降脂產(chǎn)品。薤白自古作為治療冠心病、心絞痛的經(jīng)典藥物備受推崇。漢代醫(yī)圣張仲景的《傷寒雜病論》中治療冠心病心絞痛的經(jīng)典方劑薤白瓜蔞白酒湯、薤白瓜蔞半夏湯也是現(xiàn)代中醫(yī)都有在使用的方劑，而血滯通膠囊保留其中白酒的作用，采取醇提方式，加大薤白有效成分溶出率，保障臨床效果。臨床除適用于高脂血癥治療外，亦可廣泛用于治療高血脂癥引起的心腦血管疾病。

大量文獻(xiàn)表明，高脂飲食能引起血脂水平及機(jī)體氧化應(yīng)激水平升高，特別是血清TC水平[19-22]。TC和TG是人類(lèi)血脂的主要成分[23]，其血清濃度可作為脂代謝的指標(biāo)。LDL-C是血漿中主要攜帶膽固醇的脂蛋白，易透入動(dòng)脈內(nèi)膜，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成。HDL-C為有效的抗動(dòng)脈粥樣硬化因子，可將外周組織的游離膽固醇轉(zhuǎn)移到肝臟代謝，有利于減少膽固醇在外周組織細(xì)胞中的積聚和對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的廣泛性損害[24-25]。本研究結(jié)果提示，血滯通膠囊能在顯著降低ApoE-/-小鼠高脂模型血清中TC、TG、LDL-C水平的同時(shí)升高HDL-C水平，且具有量效關(guān)系。隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，血滯通的治療效果更穩(wěn)定，血滯通與阿托伐他汀聯(lián)合效果優(yōu)于阿托伐他汀單用。

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