曹春艷，胡正云，陳 博

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院整形外科醫(yī)院，北京 100144)

研究報(bào)告

不同麻醉方法在幼齡貴州小型豬構(gòu)建顱骨缺損模型及修復(fù)術(shù)中麻醉效果的比較

曹春艷，胡正云，陳 博

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院整形外科醫(yī)院，北京 100144)

目的 比較3種麻醉方法在幼齡小型豬構(gòu)建顱骨缺損模型及修復(fù)實(shí)驗(yàn)中的麻醉效果，從而探索簡便、安全、有效的最佳麻醉方案。方法 幼齡貴州小型豬30頭，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組10頭，A組采用咪達(dá)唑侖與氯胺酮組混合液肌內(nèi)注射；B組采用肌內(nèi)注射陸眠寧II注射液麻醉；C組咪達(dá)唑侖聯(lián)合氯胺酮與陸眠寧II復(fù)合肌內(nèi)注射麻醉。比較3組的麻醉顯效時(shí)間、首次麻醉維持時(shí)間、第1次追加藥物麻醉維持時(shí)間、第2次追加藥物麻醉維持時(shí)間、蘇醒時(shí)間、術(shù)中麻藥追加次數(shù)、麻藥累積量、術(shù)后動物不良反應(yīng)及死亡率。結(jié)果 B組顯效時(shí)間長于A、C兩組(P<0.05)；C組首次麻醉維持時(shí)間、第1次追加藥物麻醉維持時(shí)間、第2次追加藥物麻醉維持時(shí)間的時(shí)長明顯大于A、B兩組(P<0.05)；A、C組蘇醒期明顯短于B組(P<0.05)；C組的追加麻藥的次數(shù)、用藥總劑量、術(shù)后不良反應(yīng)率及死亡率明顯低于A、B組(P<0.05)。結(jié)論 咪達(dá)唑侖聯(lián)合氯胺酮與陸眠寧II復(fù)合麻醉是一種操作簡單、麻醉深度可控、安全性高的適于手術(shù)時(shí)間較長的幼齡小型豬外科實(shí)驗(yàn)的的麻醉方法。

咪達(dá)唑侖；氯胺酮； 陸眠寧Ⅱ；幼齡豬； 麻醉

在整形外科與神經(jīng)外科臨床工作中，對于如何修復(fù)兒童顱骨缺損的問題一直是困擾外科醫(yī)師的難題之一，所以建立與臨床較為接近的實(shí)驗(yàn)動物模型就顯得尤為重要。由于小型豬因其解剖生理特征、代謝、疾病的發(fā)生和機(jī)理等方面與人基本相似，越來越被廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)科學(xué)研究[1]。因而幼齡貴州小型豬就作為構(gòu)建顱骨缺損模型及修復(fù)的首選實(shí)驗(yàn)對象。然而完成復(fù)雜的手術(shù)過程，需要有良好的麻醉方法，它不僅是保證手術(shù)成功的前提，也是保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的關(guān)鍵因素之一。目前，大多文獻(xiàn)介紹小型豬的麻醉方法均以成年小型豬較多，而幼齡小型豬的麻醉方法鮮有報(bào)道。作者在本實(shí)驗(yàn)的過程中借鑒成年小型豬的麻醉經(jīng)驗(yàn)，對以往的麻醉方法進(jìn)行改進(jìn)，總結(jié)，摸索出更適于幼齡小型豬的麻醉方法，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

貴州小型豬30頭，3月齡，體質(zhì)量11～13 kg，雌雄各半，單籠飼養(yǎng)，由北京市琉璃河科興實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖中心提供[SCXK(京)2012-0005]。動物實(shí)驗(yàn)在整形外科醫(yī)院研究中心動物室完成[SYXK(京)2015-0009]。

1.2 藥物選擇

鹽酸氯胺酮(福建古田藥業(yè)有限公司，批號：1507293, 2 mL：0.1 g)；陸眠寧Ⅱ注射液(吉林省華牧動物保健品有限公司，批號：獸藥字(2009)070011582，生產(chǎn)批號：140610, 2.0 mL/支)；咪達(dá)唑侖(江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H19990027,生產(chǎn)批號：20130807，1 mL：5 mg)。

1.3 麻醉方法

將30頭幼齡小型豬單籠飼養(yǎng)，術(shù)前觀察1周，健康狀態(tài)無異常，隨機(jī)分為3組，每組10頭，各組月齡及體質(zhì)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)前12 h禁食，麻醉前稱重，阿托品按0.05 mg/kg的劑量術(shù)前30 min肌內(nèi)注射給藥。手術(shù)歷時(shí)(210±5)min。A組(氯胺酮與咪達(dá)唑侖組)，B組(陸眠寧 II組)，C組(氯胺酮/咪達(dá)唑侖與陸眠寧II復(fù)合麻醉組)。A組：采用咪達(dá)唑侖與氯胺酮混合液肌內(nèi)注射，氯胺酮首次給藥劑量為12 mg/kg, 咪達(dá)唑侖給藥劑量為0.35 mg/kg,待動物達(dá)到麻醉狀態(tài)后，將小型豬俯臥位固定于手術(shù)臺上，用靜脈留置針在小型豬的外側(cè)隱靜脈前支或后支靜脈穿刺并固定，建立靜脈通道，給予0.1%氯胺酮持續(xù)靜脈滴注維持麻醉，當(dāng)動物出現(xiàn)痛感時(shí)需立即靜脈注射氯胺酮0.1 mg，直到動物痛感消失。 B組：首次按0.15 mL/kg體質(zhì)量的劑量肌內(nèi)注射陸眠寧II注射液，如20 min后未達(dá)到麻醉狀態(tài)時(shí)，追加0.05 mL/kg體質(zhì)量的藥量，待有效麻醉消失后，麻醉維持藥量為首次劑量的一半。C組：首先將咪達(dá)唑侖與氯胺酮混合液肌內(nèi)注射，誘導(dǎo)劑量同A組。待動物對外界刺激反應(yīng)遲鈍時(shí)，按0.1 mL/kg體質(zhì)量的劑量肌內(nèi)注射陸眠寧II注射液，有效麻醉消失后，按5 mg/kg的氯胺酮與0.05 mL/kg陸眠寧Ⅱ混合液肌內(nèi)注射維持麻醉。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 麻醉顯效時(shí)間：觀察小型豬自肌內(nèi)注射麻醉藥至出現(xiàn)麻醉狀態(tài)的時(shí)間。當(dāng)肌注麻醉藥后幾分鐘就出現(xiàn)睫毛反射和肌張力下降、精神倦怠、步履蹣跚、隨后臥倒，痛覺消失。

1.4.2 麻醉首次維持時(shí)間：動物首次進(jìn)入麻醉狀態(tài)直到術(shù)中動物對切割牽拉出現(xiàn)輕微痛感時(shí)間。在此期間動物呼吸平穩(wěn)，肌肉松弛，手術(shù)切割牽拉無反應(yīng)，痛覺消失。

1.4.3 追加藥物后維持時(shí)間：首次麻醉維持期內(nèi)，當(dāng)動物對切割牽拉出現(xiàn)輕微痛感或躁動時(shí)，追加麻藥的時(shí)間到下一次追加麻藥的時(shí)間。

1.4.4 麻醉蘇醒時(shí)間：動物從開始蘇醒到站立行走的時(shí)間。表現(xiàn)為呼吸加快，睫毛和角膜反射恢復(fù)，掙扎站立直至平穩(wěn)行走。

1.4.5 麻醉效果 ⑴記錄整個(gè)手術(shù)過程中麻藥追加次數(shù)，氯胺酮及陸眠寧II各自總用量。⑵記錄術(shù)后動物的不良反應(yīng)，包括嘔吐、躁動、腹脹、不食等狀況；同時(shí)記錄術(shù)中、術(shù)后及術(shù)后1個(gè)月內(nèi)動物死亡例數(shù)(排除手術(shù)原因)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 麻醉時(shí)間

⑴麻醉誘導(dǎo)期：觀察三種麻醉方法的麻醉起效時(shí)間， B組動物進(jìn)入麻醉狀態(tài)的時(shí)間要明顯慢于A、C兩組，與A、C兩組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),而A、C兩組相比，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；⑵麻醉維持時(shí)間： C組首次麻醉維持時(shí)間(第1次維持時(shí)間)的時(shí)長明顯大于A、B兩組，具有顯著的差異性(P<0.05)。同樣C組第1次追加麻醉藥物麻醉維持時(shí)間(第2次維持時(shí)間)及第二次追加藥物麻醉維持時(shí)間(第3次維持時(shí)間)的時(shí)長同樣明顯長于A、B兩組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；⑶麻醉蘇醒期：數(shù)據(jù)顯示，B組蘇醒期時(shí)長明顯長于A、C兩組，具有顯著地統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而A、C兩組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)。

2.2 麻醉效果

A、B、C 3組的麻醉效果比較而言C組的麻醉效果最好。數(shù)據(jù)顯示， C組的麻藥追加次數(shù)明顯少于A、B兩組，C組0.05)，與C組比較差異顯著(P<0.05)；另外，C組和A組在麻醉期間、術(shù)后及術(shù)后1月內(nèi)未出現(xiàn)動物死亡情況，而B組動物術(shù)后死亡2頭，術(shù)后3天內(nèi)死亡1頭， C組與A、B兩組相比差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表2)。

3 討論

小型豬由于體型小、遺傳穩(wěn)定、 實(shí)驗(yàn)?zāi)褪苄詮?qiáng)，又因其解剖結(jié)構(gòu)和生理特征與人基本相似等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于高血脂、燒傷整形、骨科、 口腔外科等實(shí)驗(yàn)研究，同時(shí)豬也是皮膚和整形外科手術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)模型[1，2]。因此本實(shí)驗(yàn)選用幼齡貴州小型豬作為實(shí)驗(yàn)對象，相對于鼠、兔等小型動物更易耐受較大的外科手術(shù)創(chuàng)傷，能夠最大程度上模擬人體的成骨過程，為進(jìn)一步臨床實(shí)驗(yàn)打下良好基礎(chǔ)。

表1 不同麻醉方法的麻醉時(shí)間比較

注：★與C組比較，P<0.05；▲與B組比較，P<0.05。

Note.★Compared with the group C,P<0.05；▲Compared with the group B,P<0.05.

表2 不同麻醉方法的麻醉效果比較

注：★與C組比較，P<0.05；▲與B組比較，P<0.05。

Note.★Compared with the group C,P<0.05；▲Compared with the group B,P<0.05.

幼齡小型豬雖然體型小，但其麻醉劑量往往大于成年動物劑量，符合大體型動物麻醉劑量的規(guī)律，體重越大單位體重用量可以低于常規(guī)劑量，體重越小單位體重用量可高于常規(guī)劑量，因此麻醉劑量不好掌握。不僅如此，幼齡小型豬的解剖特點(diǎn)和主要臟器功能發(fā)育不全，往往全麻后易出現(xiàn)呼吸和循環(huán)系統(tǒng)的并發(fā)癥，也是術(shù)后死亡的主要原因[3，4]。由此可見，幼齡小型豬麻醉難度大于成年豬，所以建立一種安全可靠的麻醉方法是提高手術(shù)成功率及獲得精準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的有力保障。而麻醉效果如何與麻醉藥的選擇及用量有著直接的關(guān)系，因此選擇合適的麻醉劑及用量非常重要。氯胺酮在動物實(shí)驗(yàn)中為常用麻醉劑，但單一的麻醉往往效果不佳，常須多種藥物復(fù)合麻醉[5-6]。筆者在預(yù)實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)使用氯胺酮對幼齡豬進(jìn)行麻醉，麻醉作用不明顯，動物躁動次數(shù)多，氯胺酮用量大，維持時(shí)間短，麻醉效果差，與趙厚德[7]等報(bào)道相同。而氯胺酮伍用咪達(dá)唑侖復(fù)合麻醉，麻醉效果確實(shí)，同單獨(dú)使用氯胺酮相比其用藥量減少，鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜的作用加強(qiáng)，氯胺酮的作用時(shí)間延長，這與華海音[8]等報(bào)道相一致。但是，復(fù)合麻醉維持時(shí)間雖然比單獨(dú)用氯胺酮時(shí)間長，一般為30 min左右，對于手術(shù)時(shí)間較長的實(shí)驗(yàn)而言，需要多次靜脈追加藥物才能滿足實(shí)驗(yàn)時(shí)間的需求。由于追加藥物的次數(shù)多，氯胺酮的藥物累積量相應(yīng)增加，因而就會導(dǎo)致藥物副作用的發(fā)生率明顯升高，其結(jié)果不僅影響手術(shù)的實(shí)施，而且動物死亡的風(fēng)險(xiǎn)也隨之加大。

陸眠寧II注射液為鹽酸塞拉嗪等藥物經(jīng)優(yōu)選配比組成的新型復(fù)方制劑(不含可做毒品吸食的氯胺酮成分)，是一種α2腎上腺素受體激動劑，通過激活α2腎上腺素能受體來起麻醉作用，具有良好的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜及中樞性肌松作用，是大動物麻醉中常用的麻醉劑。然而單獨(dú)應(yīng)用陸眠寧II對動物進(jìn)行麻醉時(shí)，如果劑量掌握不當(dāng)，就會出現(xiàn)抑制呼吸和心血管功能的現(xiàn)象，由此導(dǎo)致動物死亡的發(fā)生。我們在幼齡小型豬的構(gòu)建顱骨缺損模型及修復(fù)術(shù)過程中發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)應(yīng)用陸眠寧II麻醉時(shí)麻醉深度往往不好掌握，尤其是首次麻醉劑量。因幼齡動物用藥劑量大于成年動物用藥劑量，如果劑量不到位，會出現(xiàn)麻醉不全，體動次數(shù)較多，導(dǎo)致不斷追加麻藥現(xiàn)象，不僅給實(shí)驗(yàn)帶來諸多不便，也會造成麻藥蓄積，由此造成呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的抑制作用，而且還會加大肝臟的負(fù)擔(dān)，對胃腸道也有一定影響，有的動物術(shù)后1～3天都表現(xiàn)出昏昏沉沉，不愛進(jìn)食狀況，同吳曙光等[4]報(bào)道相符。因此不僅給術(shù)后的管理增加難度，也給術(shù)后的后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行帶來困難。除此以外，由于麻藥的蓄積，有的動物出現(xiàn)蘇醒延遲，甚至死亡，其原因可能由于用藥量大對呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)有著抑制作用，從而加大了主要臟器功能發(fā)育不全的幼齡小型豬死亡的風(fēng)險(xiǎn)。因此降低麻醉用藥量對于手術(shù)時(shí)間較長的幼齡小型豬實(shí)驗(yàn)而言尤為重要。

綜上所述，咪達(dá)唑侖、氯胺酮和陸眠寧II三者復(fù)合全身麻醉是一種操作簡單、麻醉時(shí)間較長、麻醉維持平穩(wěn)、麻醉深度可控、安全性高的適于手術(shù)時(shí)間較長的幼齡貴州小型豬外科實(shí)驗(yàn)的麻醉方法，值得在動物麻醉領(lǐng)域推廣。

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Comparison of three anesthetic procedures during the establishment of and recovery effect on adolescent Guizhou minipig models of skull defect

CAO Chun-yan, HU Zheng-yun, CHEN Bo

(Plastic Surgery Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100144, China)

Objective We compared the effect of three anesthetic procedures on the establishment of and recovery effect on the young minipig models of skull defect, and explore an optimal anesthetic procedure for long-lasting surgical experiment in minipigs. Methods Thirty 3-month old Guizhou minipigs (male∶female=1∶1) were randomly divided into three groups, 10 in each group. The group A was given with midazolam and ketamine i.p., the group B received lumianning II i.p., and the group C received midazolam combined with ketamine and lumianning II i.p. The induction time of anesthesia, the first anesthesia maintenance time, the first anesthesia maintenance period after additional use of anesthetics, the second time anesthesia maintenance period after additional use of anesthetics, the recovery period, the number of times of additional intraoperative use of anesthetics, cumulative amount of anesthetics used, and the adverse reaction and mortality rates of the animals after anesthesia were observed and analyzed. Results The anesthesia induction time in the group B was significantly longer than that in the groups A and C (P<0.05 for both). The anesthesia maintenance time and the anesthesia maintenance after first and second additional use of anesthetics in the groups A were significantly longer than those of the groups A and B (P<0.05 for both). The recovery periods in groups A and C were shorter than that of the group B (P<0.05 for both). The number of times of additional intraoperative use of anesthetics, the total dose of anesthetics, the adverse reaction and mortality rates in the group C were significantly lower than those of the groups A and B (P<0.05 for both). Conclusions The combination of midazolam with ketamine and lumianning II is a simple, easy to control the anesthesia depth, and a safe method to anesthetize young minipigs in long-lasting surgical experiment.

Midazolam；Ketamine；Lumianning II；Adolescent minipigs；Anesthesia

國家自然科學(xué)基金(編號：31300807)。

曹春艷(1965-)，女，研究方向：醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物學(xué)。E-mail：caochunyanaa@163.com。

陳博(1986-)，男，研究方向：整形外科。E-mail：chenboys@hotmail.com。

R-33

A

1671-7856(2017) 04-0041-05

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.04.007

2016-10-12