苦參堿注射液中間體熱原內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)研究建立

曹 云，孫利明

（正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司 江蘇 連云港 222000）

苦參堿注射液中間體熱原內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)研究建立

曹 云，孫利明

（正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司 江蘇 連云港 222000）

目的對(duì)苦參堿注射液進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素研究，建立對(duì)苦參堿注射液中間體熱原的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。方法按照《中國(guó)藥典》2015年版第三部通則1143進(jìn)行。結(jié)果建立了苦參堿注射液中間體內(nèi)控指標(biāo)：即將樣品按《中國(guó)藥典》2015年版第三部通則1143細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法測(cè)定，應(yīng)符合規(guī)定。結(jié)論苦參堿注射液生產(chǎn)中可采用此指標(biāo)進(jìn)行內(nèi)控細(xì)菌內(nèi)毒素。

苦參堿；細(xì)菌內(nèi)毒素；中間體；內(nèi)控指標(biāo)

苦參堿注射液目前應(yīng)用廣泛，臨床主要使用于治療慢性肝炎患者，臨床療效確切，配合抗病毒藥物同時(shí)使用效果更好，同時(shí)還有一定的升白效果，市場(chǎng)前景較好。當(dāng)下SFDA標(biāo)準(zhǔn)YBH06592006之規(guī)定注射液需檢查熱原，目前的家兔法檢測(cè)準(zhǔn)確度較高，但操作不便，無(wú)法快速得到檢測(cè)結(jié)果，無(wú)法對(duì)中間體的質(zhì)量進(jìn)行控制。本文研究了用細(xì)菌內(nèi)毒素法對(duì)苦參堿注射液中間體進(jìn)行質(zhì)量控制，用細(xì)菌內(nèi)毒素法替代熱原檢測(cè)，取得了較好的結(jié)果。

1 試驗(yàn)材料及儀器

1.1 苦參堿注射液

規(guī)格：250 mL：苦參堿0.15 g與葡萄糖12.5 g，批號(hào)：150727220，150727120，150728220，150728120，160219220，160219120，160218220，160218120。

來(lái)源：本公司

1.2 細(xì)菌內(nèi)毒素材料

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品：80 EU/支，批號(hào)150601，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究所。

鱟試劑：①λ為0.125 Eu/mL，批號(hào)：16062612，購(gòu)自福州新北生化工業(yè)有限公司。

②λ為0.125 Eu/mL，批號(hào)：1606272，購(gòu)自湛江安度斯生物有限公司。

BET水：5 mL/支，批號(hào)：1610170，購(gòu)自湛江安度斯生物有限公司。

1.3 儀器

名稱 型號(hào) 廠家電熱恒溫干燥箱 GZX-DH-50×55 武漢亞華電熱恒溫水浴鍋 H.S.G 20-4 上海析達(dá)儀器有限公司凈化工作臺(tái) 蘇州佳寶凈化

所用玻璃器皿需在250℃干燥2 h處理，并避免熱源污染。

1.4 供試品溶液配置

將苦參堿注射液配置成pH值為7左右的供試品溶液，按照不同批號(hào)保存。

將苦參堿注射液中間體配置成pH值為7左右的供試品溶液，按照不同批號(hào)保存。

2 試驗(yàn)方法

2.1 苦參堿注射液細(xì)菌內(nèi)毒素限值

根據(jù)通則1143中注射劑規(guī)定K=5 EU/（kg·h）。從苦參堿注射液的使用說(shuō)明書可知[2]，本品用于靜脈滴注時(shí)，一次0.15 g，一日1次。按1h輸注完成，則每小時(shí)劑量不超過(guò)150 mg。故M=2.5 mg/（kg·h）。（詳見2015年藥典第三部通則1143）[1]

本品的L=K/M=2.0 EU/mg。

2.2 樣品最大有效稀釋倍數(shù)

最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）（詳見2015年藥典第三部通則1143）[1]

由L值可求得最大有效稀釋倍數(shù)。本品的MVD=0.6×2/0.125=9.6。

2.3 鱟試劑靈敏度復(fù)核

按《中國(guó)藥典》2015年版第三部通則1143[1]細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法項(xiàng)下“鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)”方法檢測(cè)，可用于試驗(yàn)。

2.4 實(shí)驗(yàn)步驟及樣品測(cè)定結(jié)果

取內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品一支，搖晃樣品后，用切樣器在玻璃器皿頸部輕輕切割，用醫(yī)用酒精消毒后掰開頸口，應(yīng)注意盡量避免有玻璃碎屑進(jìn)入瓶中。再計(jì)入定量專用檢測(cè)用水溶解，溶解過(guò)程中應(yīng)注意避免有氣泡產(chǎn)生用封口膜封口后放置于混合器上混合溶解20分鐘?；旌辖Y(jié)束后進(jìn)行樣品稀釋步驟，應(yīng)保證每稀釋一步必須在混合器上混合60秒，由此可得細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，計(jì)2.0 λ，1.0 λ，0.5 λ，0.25 λ[3]。

取鱟試劑樣品，輕輕震蕩后，用切樣器在玻璃器皿頸部輕輕切割，用醫(yī)用酒精消毒后掰開頸口，應(yīng)注意盡量避免有玻璃碎屑進(jìn)入瓶中。再計(jì)入定量專用檢測(cè)用水溶解，溶解過(guò)程中應(yīng)注意避免有氣泡產(chǎn)生，然后將其分裝到凝集管中待用。

取配置好的鱟試劑，加入分別加入供試品稀釋溶液、陽(yáng)性對(duì)照溶液以及檢查用水作為陰性對(duì)照管。鱟試劑以及相關(guān)溶液混勻后，用封口膜封口，并垂直放入37度的恒溫器中，保溫60分鐘后取出，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，記錄陽(yáng)性與陰性結(jié)果，并注意取出過(guò)程中應(yīng)避免震動(dòng)。

將家兔法檢查合格的150727220批樣品和家兔法檢查不合格的150727120批樣品，分別按《中國(guó)藥典》2015年版第三部通則1143[1]測(cè)定，結(jié)果如表1。

2.5 內(nèi)控指標(biāo)的建立

綜上所訴，通過(guò)鱟試劑靈敏度試驗(yàn)及樣品測(cè)定，說(shuō)明細(xì)菌內(nèi)毒素法能夠應(yīng)用于對(duì)苦參堿注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定，并且與家兔法測(cè)定的熱原結(jié)果一致，完全能替代熱原法對(duì)苦參堿注射液的中間體進(jìn)行控制。

公司嚴(yán)格把控苦參堿注射液的質(zhì)量，根據(jù)規(guī)定，公司SOP內(nèi)控指標(biāo)定為：樣品按《中國(guó)藥典》2015年版第三部通則1143[1]細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法測(cè)定，每1 mg苦參堿中間體所含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.5 EU。

2.6 中間體監(jiān)控

實(shí)驗(yàn)列舉了6批苦參堿注射液中間體采用細(xì)菌內(nèi)毒素法檢測(cè)，而后苦參堿注射液成品則進(jìn)行家兔法檢測(cè)[4]，結(jié)果見表2。兩個(gè)方法的檢測(cè)結(jié)果完全一致，說(shuō)明細(xì)菌內(nèi)毒素法完全適用于對(duì)中間體的質(zhì)量監(jiān)控，而且能保證最終成品的質(zhì)量。

表1 150727220，150727120批樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果

表2 生產(chǎn)樣品測(cè)定結(jié)果

3 討 論

經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，內(nèi)毒素檢測(cè)的方法完全可以替代之前的熱源加測(cè)，可以歸納到SOP操作流程中，即將內(nèi)控指標(biāo)定為：樣品按《中國(guó)藥典》2015年版第三部通則1143[1]細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法測(cè)定，每1 mg苦參堿含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.5 EU。將此檢測(cè)方法應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)，則可以滿足苦參堿注射液中間體質(zhì)量控制的要求，并且可以保證苦參堿注射液成品的質(zhì)量。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].二部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2015:1143.

[2] 苦參堿注射液說(shuō)明書.正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司,批準(zhǔn)文號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字:H20030210

[3] 吳 楊,趙云燕.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的應(yīng)用進(jìn)展.安徽醫(yī)藥,2004,8(3):226-228.

[4] 陶勝源,狄亞敏,宋金斗.動(dòng)態(tài)濁度法檢測(cè)苦參堿葡萄糖注射液中細(xì)菌內(nèi)毒素《中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志》,2002,22(10):637-637.

本文編輯：王雨辰

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ISSN.2095-8242.2017.08.1567.02