三陰性乳腺癌與LuminalA型乳腺癌血清中microRNA—21與microRNAlet—7a的表達分析

陳彥彬

【摘要】 目的 分析三陰性乳腺癌與LuminalA型乳腺癌血清中microRNA-21與microRNAlet-7a的表達。方法 40例女性乳腺癌患者， 其中20例三陰性乳腺癌患者作為觀察組， 另20例LuminalA型乳腺癌患者作為對照組， 另選取同時期體檢結果健康的20例女性作為健康組。檢測三組血清中的miRNA-21與microRNAlet-7a表達水平。結果 觀察組血清的microRNA-21水平分別高于對照組和健康組（P<0.05）。

觀察組、對照組與健康組血清中的microRNAlet-7a表達水平分別為（0.06±0.03）、（0.09±0.07）、（0.14±0.13）， 觀察組血清中的microRNAlet-7a表達水平低于健康組（P<0.05）。觀察組Ⅰ期microRNA-21的表達量明顯低于Ⅱ～Ⅲ期的表達量， 差異具有統計學意義（P<0.05）。結論 microRNA-21與microRNAlet-7a的表達水平可作為三陰性乳腺癌特異性治療的候選靶點。

【關鍵詞】 三陰性乳腺癌；LuminalA型乳腺癌；microRNA-21；microRNAlet-7a

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.31.020

乳腺癌是乳腺上皮細胞在多種致癌因子的作用下發(fā)生基因突變， 使細胞增生失去控制， 出現無限制的惡性增生， 是威脅女性健康的常見惡性腫瘤[1]。本次作者以三陰性乳腺癌與LuminalA型乳腺癌為例， 分析這兩種乳腺癌在血清中microRNA-21與microRNAlet-7a的表達水平， 將結果報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2015～2016年收治的40例女性乳腺癌患者， 其中20例三陰性乳腺癌患者作為觀察組， 另20例

LuminalA型乳腺癌患者作為對照組， 另選取同時期體檢結果健康的20例女性作為健康組。觀察組年齡25～68歲， 平均年齡（45.2±8.5）歲。對照組年齡24～69歲， 平均年齡（46.0±

8.0）歲。健康組年齡24～68歲， 平均年齡（45.5±8.0）歲。觀察組患者雌激素受體[ER]（-）、孕激素受體[PR]（-）、人類表皮生長因子受體[HER-2]（-）。對照組患者ER（+）、PR（+）、HER-2（-）。排除妊娠、感染、嚴重肝腎功能不全者， 排除糖尿病、心血管疾病等并發(fā)癥及合并其他腫瘤患者。三組受檢者對于本研究均知情且簽署知情同意書。三組受檢者一般資料比較， 差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 收集三組受檢者5 ml靜脈血， 離心后取上層血清250 μl， 予以Trizol LS（Invitrogen）混勻后進行溫室裂解， 使用RNA（QiaGen miReasy Mini Kit）提取試劑盒常規(guī)提取RNA， 并置于零下20℃保存， 使用反轉錄試劑盒（U6 snRA， PCR primer set， has-miR-21， LNATM PCR primer set）， 實時熒光定量PCR試劑盒（Roche公司）進行逆轉反錄， 逆轉錄反應體系參照Clontech2641A， qRT-PCR， 反應體系參照Takara RR820a， 95℃ 5 s， 60℃ 6 s， 40個循環(huán)， 引物序列：

hsa-miR-21（5-CGGCGTAGCTTATCAGACTGATG-3）；hsa-let-7a

（5-GCCGGTGAGGTAGTAGGTTGTATAG-3）；內參：hsa-miR-1610（5-TAGCAGCACTAAA TATTGGCG-3）。

1. 3 統計學方法 采用SPSS20.0統計學軟件進行數據統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；不符合正態(tài)分布選擇秩次非參數檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 三組microRNA-21與microRNAlet-7a的表達水平比較 觀察組、對照組與健康組血清中的microRNA-21表達水平分別為（1.23±0.65）、（0.75±0.50）、（0.40±0.30）， 觀察組血清的microRNA-21水平分別高于對照組和健康組（t=2.618、5.185，

P=0.000<0.05）。觀察組、對照組與健康組血清中的microRNAlet-7a表達水平分別為（0.06±0.03）、（0.09±0.07）、（0.14±0.13）， 觀察組血清中的microRNAlet-7a表達水平低于健康組（t=-2.682， P=0.000<0.05）；觀察組與對照組的microRNAlet-7a表達水平比較差異無統計學意義（t=1.053， P=0.356>0.05）。

2. 2 觀察組和對照組在年齡、TNM腫瘤臨床分期、淋巴結轉移中microRNA-21的表達量比較 觀察組中microRNA-21

Ⅰ期的表達量為（0.50±0.20）， 低于Ⅱ～Ⅲ期的（1.65±0.56）（t=-8.649， P=0.00<0.05）。觀察組血清中microRNA-21的表達增高與臨床分期呈正相關；觀察組microRNA-21在<45歲患者中表達量為（1.15±0.52）， 與≥45歲患者的（1.21±0.60）比較差異無統計學意義（t=-0.351， P=0.813>0.05）；觀察組microRNA-21淋巴結轉移N1～3的表達量為（0.82±0.40）， 與N0的（1.01±0.50）比較差異無統計學意義（t=1.178， P=0.222>0.05）。對照組microRNA-21Ⅰ期表達量為（0.55±

0.18），與Ⅱ～Ⅲ期的（0.58±0.20）比較差異無統計學意義（t=0.241， P=1.352>0.05）。對照組microRNA-21在年齡≥45歲

患者中的表達量為（0.60±0.22），與<45歲的（0.65±0.25）比較

差異無統計學意義（t=2.010， P=0.351>0.05）。對照組microRNA-21淋巴結轉移N1～3的表達量為（0.58±0.38）， 與N0的（0.62±

0.45）比較差異無統計學意義（t=2.310， P=0.301>0.05）。

3 討論

乳腺癌作為女性最常見的惡性腫瘤， 在臨床中具有較高的發(fā)病率， 成為對女性健康威脅最大的疾病之一。隨著醫(yī)學技術的發(fā)展進步， 基因分子水平檢測方法的提高， 臨床對于乳腺癌發(fā)病機制的研究也取得了一定的進展。乳腺癌在臨床主要分為LuminalA型、LuminalB型、HER-2過表達和三陰性4種亞型， 不同的類型乳腺癌的治療手段不同。三陰性乳腺癌以發(fā)病年輕、轉移快、復發(fā)率高為主要臨床特點， 且該型在治療方面缺乏特異性， 治療預后差。而LuminalA型乳腺癌與三陰性乳腺癌相比治療的預后效果好。

隨著研究發(fā)現miR是由2個核苷酸組成的非編碼小RNA， 可與靶mRNA的3端非法醫(yī)區(qū)（3untranalated regions， UTRs）進行序列特異性結合， 從而抑制據銀的轉錄后表達， 可調控約60%的蛋白表達， 在乳腺癌患者中一些miRs的表達呈特異性[2]， miR-21與調控Bcl等的癌基因有關， 在腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。microRNAlet-7a可通過下調原癌基因RAS/c-MYC和HMGA-2的蛋白表達而抑制腫瘤細胞的增殖， 對癌細胞的基因有抑制作用， microRNAlet-7a表達水平與腫瘤的代謝、乳腺癌患者的生存時間有關[3]。

在作者的研究中， microRNA-21在觀察組中的表達量明顯高于對照組和健康組（P<0.05）， 說明microRNA-21與臨床分期晚、短期生存率低等呈正相關。而microRNAlet-7a在觀察組中表達量顯著低于健康組（P<0.05）， 說明microRNAlet-7a對乳腺癌細胞的增殖有一定抑制作用。在病理資料方面觀察組中microRNA-21Ⅰ期的表達量明顯低于Ⅱ～Ⅲ期的表達量（P<0.05）， 說明microRNA-21的表達與淋巴結轉移有關， 分期越晚， microRNA-21的表達量就越高。

綜上所述， microRNA-21與microRNAlet-7a的表達水平可作為三陰性乳腺癌特異性治療的候選靶點。

參考文獻

[1] 何佩娜， 竇拉加， 盛撿云. microRNA-21在乳腺浸潤性導管癌患者血清中的表達及臨床意義.醫(yī)學研究雜志， 2014， 43（6）：97-100.

[2] 王雷， 馬菲. microRNA在三陰型乳腺癌中的研究進展.中國普通外科雜志， 2013， 22（11）：1490-1494.

[3] 曾梓涵， 趙枚， 彭華， 等. microRNA-21、microRNAlet-7a在三陰性乳腺癌與LuminalA型乳腺癌血清中的表達差異.實用醫(yī)學雜志， 2015， 31（21）：3499-3502.

[收稿日期：2016-8-16]