結(jié)腸腺瘤癌變過程中MTA1、RECK的表達(dá)及意義

陳現(xiàn)亮，吳義娟，呂 卓，趙慧敏，韓寶娟

·短篇論著·

結(jié)腸腺瘤癌變過程中MTA1、RECK的表達(dá)及意義

陳現(xiàn)亮，吳義娟，呂 卓，趙慧敏，韓寶娟

目的 分析MTA1、RECK在結(jié)腸腺瘤及結(jié)腸癌組織中的表達(dá)，探討MTA1、RECK在結(jié)腸腺瘤癌變過程中的作用。方法 應(yīng)用免疫組化SABC法檢測(cè)104例結(jié)腸癌組織、114例結(jié)腸腺瘤組織、30例正常結(jié)腸組織中MTA1、RECK蛋白表達(dá)，并復(fù)習(xí)相關(guān)文獻(xiàn)。結(jié)果 正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌組織中MTA1的陽性率呈逐漸增高趨勢(shì)(P<0.05)；結(jié)腸腺瘤(中重度異型增生)組中MTA1的陽性率高于結(jié)腸腺瘤(輕度異型增生)組(P<0.05)；MTA1在結(jié)腸癌中的陽性率隨腫瘤臨床Dukes分期的提高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度的降低而升高(P<0.05)。RECK在正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、結(jié)腸癌組中的陽性率分別為100%、78.57%、77.27%、53.85%；正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌組中RECK的陽性率呈逐漸降低趨勢(shì)；中重度異型增生結(jié)腸腺瘤組中RECK的陽性率明顯低于輕度異型增生結(jié)腸腺瘤組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；RECK在結(jié)腸癌中的陽性率隨腫瘤臨床Dukes分期的提高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度的降低而降低(P<0.05)。結(jié)論 結(jié)腸癌組織中MTA1呈高表達(dá)，RECK表達(dá)缺失。MTA1、RECK參與正常組織、癌前病變、癌組織的發(fā)生、發(fā)展，在結(jié)腸腺瘤的癌變過程中起著重要作用。

結(jié)腸腫瘤；結(jié)腸癌；結(jié)腸腺瘤；MTA1；RECK

結(jié)腸腺瘤是一種結(jié)腸良性腫瘤，被認(rèn)為是結(jié)腸癌的癌前病變，腺瘤的病理類型與腺瘤惡變密切相關(guān)，積極診斷和治療結(jié)腸腺瘤是控制、減少結(jié)腸癌發(fā)病的重要途徑。但目前有關(guān)結(jié)腸腺瘤癌變的機(jī)制研究較少，且其具體機(jī)制尚不明確[1-2]。近年來許多研究結(jié)果顯示MTA1、RECK與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3-5]。因此研究結(jié)腸癌的早期腫瘤標(biāo)志物成為熱點(diǎn)，這些研究將有助于對(duì)結(jié)腸癌的早期臨床診斷、預(yù)后評(píng)價(jià)并且為進(jìn)一步探討結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制提供依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化法對(duì)不同病理類型結(jié)腸腺瘤及結(jié)腸癌中MTA1、RECK的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，探討其在結(jié)腸腺瘤癌變過程中的作用，對(duì)預(yù)測(cè)結(jié)腸腺瘤的癌變可能性及化學(xué)干預(yù)有重要意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集2010～2015年邢臺(tái)市人民醫(yī)院腫瘤外科手術(shù)切除的104例結(jié)腸腺癌標(biāo)本，由兩位高年資病理科醫(yī)師嚴(yán)格按WHO(2000)消化系統(tǒng)腫瘤標(biāo)準(zhǔn)明確診斷，并根據(jù)其制定的病理標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)。全部病例術(shù)前均未行化療或放療。患者年齡31～83歲，男性79例，女性25例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者60例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者44例，按Dukes分期中國改良法分期標(biāo)準(zhǔn)：A+B期44例，C+D期60例；并按WHO(2000)結(jié)直腸癌組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)：高+中分化80例，低分化24例。腸鏡活檢及切除結(jié)腸腺瘤標(biāo)本114例，年齡28～74歲，其中男性82例，女性32例，結(jié)直腸腺瘤組依據(jù)其伴上皮內(nèi)病變的程度分為輕度異型增生組82例、中重度異型增生組32例，根據(jù)其組織學(xué)類型分為管狀腺瘤70例、絨毛狀腺瘤44例。正常結(jié)腸組織30例，年齡24～70歲，男性18例，女性12例。

1.2 方法 免疫組化染色按SABC試劑盒操作說明書進(jìn)行。鼠抗人MTA1單克隆抗體(1C3)購自美國Santa Cruz公司，工作濃度為1 ∶100。羊抗鼠辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗；兔抗人RECK單克隆抗體(D8C7)購自福州邁新公司，工作濃度為即用型；防脫片劑APES及DAB顯色劑均購自北京中杉金橋公司；以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知陽性切片作為陽性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷 MTA1蛋白定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒為陽性；RECK蛋白定位于胞質(zhì)或胞核呈棕黃色著色為陽性。結(jié)果判定：所有病理染色標(biāo)本均由兩名病理醫(yī)師判斷，判斷標(biāo)準(zhǔn)：染色強(qiáng)度按棕色深淺可分為0分、1分、2分及3分，按陽性細(xì)胞比例范圍分為(0)0分、(0～30%)1分、(30%～60%)2分和(>60%)3分；最后將兩項(xiàng)得分結(jié)果相加：0～2分為陰性，3～6分為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)應(yīng)用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MTA1、RECK在不同結(jié)腸組織中的表達(dá) MTA1在正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、結(jié)腸癌組織中的陽性率分別為6.67%、42.85%、63.64%、84.61%(圖1)。MTA1在結(jié)腸癌與絨毛狀腺瘤間的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在絨毛狀腺瘤與管狀腺瘤間的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在管狀腺瘤與正常結(jié)腸組織間的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，由此可見MTA1在正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌中的陽性率呈逐漸增高趨勢(shì)(表1)。RECK在正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、結(jié)腸癌組中的陽性率分別為100%、78.57%、77.27%、53.85%(圖2)。RECK在結(jié)腸癌與絨毛狀腺瘤間的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在絨毛狀腺瘤與管狀腺瘤間的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在管狀腺瘤與正常結(jié)腸組織間的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，由此可見RECK在正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌中的陽性率呈逐漸降低趨勢(shì)(表1)。

表1 MTA1、RECK在不同結(jié)腸組織中的表達(dá)

結(jié)腸癌與絨毛狀腺瘤、管狀腺瘤及正常結(jié)腸組相比，☆P<0.05；絨毛狀腺瘤與管狀腺瘤、正常結(jié)腸組織相比，*P<0.05；管狀腺瘤與正常結(jié)腸組織相比，△P<0.05

2.2 MTA1、RECK在結(jié)腸腺瘤癌變過程中的表達(dá) 在結(jié)腸腺瘤中MTA1的陽性率分別為39.02%(輕度異型增生)、81.25%(中重度異型增生)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RECK在輕度異型增生結(jié)腸腺瘤、中重度異型增生結(jié)腸腺瘤中的陽性率分別為90.24%、46.88%，中重度異型增生結(jié)腸腺瘤中RECK陽性率明顯低于輕度異型增生結(jié)腸腺瘤，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表2)。

表2 MTA1、RECK在結(jié)腸腺瘤癌變過程中的表達(dá)

與輕度異型增生相比，*P<0.05

2.3 MTA1、RECK表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系 MTA1在結(jié)腸癌中的陽性率隨腫瘤臨床Dukes分期的提高及腫瘤分化程度的降低而升高(P<0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Dukes C+D組)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Dukes A+B組)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MTA1表達(dá)與結(jié)腸癌患者年齡、性別無關(guān)(P>0.05)。RECK在結(jié)腸癌中的陽性率隨腫瘤臨床Dukes分期的提高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度的降低而降低(P<0.05)。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Dukes C+D組)明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Dukes A+B組)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RECK表達(dá)與結(jié)腸癌患者年齡、性別無關(guān)(P>0.05，表3)。

3 討論

MTA1是1993年P(guān)encil等[6]應(yīng)用差異雜交技術(shù)從具有轉(zhuǎn)移潛能的鼠乳腺癌細(xì)胞株13762NF中篩選克隆出來的基因，其通過影響染色質(zhì)的狀態(tài)來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄，調(diào)控組蛋白脫乙?；鶑亩l(fā)揮其生物學(xué)作用。MTA1是MTA家族的一員，其與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[7]。MTA1是一種關(guān)鍵的癌蛋白，有研究顯示MTA1在人類腫瘤中表達(dá)上調(diào)，其高表達(dá)與腫瘤的高侵襲特征如高病理分級(jí)、血管形成和預(yù)后不良等相關(guān)。MTA1可能通過以下機(jī)制在腫瘤發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮作用：(1)MTA1基因與組蛋白去乙?；附Y(jié)合重塑染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄相關(guān)蛋白的下調(diào)[8]；(2)MTA1基因能夠改變細(xì)胞角蛋白纖維系統(tǒng)，使細(xì)胞獲得更強(qiáng)的侵襲及轉(zhuǎn)移特征[9]。張金龍等[10]采用免疫組化法檢測(cè)結(jié)腸癌中MTA1的表達(dá)，結(jié)果顯示結(jié)腸癌組織及轉(zhuǎn)移組織中MTA1細(xì)胞質(zhì)染色強(qiáng)度均顯著高于正常組織，MTA1在細(xì)胞質(zhì)的表達(dá)強(qiáng)度與臨床分期呈正相關(guān)，生存時(shí)間<5年的結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織細(xì)胞質(zhì)內(nèi)MTA1的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于生存時(shí)間≥5年的患者組織，提示結(jié)腸癌中MTA1細(xì)胞質(zhì)過表達(dá)者預(yù)后不良。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌中MTA1陽性率呈逐漸上升趨勢(shì)，且中重度異型增生結(jié)腸腺瘤中MTA1陽性率明顯高于輕度異型增生結(jié)腸腺瘤，MTA1在結(jié)腸癌中的陽性率隨腫瘤臨床Dukes分期的提高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度的降低而升高，與張金龍等的研究結(jié)果一致。提示MTA1高表達(dá)是結(jié)腸癌發(fā)生的早期事件，MTA1在結(jié)腸腺瘤癌變過程中發(fā)揮一定的作用。

①A①B①C②A②B②C

圖1 MTA1的表達(dá)：A.正常結(jié)腸黏膜中陰性；B.結(jié)腸癌中陽性；C.結(jié)腸腺瘤中陽性，SABC法 圖2 RECK的表達(dá)：A.正常結(jié)腸黏膜中陽性；B.結(jié)腸癌中陰性；C.結(jié)腸腺瘤中陽性；SABC法

表3 MTA1、RECK表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系

RECK基因是1998年日本學(xué)者Takahashi等[11]在v-Kiras轉(zhuǎn)染的NIH3T3細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤抑制基因，其具有抑制基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)與活性的功能。Morioka等[12]研究表明，RECK基因表達(dá)缺失的細(xì)胞周圍黏連斑不能形成，細(xì)胞間連接遭受破壞；而對(duì)穩(wěn)定細(xì)胞微管系統(tǒng)有顯著作用的谷氨酸微管蛋白水平顯著降低，明膠溶解功能增加，纖維粘連蛋白減少；同時(shí)，RECK基因表達(dá)降低的成纖維細(xì)胞在遷移過程中，其細(xì)胞極性消失，細(xì)胞定向遷移的穩(wěn)定性顯著減弱而遷移速度卻明顯增加。這說明RECK對(duì)于細(xì)胞形成和維持合適的細(xì)胞-細(xì)胞基質(zhì)間粘連以及細(xì)胞的定向遷移具有調(diào)節(jié)作用；而在惡性腫瘤中，由于RECK基因表達(dá)缺失，這一功能被弱化。同時(shí)，RECK能在轉(zhuǎn)錄后水平抑制至少3種MMPs，即MMP-2、MMP-9及MTI-MMP，進(jìn)而抑制腫瘤的血管形成及轉(zhuǎn)移。近年來,研究顯示RECK基因參與許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，這些腫瘤包括肺癌、肝癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、乳腺癌及膀胱異型細(xì)胞癌等[13-14]。并且該基因與惡性腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌中RECK陽性率呈逐漸降低趨勢(shì)，且中重度異型增生結(jié)腸腺瘤中RECK陽性率明顯低于輕度異型增生結(jié)腸腺瘤。RECK在結(jié)腸癌中的陽性率隨腫瘤臨床Dukes分期的提高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度的降低而降低。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Dukes C+D組)明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Dukes A+B組)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。韓兵等[15]研究發(fā)現(xiàn)，RECK在結(jié)腸癌組織中的陽性率低于正常結(jié)腸組織。RECK表達(dá)與結(jié)腸癌浸潤層次、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期呈明顯負(fù)相關(guān)，與本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。由此可見MTA1、RECK參與正常組織、癌前病變、癌組織的發(fā)生、發(fā)展，在結(jié)腸腺瘤的癌變過程中起著重要作用。MTA1、RECK可能成為結(jié)腸癌基因治療的靶點(diǎn)之一，為結(jié)腸腺瘤癌變的早期預(yù)防和臨床靶向治療提供科學(xué)依據(jù)。

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邢臺(tái)市科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2014ZC157)

河北醫(yī)科大學(xué)附屬邢臺(tái)市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，邢臺(tái) 054000

陳現(xiàn)亮，男，碩士，主治醫(yī)師。Tel: (0319)3286143， E-mail: 125569317@qq.com

時(shí)間：2017-4-17 18:19

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R 735.3

A

1001-7399(2017)04-0432-04

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.04.018

接受日期：2017-01-13