Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子和抗CCP抗體檢測在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的臨床應(yīng)用性研究

譽(yù)秀華++周桂桃++楊秀堂

[摘要]目的 探討Th17相關(guān)細(xì)胞因子和抗CCP抗體在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）中的相關(guān)性和臨床意義。方法 回顧分析2015年1月～2016年5月在我院治療的60例RA患者，根據(jù)DAS28積分分為活動(dòng)組（DAS28>3.2）32例和穩(wěn)定組（DAS28≤3.2）28例，另選擇60例健康者作為對照組，用ELISA法測定血清Th17相關(guān)細(xì)胞因子（IL-17、IL-6、TGF-β1），用膠體金免疫層析法檢測抗CCP抗體陽性率，比較三組測定結(jié)果。結(jié)果 抗CCP抗體陽性率：活動(dòng)組>穩(wěn)定組>對照組（P<0.05）。IL-17、IL-6水平：活動(dòng)組>穩(wěn)定組>對照組（P<0.05）。TGF-β1水平：活動(dòng)組<穩(wěn)定組<對照組（P<0.05）。結(jié)論 抗CCP抗體陽性率、IL-17、IL-6水平越高，RA的DAS28積分越高，而TGF-β1水平越高，RA的DAS28積分越低，因此，Th17相關(guān)細(xì)胞因子和抗CCP抗體可以提高RA診斷及活動(dòng)性判斷的靈敏度和特異度，為治療新策略提供依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]Th17相關(guān)細(xì)胞因子；抗CCP抗體；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；臨床意義

[中圖分類號(hào)] R593.22 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2017）04（c）-0153-03

[Abstract]Objective To investigate the correlation and clinical significance of Th17-related cytokines and anti-CCP antibodies in rheumatoid arthritis.Methods 60 patients with rheumatoid arthritis（RA） who were treated in our hospital from January 2015 to May 2016 were retrospectively analyzed.According to DAS28 scores，the patients were divided in to active group of 32 patients（DAS28>3.2） and stable group of 28 patients （DAS28≤3.2）.Another 60 healthy subjects were selected as the control group.Serum Th17-related cytokines （IL-17，IL-6，TGF-β1） were determined by ELISA，and the positive rate of anti-CCP antibody was detected by colloidal gold immunochromatography.The testing results were compared between the three groups.Results The positive rate of anti-CCP：active group>stable group>control group（P<0.05）.IL-17 and IL-6 levels：active group>stable group>control group（P<0.05）.TGF-β1 level：active group

[Key words]Th17-related cytokines；Anti-CCP antibody；Rheumatoid arthritis；Clinical significance

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以炎性滑膜炎為主的系統(tǒng)性疾病，目前發(fā)病機(jī)制尚未闡明，近年發(fā)病率不斷攀升[1]。其特征為手、足小關(guān)節(jié)的多關(guān)節(jié)、對稱性、侵襲性關(guān)節(jié)炎癥，甚至導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形、功能喪失。臨床表現(xiàn)多為體重減輕、低熱、疲憊無力、關(guān)節(jié)晨僵甚至多臟器系統(tǒng)功能損害。由于發(fā)病機(jī)制尚未探明，臨床多借助血沉、C反應(yīng)蛋白免疫球蛋白、類風(fēng)濕因子、影像學(xué)檢查等診斷，但特異度和靈敏度不高[2]。現(xiàn)臨床上多采用非甾體抗炎藥、抗風(fēng)濕藥、糖皮質(zhì)激素等藥物治療，治療周期長，且效果一般[3]。近年不斷有文獻(xiàn)報(bào)道，Th17相關(guān)細(xì)胞因子和抗CCP抗體水平與RA關(guān)系密切[4]，因此本研究選擇RA患者和健康者各60例，探究Th17相關(guān)細(xì)胞因子和抗CCP抗體水平在RA中的重要意義。

1資料與方法

1.1一般資料

回顧分析2015年1月～2016年5月在我院治療的60例RA患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合1987年美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)制訂的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，未進(jìn)行任何治療≥2個(gè)月，包括使用抗風(fēng)濕藥、非甾體抗炎藥和糖皮質(zhì)激素，患者自愿參加并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他臟器（心、腎、肝、肺）器質(zhì)性疾病和（或）結(jié)締組織病。另選擇60例同期體檢完全健康的成年人作為對照組。RA患者根據(jù)DAS28積分分為活動(dòng)組（DAS28>3.2）32例和穩(wěn)定組（DAS28≤3.2）28例。其中活動(dòng)組年齡（51.2±8.4）歲，男性10例，女性22例；穩(wěn)定組年齡（50.5±9.2）歲，男性14例，女性18例；對照組年齡（51.4±8.8）歲，男性29例，女性31例。三組患者年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

所有患者均在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采靜脈血10 ml，經(jīng)4000 r/min離心10 min，取上層血清置于-80℃冷藏保存待用，全過程用時(shí)≤30 min。Th17相關(guān)細(xì)胞因子（IL-17、IL-6、TGF-β1）通過酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）使用相關(guān)試劑盒（上海研生實(shí)業(yè)有限公司，96T/48T）測定。①設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8孔，每孔加入相應(yīng)濃度25 μl標(biāo)準(zhǔn)品，余孔加入25 μl血清樣品于相應(yīng)孔中；②每孔加入25 μl酶聯(lián)物，輕輕混勻30 s，室溫溫育30 min；③洗板：甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌反應(yīng)板（每孔加入35 μl洗滌液），并去除水滴，反復(fù)洗滌3次；④每孔加入50 μl酶復(fù)合物，輕輕混勻30 s，室溫溫育30 min；⑤洗板：甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌反應(yīng)板（每孔加入35 μl洗滌液），并去除水滴，反復(fù)洗滌3次；⑥每孔加入50 μl顯色液，輕輕混勻10 s，室溫溫育15 min；⑦每孔加入50 μl終止液，輕輕混勻30 s，30 min內(nèi)在450 nm處讀取OD值；⑧以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)血清樣品的OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度?？笴CP抗體通過膠體金免疫層析法使用相關(guān)試劑盒（上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，滬食藥監(jiān)械準(zhǔn)字2014第2400660號(hào)）檢測，滴入3～4滴血清，待10 min讀結(jié)果。記錄抗CCP抗體陽性率。

1.3觀察指標(biāo)

觀察比較三組患者抗CCP抗體陽性率和IL-17、IL-6、TGF-β1水平。采用膠體金免疫層析法檢測抗CCP抗體，DAS28評分主要是RA疾病活動(dòng)分?jǐn)?shù)計(jì)算器，用來評價(jià)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活動(dòng)程度。28個(gè)關(guān)節(jié)分布：雙肩（2）、雙肘（2）、雙腕（2）、雙手掌指關(guān)節(jié)（10）、雙手近端指間關(guān)節(jié)（10）、雙膝關(guān)節(jié)（2）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組患者抗CCP抗體陽性率的比較

三組抗CCP抗體陽性率：活動(dòng)組（81.25%）>穩(wěn)定組（60.71%）>對照組（0.00%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2三組患者Th17相關(guān)細(xì)胞因子的比較

測定后IL-17、IL-6水平：活動(dòng)組>穩(wěn)定組>對照組（P<0.05），而TGF-β1水平：活動(dòng)組<穩(wěn)定組<對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

3討論

RA是一種以關(guān)節(jié)病變?yōu)橹鞯穆匀碜陨砻庖咝约膊　?jù)統(tǒng)計(jì)，在我國該病發(fā)病率為0.24%～0.5%，且近年有上升趨勢，女性多于男性，2～3∶1，以20～50歲發(fā)病多見[5]。主要病理改變?yōu)樾￡P(guān)節(jié)滑膜損傷所致的關(guān)節(jié)腫痛，繼而軟骨破壞、關(guān)節(jié)間隙變窄、功能障礙，也可累及其他臟器[6]。臨床表現(xiàn)為受累關(guān)節(jié)晨僵、疼痛、壓痛、腫脹、活動(dòng)受限、甚至畸形，小關(guān)節(jié)先受累，呈對稱性，其他臟器受累則產(chǎn)生相應(yīng)臨床表現(xiàn)[7]。由于本病發(fā)病機(jī)制未闡明，目前無根治方法，且該病易反復(fù)發(fā)作，預(yù)后不良，致殘率高，對患者身心健康損害極大[8]。據(jù)近年文獻(xiàn)報(bào)道，Th17相關(guān)細(xì)胞因子和抗CCP抗體水平與RA發(fā)病及活動(dòng)性存在密切關(guān)聯(lián)，因此筆者選取我院60例RA患者，與健康者對照，探究Th17相關(guān)細(xì)胞因子和抗CCP抗體水平對于RA發(fā)病機(jī)制、診斷、治療的重要意義。

CD4+淋巴細(xì)胞可分化Th17細(xì)胞亞群，Th17細(xì)胞可分泌IL-17、IL-6、IL-22、IL-21等相關(guān)細(xì)胞因子[9]。其中IL-17在急性感染性炎癥反應(yīng)中，可誘導(dǎo)炎癥因子和趨化因子表達(dá)，使免疫細(xì)胞到達(dá)炎癥部位，保護(hù)免受外界病原體損害，還可以誘導(dǎo)部分組織修復(fù)因子的表達(dá)，加快組織修復(fù)[10]。但據(jù)文獻(xiàn)顯示，在人體內(nèi)由多種原因?qū)е碌穆约膊。ㄈ鏡A）中，IL-17呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，可誘導(dǎo)更多炎癥因子表達(dá)加劇炎癥反應(yīng)，在患者身上表現(xiàn)為小關(guān)節(jié)的紅、腫、痛及功能障礙，甚至損害全身其他臟器，對疾病發(fā)展起惡化作用[11]。而IL-6可刺激免疫細(xì)胞的增殖、分化并提高免疫功能，同時(shí)誘導(dǎo)單核細(xì)胞活化、增強(qiáng)NK細(xì)胞活性，保護(hù)機(jī)體不受病原體侵害[12]。但在RA中，IL-6可刺激淋巴B細(xì)胞產(chǎn)生大量自身抗體，刺激RF等其它細(xì)胞因子產(chǎn)生，加重炎癥反應(yīng)和損傷[13]。TGF-β1對細(xì)胞增殖、分化、免疫功能都有重要調(diào)節(jié)作用，可抑制免疫活性細(xì)胞增殖、抑制多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)的抗原表達(dá)、抑制淋巴分化及細(xì)胞因子產(chǎn)生，與免疫功能呈拮抗關(guān)系，從而減輕炎癥反應(yīng)[14]。在本研究中，RA患者的IL-17、IL-6水平顯著高于健康者，且隨著炎癥活動(dòng)性增強(qiáng)，其水平越高；而RA患者TGF-β1水平顯著低于健康者，且炎癥活動(dòng)性增強(qiáng)，其水平越低。通過這3個(gè)細(xì)胞因子指標(biāo)可以早期診斷RA或判斷RA炎癥反應(yīng)活動(dòng)情況，闡述了RA與Th17細(xì)胞家族相關(guān)的發(fā)病機(jī)制，提供了降低IL-17、IL-6水平，提高TGF-β1水平的新的治療方向。

抗CCP抗體是診斷RA的高特異度、高靈敏度（68%～75%）指標(biāo)，先于RA臨床表現(xiàn)出現(xiàn)，主要為IgG類抗體，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，在RA早期敏感度就可達(dá)50%左右，而抗CCP抗體陽性患者的骨破壞程度較陰性更嚴(yán)重[15]。在本研究中，隨著RA活動(dòng)性增加，抗CCP抗體陽性率增高。反之該指標(biāo)可以較準(zhǔn)確診斷RA并反應(yīng)炎癥活動(dòng)情況。在后期治療中，可進(jìn)一步研究降低抗CCP抗體以減輕炎癥反應(yīng)、緩解病情的新型治療。

綜上所述，IL-17、IL-6、TGF-β1和抗CCP抗體水平在RA發(fā)病機(jī)制中有重要臨床意義，可以提高RA診斷及活動(dòng)性判斷的靈敏度和特異度，為治療新策略提供依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]劉孟敏，李遠(yuǎn)，李施新，等.基于關(guān)聯(lián)規(guī)則和復(fù)雜系統(tǒng)熵聚類探討60份全國名老中醫(yī)醫(yī)案中論治類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎規(guī)律[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，33（3）：436-440.

[2]郭永強(qiáng)，涂大有，葉秋菊，等.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的MRI表現(xiàn)及其臨床價(jià)值[J].放射學(xué)實(shí)踐，2013，28（4）：448-450.

[3]馬占賓.淺析類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物治療[J].醫(yī)學(xué)綜述，2014，20（12）：2221-2223.

[4]張炯，鄒和建.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者FcγR Ⅲ A多態(tài)性研究[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2005，9（2）：77-80.

[5]沈婷，萬彬彬.延續(xù)性護(hù)理對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者疼痛及生活質(zhì)量的影響[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2014，18（18）：26-29.

[6]張群，王競秋.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制與臨床治療的研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2013，32（21）：148-149.

[7]邵俊華.中西醫(yī)結(jié)合治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎33例[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，24（1）：46-47，48.

[8]黃獻(xiàn)京.中西醫(yī)結(jié)合治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎繼發(fā)骨質(zhì)疏松的療效觀察[J].中國骨質(zhì)疏松雜志，2014，20（5）：530-534.

[9]湯榮華，黃建軍.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者血清GM-CSF、IL-6、IL-17和TNF-α的水平測定及臨床意義[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2013，28（3）：173-177.

[10]何媛.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者 Th17/Treg及其相關(guān)細(xì)胞因子的研究[J].實(shí)用臨床醫(yī)學(xué)，2016，17（9）：17-19.

[11]霍娟，楊晉，胡文霞，等.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者外周血芳香烴受體表達(dá)與Th17細(xì)胞相關(guān)性研究[J].國際免疫學(xué)雜志，2016，39（5）：437-441.

[12]楊金娜，劉曉光，李覃，等.Th17/Treg平衡在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中作用的研究進(jìn)展[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2013，29（8）：1045-1048.

[13]朱溫帥，王英振，夏長所，等.血清白細(xì)胞介素-17水平對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者骨關(guān)節(jié)損害作用及機(jī)制[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2014，31（4）：894-896.

[14]李濤.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者IL-6、IL-17、OPG、RANKL水平檢測及臨床意義[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2014，27（3）：277-279.

[15]胥國強(qiáng)，楊佳佳，蒲澤宴，等.RF、抗CCP抗體和AKA對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎診斷的評價(jià)[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013， 34（11）：1390-1392，1394.

（收稿日期：2016-12-28 本文編輯：馬 越）