盧志芳++楊先凱

【摘要】目的 本文旨在探討影響神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE） 測(cè)定結(jié)果的因素。方法 根據(jù)受試者樣本放置時(shí)間，溶血程度，黃疸程度的不同，采用化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定各組NSE水平，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果 正常人和3例小細(xì)胞肺癌患者血液標(biāo)本分別放置0.5 h、1 h、3 h 和5 h，NSE檢測(cè)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；溶血對(duì)NSE的測(cè)定影響很大，且溶血的標(biāo)本中每增加1 g血紅蛋白（Hb）就可測(cè)定出32.45 ng/mL的的NSE；不同濃度的黃疸樣本檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

結(jié)論 NSE的測(cè)定受外界因素影響，會(huì)出現(xiàn)假陽性，并影響到臨床診療。在實(shí)際工作中，應(yīng)避免溶血，且及時(shí)送檢并分離血清從而提高結(jié)果的準(zhǔn)確性。

【關(guān)鍵詞】神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）；化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)；標(biāo)本；影響因素；

【中圖分類號(hào)】R446.6 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2016.34..02

作為烯醇化酶的同工酶，神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）被公認(rèn)是監(jiān)測(cè)小細(xì)胞肺癌的首選標(biāo)志物。另一方面NSE同神經(jīng)損傷所致的許多神經(jīng)性疾病關(guān)系密切[1-2]。由于紅細(xì)胞和血小板中同時(shí)存在著NSE，血細(xì)胞的異常代謝活動(dòng)， 會(huì)導(dǎo)致血清中NSE的成分發(fā)生變化。因此在測(cè)定中，應(yīng)避免外界因素干擾血清中NSE的原有水平，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果[3]。本研究旨在探討影響NSE檢測(cè)的影響因素，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

標(biāo)本：健康體檢者30例，男性20例，女性10例，年齡20～40歲，均無抽煙史，無基礎(chǔ)?。恍〖?xì)胞肺癌患者3例，為2016年4～10月確診的我院男性住院患者，年齡45～60歲。自制溶血標(biāo)本：取無溶血的正常人混合血清標(biāo)本，人工使其溶血后高速離心，取上清備用。自制黃疸標(biāo)本：取無溶血的正常人混合血清標(biāo)本，人工加入特定含量膽紅素備用。

1.2 試劑與儀器

NSE試劑盒為化學(xué)發(fā)光免疫法，深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司提供；化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定儀器，深圳新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司提供的MAGLUMI 2000。Mek7222k血液分析儀，日本光電公司生產(chǎn)。

1.3 方法

（1）早晨分別采集健康體檢者和肺癌患者空腹靜脈血10 mL，同一標(biāo)本按放置時(shí)間不同分裝四份。按深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司試劑盒說明書進(jìn)行操作（試劑盒為化學(xué)發(fā)光免疫法）。健康體檢人群與3例小細(xì)胞肺癌患者血清標(biāo)本收集后，分別在放置0.5 h、1 h、3 h 和5 h后進(jìn)行離心，檢測(cè)。每次、每份標(biāo)本重復(fù)測(cè)定5次，計(jì)算其均值、標(biāo)準(zhǔn)差及進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

（2）將自制的溶血標(biāo)本，再次離心，取上清液用光電Mek-7222k血細(xì)胞分析儀重復(fù)測(cè)定數(shù)次，調(diào)整血紅蛋白含量使其均值為4.0 mg/mL，將其倍比稀釋成1.0，0.25，0.063的4個(gè)梯度。每個(gè)濃度梯度重復(fù)進(jìn)行5次測(cè)定，算出其NSE均值（ng/mL）。再分別計(jì)算出每克Hb的NSE

含量（ng/mL），最后以NSE和Hb總量，計(jì)算出總平均每克Hb的NSE含量（ng/mL）。

（3）自制黃疸標(biāo)本，取無溶血的正常人混合血清標(biāo)本，分成6組，分別加入不同濃度的膽紅素制備成梯度濃度的黃疸血清樣本，40～60 μmol/L組、60～100 μmol/L 組、100～200 μmol/L組、200～300 μmol/L組、300～400μmol/L組、>400 μmol/L組各20份，進(jìn)行NSE檢測(cè)。

2 結(jié) 果

（1）正常人血清標(biāo)本放置0.5 h，1 h，3 h，5 h后， 檢測(cè)NSE含量。NSE水平最高為放置5 h的樣本，隨著放置時(shí)間的減少NSE明顯降低，其中與0.5 hNSE結(jié)果相比，3 h和

5 h差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

（2）小細(xì)胞肺癌患者NSE放置0.5 h，1 h，3 h，5 h測(cè)定結(jié)果及差異顯著性。

（3）自制溶血標(biāo)本NSE測(cè)定結(jié)果。

（4）不同濃度黃疸樣本的NSE檢測(cè)水平對(duì)比 ，結(jié)果差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3 討 論

血清NSE是糖酵解通路中的一種肝糖分解酶，是烯醇化酶的一種同工酶，分子量為78 KD。正常存在于神經(jīng)元、周圍神經(jīng)組織和神經(jīng)內(nèi)分泌組織如APUD細(xì)胞系統(tǒng)中[4-7]，在細(xì)胞被破壞時(shí)釋放出來，可作為APUD腫瘤的特異性腫瘤標(biāo)志物[7]。NSE在神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織中呈異常高表達(dá)。小細(xì)胞肺癌也是能夠分泌NSE的APUD腫瘤之一。目前NSE被認(rèn)為是小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤最特異、最敏感的腫瘤標(biāo)志物。同時(shí)研究證實(shí)NSE不但存在于APUD細(xì)胞系中，還存在于APUD瘤細(xì)胞系中，對(duì)NSE進(jìn)行測(cè)定既可以輔助診斷小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤，還可為其療效觀察和預(yù)后評(píng)價(jià)提供依據(jù)，同時(shí)還可對(duì)嗜鉻細(xì)胞瘤、胰島細(xì)胞瘤、黑色素瘤、甲狀腺髓樣癌等提供診斷信息。

正常紅細(xì)胞中也存在較多量的NSE，溶血標(biāo)本會(huì)對(duì)結(jié)果的正常判斷造成干擾[8-9]；由于紅細(xì)胞破裂會(huì)釋放出較多的NSE，因此溶血可引起結(jié)果偏高；同樣血小板中也可釋放NSE，因此，未充分離心的樣本NSE的結(jié)果也會(huì)偏高等[10]。但是紅細(xì)胞內(nèi)含有NSE的量以及溶血會(huì)對(duì)血清NSE測(cè)定結(jié)果造成多大的影響，已經(jīng)達(dá)成共識(shí)[11-12]。研究顯示，每溶解紅細(xì)胞釋放1 g血紅蛋白的量，就可以平均測(cè)定出32.45 ng/mL的NSE，屬假陽性結(jié)果。可見NSE實(shí)驗(yàn)結(jié)果受溶血的影響很大；同時(shí)正常人和小細(xì)胞肺癌患者血清標(biāo)本放置一定時(shí)間后再測(cè)定，均會(huì)導(dǎo)致NSE結(jié)果產(chǎn)生差異。而黃疸對(duì)NSE的檢測(cè)結(jié)果不產(chǎn)生影響。

綜上所述，標(biāo)本溶血和標(biāo)本放置過長(zhǎng)時(shí)間對(duì)測(cè)定結(jié)果有顯著影響，實(shí)踐中NSE檢測(cè)一定要避免標(biāo)本溶血，靜脈采血盡量一次成功，避免在同一部位反復(fù)穿刺，在采取標(biāo)本后應(yīng)盡量快速送檢并分離血清且應(yīng)立即進(jìn)行測(cè)定。假如不能即刻測(cè)定，也應(yīng)該立即分離血清，置入冰箱冷凍保存?zhèn)洳椤Ｄ康木褪潜M可能避免因標(biāo)本溶血和標(biāo)本久置使紅細(xì)胞中NSE釋放進(jìn)入血清，影響測(cè)定結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

[1] DeGiorgio CM.Neuron-specific enolase，marker of acuteneuronal injury，is increased in complex partial status epi-lepticus[J].Epilepsia，1996，37（7）：606-609.

[2] Rabinowicz AL，Correale JD，Bracht KA，et al.Neuron-specific enolase in increased after nonconvulsive status epileticus[J].Epilepsia，1995，36：457.

[3] 仇彩霞，江崇才，王盛楠，等.影響神經(jīng)元特異性烯醇化酶檢測(cè)的新因素.青島醫(yī)藥衛(wèi)生，2013，45（1）：19-21.

[4] 張小紅，王 靜，王紅民.血清NSE TSGF CA125 CYFRA-21-1 聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌的診斷價(jià)值[J].腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2006，（1）：16-18.

[5] Andos S，Suzuki M，Yamamoto N，et al.The prognosticvalue of both neuron-specific enolase （NSE）and Cyfra21-1 in small cell cancer[J].Anticancer Res.2004.24（3b）：1941-1946.

[6] Karnak D，Beder S，Kayacan O，et al.Neuron-specificenolase and lung cancer [J].Am J Clin Oncol，2005，28（6）：586-590.

[7] Tapia FJ，Polak JM，Barbosa AJ，et al.Neuron-specificenolase is produced by neuroeudocrine tumours [J].Lancet，1981，1（8224）：

808-811.

[8] 隋靖喆，李 山，秦 雪，等.標(biāo)本不同處理因素對(duì)神經(jīng)元特異性烯醇化酶測(cè)定的影響[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（14）：1950-1951.

[9] 辛麗君，顧建英，高云朝，等.標(biāo)本因素對(duì)血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶檢測(cè)的影響[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2007，22（3）：303-307.

[10] 宋現(xiàn)讓，劉美琴，朱傳金，等.神經(jīng)元特異性烯醇化酶檢測(cè)的標(biāo)本因素探討[J].醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床，2006，17（4）：69-70.

[11] 張家華，黃 平，主編.現(xiàn)代臨床實(shí)驗(yàn)診斷手冊(cè)[M].第1版.北京：人民軍醫(yī)出版社，1994：322 -325.

[12] 周 新，涂植光.臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗(yàn)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2004.

本文編輯：李 豆