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      β氨基丁酸的誘導(dǎo)抗病作用及應(yīng)用

      2017-07-05 15:25:31,,,,,,
      食品工業(yè)科技 2017年12期
      關(guān)鍵詞:氨基丁酸抗病性果蔬

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      (貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展研究所,貴州貴陽(yáng) 550006)

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      李國(guó)林,陳曦,鄭秀艷,黃道梅,孟繁博,李詠富,林茂*

      (貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展研究所,貴州貴陽(yáng) 550006)

      β-氨基丁酸(β-Aminobutyric,BABA)是一種天然的植物抗性誘導(dǎo)劑,可以誘導(dǎo)植物抵抗真菌或細(xì)菌的侵染,對(duì)多種植物都具有誘導(dǎo)抗性作用。本文對(duì)外源BABA在植物中的轉(zhuǎn)運(yùn)方式、直接抑菌及間接抑菌效果、對(duì)果蔬的誘導(dǎo)抗病作用,在生化酶活性和分子水平上對(duì)可能的作用機(jī)理做了總結(jié)。同時(shí),簡(jiǎn)要分析了目前研究中的局限性,旨在為未來(lái)保鮮劑的發(fā)展提供理論參考。

      β-氨基丁酸,果蔬,誘導(dǎo)抗病,機(jī)理

      植物在生長(zhǎng)過(guò)程中為了抵御病原菌、害蟲及外界不良環(huán)境對(duì)自身的影響會(huì)進(jìn)化產(chǎn)生出天然的防御機(jī)制,這種能力被稱為“植物誘導(dǎo)抗病性”,引起這種反應(yīng)的因子稱為“激發(fā)子”。根據(jù)植物誘導(dǎo)抗病性的作用范圍,可以分為局部抗病性和系統(tǒng)抗病性2種類型[1]。從激發(fā)子的角度分類,通常認(rèn)為直接由病原菌引起的抗病性為系統(tǒng)獲得抗性(Systemic acquired resisrance,SAR),而由非病原菌或其他天然因素引起的抗病性則稱為系統(tǒng)誘導(dǎo)抗性(Induced systemic resistance,ISR)。

      β-氨基丁酸(β-aminobutyric,BABA)又名DL-β-氨基丁酸,是從暴曬的番茄根系中分離得到的一種次生代謝非蛋白氨基酸,結(jié)構(gòu)式如圖1所示,根據(jù)氨基位置的不同有三種同分異構(gòu)體,分別為:α-氨基丁酸(AABA)和γ-氨基丁酸(GABA)。三種同分異構(gòu)體活性有所差異,在花椰菜、萵苣、胡椒等植物的誘導(dǎo)抗病實(shí)驗(yàn)中,三種異構(gòu)體中只有BABA的活性最強(qiáng)[2-4],同時(shí)有研究結(jié)果顯示BABA的兩種對(duì)映體中R構(gòu)型對(duì)映體的誘導(dǎo)抗病作用要顯著強(qiáng)于S對(duì)映體,結(jié)構(gòu)式見圖2[4-5]。BABA作為一種化學(xué)“激發(fā)子”,在50多年前就已被發(fā)現(xiàn),隨著研究的深入,多種研究結(jié)果表明,BABA能夠誘導(dǎo)植物抗病性的產(chǎn)生,抵御病毒、細(xì)菌、卵菌、真菌、線蟲、蚜蟲或一些非生物逆境脅迫(干燥、缺氧等)對(duì)植物帶來(lái)的不良影響[6-7],能激活馬鈴薯、辣椒、胡椒、煙草、擬南芥、洋薊、番茄等植物獲得系統(tǒng)抗性反應(yīng)[8]。BABA在植物體內(nèi)較少產(chǎn)生,目前的研究顯示只在番茄的根部浸出液和杏仁桉(Eucalyptusregnans)、銀荊(Acaciadealbata)和黑木金合歡(Acaciamelanoxylon)韌皮部的汁液中有過(guò)發(fā)現(xiàn)[9-10]。

      圖1 BABA結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structure of β-aminobutyric acid

      圖2 BABA對(duì)映異構(gòu)體結(jié)構(gòu)式Fig.2 Chemical structure of β-aminobutyric acid enantiomers

      外源BABA施用時(shí),需考慮與植物種類、施用方式、施用部位等因素相適宜。BABA的施用方式較多,常見的主要有葉噴、灌根、浸種等方法,具體的施用方法需根據(jù)植物種類的不同來(lái)確定。BABA在植株中的吸收速率隨著施用部位的不同而發(fā)生改變。Cohen等[4]采用14C標(biāo)記法研究了葉噴和灌根兩種方式下番茄植株體內(nèi)BABA的吸收速率,結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過(guò)根系吸收的BABA在處理2 d后在番茄體內(nèi)僅吸收了36%,而通過(guò)葉片吸收的BABA在處理2 h后就已達(dá)99%。葡萄葉噴施實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),BABA的吸收率與葉表面角質(zhì)層的厚度呈負(fù)相關(guān)[11]。此外,在葡萄、番茄、馬鈴薯的葉噴實(shí)驗(yàn)中觀察到BABA的轉(zhuǎn)運(yùn)方向是從老葉片向新葉片,即從底部向頂部轉(zhuǎn)移,反之則不行,當(dāng)BABA在頂部葉片噴時(shí),轉(zhuǎn)運(yùn)方向則為向下轉(zhuǎn)運(yùn)。由此可見,BABA在植株體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)方向也隨施用部位的不同而發(fā)生改變[11]。

      1 BABA抑菌及誘導(dǎo)抗病作用

      1.1直接抑菌作用

      研究顯示,BABA對(duì)多種植物病原菌均具有體外抑制作用,但抑菌作用與病原菌的種類和處理濃度相關(guān)。Fischer 等[12]研究表明,300 μmol/L的BABA對(duì)灰葡萄孢(Botrytiscinerea)和釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)有顯著地抑制作用,且與培養(yǎng)基的pH有直接關(guān)系,pH=4時(shí),2.4 mmol/L BABA可以完全抑制B.cirenea菌絲的伸長(zhǎng),但當(dāng)pH升高到7時(shí),這種抑制效果只有40%。20 mmol/L BABA可以增強(qiáng)葡萄抵抗致病菌指狀青霉(P.digitatum)的侵染作用,升高BABA的濃度到100 mmol/L則表現(xiàn)出直接抑菌作用[13],a?ek等[14]的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在未添加蛋白胨(有機(jī)氮)的培養(yǎng)基中,2 μmol/L的BABA能有效抑制歐洲油菜中油菜莖基潰瘍病菌(Leptosphaeriamaculans)菌絲生長(zhǎng),但在加有微量(6 ppm)蛋白胨的培養(yǎng)基中,這種抑菌作用被顯著削弱,并由此推測(cè)BABA的體外直接抑菌作用與培養(yǎng)基中的有機(jī)氮含量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。此外,BABA對(duì)甜橙(Citrussinensis)的采后致病菌意大利青霉(P.italicum)、蘋果中的指狀青霉(P.digitatum)均具有抑制孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)的作用[15-16]。400 mmol/L的BABA對(duì)芒果炭疽病的病原菌膠孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)無(wú)直接抑制作用,100 mmol/L BABA處理芒果果實(shí)后損傷接種后第7 d病斑直徑比對(duì)照減小33.6%[1]。Zhang等[16]發(fā)現(xiàn)其可以有效抑制擴(kuò)展青霉(P.expansum)孢子的萌發(fā)和孢子管的伸長(zhǎng),BABA可以破壞菌絲質(zhì)膜的完整性、增加細(xì)胞內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)和糖的泄露。

      1.2誘導(dǎo)抗性

      BABA對(duì)多種植物均能表現(xiàn)出較好的誘導(dǎo)抗病作用,這種作用的強(qiáng)弱受多種因素影響,如植物及病原菌的種類,處理時(shí)間和濃度,接種間隔時(shí)間等。Yan等[17]采用濃度為0.5、2、5 g/L的BABA體外抑制冬棗(ZizyphusjujubaMill. cv. Dongzao)采后病原菌Alternariaalternata后發(fā)現(xiàn),BABA對(duì)A.alternata的孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)沒(méi)有直接抑制作用,0.5、1.0 g/L和2.0 g/L的浸泡處理顯著降低了冬棗貯藏期間的腐爛率和病斑面積。董博宇等[18]人采用浸泡法將蘋果梨(Pyruspyrifolia)浸沒(méi)于50 μg/mL BABA中10 min,處理12 h后接種黑斑病的病原菌A.alternata,結(jié)果顯示BABA誘導(dǎo)了蘋果梨果實(shí)對(duì)黑斑病的抗性。同樣,BABA可以顯著提高馬鈴薯塊莖對(duì)干腐病和粉痂病的抗病性,100 mmol/L BABA浸泡馬鈴薯塊莖,無(wú)論是感病還是抗病品種,均提高了其對(duì)由F.sulphureum引起的干腐病的抗性,而且2 mmol/L的BABA就能顯著減輕由Spongosporasubterranea侵染馬鈴薯造成的粉痂病[6,19]。75 mmol/L的BABA處理‘巨峰’葡萄后接種B.cinereal,可有效抑制病斑擴(kuò)展和降低腐爛率[20]。100 mg/L BABA在處理‘臺(tái)農(nóng)1號(hào)’芒果不接種病原菌的條件下仍然能夠明顯降低芒果果實(shí)的病情指數(shù)和病果率,提高商品果率,顯著提高果實(shí)抗病性[21]。BABA不僅可以增強(qiáng)抗病性,而且能夠較好的保持果實(shí)采后的貯藏品質(zhì)。Wang等[22]研究了BABA處理對(duì)甜櫻桃采后貯藏品質(zhì)的影響,結(jié)果表明,30 mmol/L BABA處理可顯著提升甜櫻桃果實(shí)的采后貯藏品質(zhì),果皮色澤、酸度、失重、呼吸速率均顯著低于對(duì)照,總糖、有機(jī)酸、總酚等含量等得到有效保持,延長(zhǎng)了貨架期。

      1.3其它措施對(duì)BABA的增效作用

      50 mmol/L BABA浸泡處理蘋果果實(shí)后接種P.expansum,其病斑直徑為對(duì)照的80.76%,45 ℃熱水處理后間隔15 min后再用BABA處理,其果實(shí)病斑直徑僅為對(duì)照組的72.57%,這說(shuō)明熱水處理增強(qiáng)了BABA的抗病作用,增加了蘋果對(duì)青霉病的抗性[23]。外源Ca2+對(duì)BABA同樣有增效作用,BABA處理葉片的同時(shí)噴施Ca2+比單一BABA處理番茄時(shí),灰霉病的病情指數(shù)下降了18.2%[24]。張維[25]研究證實(shí)單獨(dú)使用0.75 g/L的BABA處理蘋果,可有效防治采后青霉病的發(fā)生,效果要強(qiáng)于BABA與殼聚糖的復(fù)配使用,但貯藏品質(zhì)方面與殼聚糖復(fù)配使用的BABA效果要優(yōu)于單獨(dú)使用。此外,許多研究報(bào)告表明BABA與百菌清、甲霜靈、代森錳鋅、氟啶胺等農(nóng)藥殺菌劑均有協(xié)同作用[26]。

      2 誘導(dǎo)抗性機(jī)理

      表1 BABA誘導(dǎo)果蔬中酶及抗性成分變化Table 1 The change of enzyme activities and resistance composition induced by BABA

      苯丙氨酸解氨酶(PAL)是苯丙烷類代謝途徑中的關(guān)鍵酶與限速酶,與黃酮類物質(zhì)、木質(zhì)素及酚類化合物形成有著重要作用,PAL參與催化下,苯丙氨酸脫氨基生成酚類和其他抗菌活性的物質(zhì),它們對(duì)抑制病原菌起著主要作用[28]。幾丁質(zhì)酶(CHI)和β-1,3-葡聚糖酶(GLU)是植物體中兩種主要的病程相關(guān)蛋白(PR),這類PR基因的表達(dá)被認(rèn)為是植物系統(tǒng)獲得抗病性的標(biāo)志,這兩種酶可特征性地水解真菌細(xì)胞壁來(lái)抑制病原菌的發(fā)展[8,29]。酚類和類黃酮是苯丙烷代謝的末端產(chǎn)物,酚類化合物在過(guò)氧化物酶(POD)作用下被氧化后形成毒性更強(qiáng)的醌類物質(zhì),能有效抑制病原物的擴(kuò)展,此外,酚類物質(zhì)也是木質(zhì)素等抗性物質(zhì)合成的前體;類黃酮具有顯著地抗菌活性,可抑制病原菌的孢子萌發(fā)、芽管伸長(zhǎng)、菌絲生長(zhǎng)[18,30]。細(xì)胞壁是植物抵御病原菌侵染的第一層天然屏障,“激發(fā)子”會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞壁強(qiáng)化或加厚,主要是因?yàn)镻OD和多酚氧化酶(PPO)能夠?qū)⒎宇愇镔|(zhì)聚合成木質(zhì)素和富含羥脯氨酸糖蛋白(hydroxyproline-rich glycoprotein,HRGP),細(xì)胞內(nèi)隨著木質(zhì)素和HRGP的逐漸積累,形成抵御病原物侵染的物理屏障,能夠不同程度地阻止病原物的侵入和擴(kuò)展,增加果蔬的抗病性,因此木質(zhì)化反應(yīng)也是誘導(dǎo)抗性產(chǎn)生的重要機(jī)制之一[31-32]。BABA處理后可誘導(dǎo)POD、PPO活性升高,使木質(zhì)素大量沉積,導(dǎo)致細(xì)胞壁的木質(zhì)化,有助于植物細(xì)胞壁的強(qiáng)化[23]。Luna等[33]利用擬南芥研究BABA在誘導(dǎo)作用的過(guò)程發(fā)現(xiàn),天門冬氨酰-tRNA合成酶是BABA發(fā)揮作用的體內(nèi)受體。

      另外,BABA在植物體內(nèi)的誘導(dǎo)作用也是多種激素(信號(hào)分子)相互作用的結(jié)果,這些信號(hào)分子主要由水楊酸(Salicylic acid,SA)、茉莉酸(Jasmonic acid,JA)、脫落酸(Abscisic acid,ABA)和乙烯(Ethylene,ET)組成[34]。水楊酸由苯甲酸羥基化或反式肉桂酸經(jīng)過(guò)側(cè)鏈β氧化而生成,并被認(rèn)為是誘導(dǎo)SAR的重要信號(hào)分子之一,研究證明,BABA在馬鈴薯、煙草、辣椒中的誘導(dǎo)抗性是通過(guò)SA途徑實(shí)現(xiàn)的[35-37],葡萄藤的抗性作用又分別通過(guò)JA和ET途徑實(shí)現(xiàn)[38-39]。此外,BABA能夠促進(jìn)逆境下植物細(xì)胞內(nèi)ABA的積累產(chǎn)生量來(lái)提高對(duì)不良環(huán)境的適應(yīng)能力[40]。

      植物果實(shí)在經(jīng)BABA處理一段時(shí)間后,不僅會(huì)在生化水平上發(fā)生變化,在分子水平上,一些防御基因誘導(dǎo)之后會(huì)相應(yīng)的表達(dá)上調(diào),10 mmol/L BABA浸泡后接種B.cinerea的草莓果實(shí),其體內(nèi)FaPR1、FaChi3、Faβglu和FaPAL四種抗性基因與對(duì)照相比表達(dá)顯著地上調(diào)[41]。經(jīng)20 mmol/L 減壓浸泡的桃果實(shí)接種B.cinerea后,PpNPR1-like和PpPRs基因表達(dá)均呈現(xiàn)上調(diào)趨勢(shì)[30]。香蕉果實(shí)抗性酶相關(guān)基因,如MaNOX、MaCAT、MaCHI、MaGLU、MaPAL1在經(jīng)BABA誘導(dǎo)后較對(duì)照組均有不同程度的上調(diào)[8]。BABA在擬南芥、向日葵、葡萄、檸檬、煙草等植物中也有相同誘導(dǎo)基因表達(dá)的作用[26]。

      3 問(wèn)題及展望

      果蔬誘導(dǎo)抗病性是通過(guò)外源激發(fā)子激活果蔬體內(nèi)自身的防御機(jī)制來(lái)增強(qiáng)其對(duì)病原菌侵染的抵抗能力,是其潛在的防衛(wèi)相關(guān)基因的表達(dá)和調(diào)控,并沒(méi)有涉及到基因類型的改變,因此,誘導(dǎo)提高果蔬抗病性是一種安全高效的采后保鮮方法[42]。

      BABA作為一種植物誘抗劑的作用已經(jīng)得到了廣泛的證實(shí),其既可以采前大田施用,又能采后使用,對(duì)薔薇科、禾本科、葫蘆科、豆科、十字花科等一年生或多年生、單子葉或雙子葉植物抵抗由卵菌、真菌、細(xì)菌、病毒和線蟲引起的病害均能起到誘抗作用,還可以緩解一些非生物脅迫帶來(lái)的逆境危害。同時(shí),BABA在與其他多種殺菌劑、植物激活劑和促進(jìn)植物生長(zhǎng)的根瘤菌(PGPR)結(jié)合使用時(shí),具有較強(qiáng)互作增效作用,發(fā)揮出良好的誘抗性能。但目前BABA在果蔬采后病害方面的應(yīng)用研究還略顯不足,其對(duì)果蔬誘抗作用會(huì)受果蔬種類和品種、成熟度、處理方式、濃度、時(shí)間等多種因素的影響,與采前施用不同的是,采后BABA的使用要考慮果蔬的采摘時(shí)期,采摘和裝運(yùn)過(guò)程中產(chǎn)生的人為損傷和機(jī)械損傷,以及采后的貯藏條件都對(duì)BABA的使用效果影響較大。因此,進(jìn)一步擴(kuò)大BABA的使用范圍就顯得十分必要,篩選適宜的處理時(shí)間及處理濃度等因素,特別是與其它安全保鮮措施的結(jié)合使用來(lái)提高保鮮效果。

      綜上所述,隨著人們生活水平的提高,對(duì)健康及食品安全問(wèn)題越來(lái)越關(guān)注,對(duì)化學(xué)合成保鮮劑的安全性提出質(zhì)疑,天然綠色植物誘抗劑可以減少甚至替代殺菌劑的使用。但目前BABA對(duì)果蔬采后誘導(dǎo)抗病性機(jī)制的研究還不夠深入及徹底,且多數(shù)集中在組織結(jié)構(gòu)、植物抗毒素和酶活性水平上,分子水平上的研究還比較缺乏。目前在多種植物中研究結(jié)果大體一致,但還存在差異,這說(shuō)明植物誘導(dǎo)抗性調(diào)控機(jī)制的復(fù)雜性,因此植物誘導(dǎo)抗性調(diào)控的深層機(jī)制還有待進(jìn)一步研究,為以后BABA的開發(fā)提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

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      www.spgykj.com

      Theapplicationandinduceresistancemechanismofβ-aminonbutyricacid

      LIGuo-lin,CHENXi,ZHENGXiu-yan,HUANGDao-mei,MENGFan-bo,LIYong-fu,LINMao*

      (Integrated Agricultural Development Research Institute,Guizhou Academy of Agricultural Science,Guiyang 550006,China)

      β-aminobutyric acid(BABA)was a nature plant resistance inducer,which could induce resistance against many diseases caused by fungus and bacteria in a wide range of fruits and vegetables. The transport type in plants,direct/indirect antibiotic action,induced resistance to fruits and vegetables,biochemical enzyme activity and gene express change were systematically summarized. In addition,the defects in current researches were briefly analyzed and expected to provide helpful references for preservation technology development in future in this review.

      β-aminobutyric acid;fruits and vegetables;induced resistance;mechanism

      2016-11-23

      李國(guó)林(1987-),男,碩士,助理研究員,研究方向:農(nóng)產(chǎn)品加工與貯藏,E-mail:lgl292@163.com。

      *通訊作者:林茂(1979-),女,博士,副研究員,研究方向:農(nóng)產(chǎn)品加工與貯藏,E-mail:linmao520132@163.com。

      黔農(nóng)科院院專項(xiàng)[2016]026號(hào),黔農(nóng)科院CR合字(2014)04號(hào);黔農(nóng)科院自主創(chuàng)新科研專項(xiàng)字(2014)018號(hào);貴州省特色農(nóng)產(chǎn)品輻照保鮮技術(shù)服務(wù)企業(yè)行動(dòng)計(jì)劃(黔科合平臺(tái)人才[2016]5712);貴州省特色農(nóng)產(chǎn)品輻照保鮮與加工工程技術(shù)研究中心(2016GZ67305)。

      TS201.2

      :A

      :1002-0306(2017)12-0347-05

      10.13386/j.issn1002-0306.2017.12.065

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