高效液相色譜法測(cè)定人參超微粉中人參皂苷的含量

王寶春++孫萍++丁桃紅++殷海霞

【摘要】皂苷類是人參的主要成分和藥效成分，采用高效液相色譜法可準(zhǔn)確測(cè)定人參中各皂苷類成分，本文主要介紹采用液相色譜測(cè)定在超微粉碎技術(shù)下得到不同粒度的粉末中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1的含量。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法，人參，人參皂昔

【中圖分類號(hào)】R284 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2016.36..02

本品為五加科植物人參Pana：c ginseng C.A.Mey.的干燥根和根莖。它具有大補(bǔ)元?dú)?，補(bǔ)脾益肺，生津養(yǎng)血，安神益智等之功效。臨床用于體虛欲脫，肺虛氣喘，肢冷脈微，脾虛食少，口渴少津，內(nèi)熱消渴，氣血不足等[1]。皂苷類成分是人參的主要活性物質(zhì)和藥效成分，因此提高它的提取率就可增強(qiáng)其生物利用率，以下將介紹同一批次的人參，在樣品經(jīng)過振動(dòng)磨型超微粉碎機(jī)粉碎后得到不同粒度的粉體的皂苷含量進(jìn)行測(cè)量[2]。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

AEL-200電子天平（沈陽(yáng)龍騰電子稱量?jī)x器有限公司），AB204-N精密分析天平（METTLER TOLEDO），Agilent 1260型HPLC（Agilent Technologies），TKCD-1006超聲波清洗儀（南昌科昌達(dá)超聲波設(shè)備廠），Heal Force final Filter超純水機(jī)（上海浦東分析儀器設(shè)備廠），HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國(guó)華電器有限公司），SQW-25系列超微粉碎機(jī)（山東濟(jì)南三清易辰）。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品Rb1，Re，Rg1：中國(guó)藥品生物制品檢定所；乙腈（HPLC）。

1.3 樣品制備

同一批次人參（吉林省長(zhǎng)白山）：人參粗粉（過40目篩）；人參樣品經(jīng)過超微振動(dòng)磨型得到粒徑分別為76.006～86.348 μm、29.963～30.025 μm、25.088～25.488 μm、22.163 μm。

1.4 對(duì)照品溶液的制備

取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rg1對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇定容；分別精密量取上述對(duì)照品溶液各1 mL，置于同一10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。每1 mL各含0.2 mg的混合溶液。

1.5 供試品溶液的制備

稱取5種人參樣品各約1 g，精密稱定，置索氏提取器中，精密加50 mL三氯甲烷置于磨口錐形瓶?jī)?nèi)，于水浴加熱80℃回流3 h，倒掉三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，將濾紙筒一并移入100 mL錐形瓶中，加50 mL水飽和正丁醇，密塞，放置過夜，經(jīng)過30 min超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz），濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25mL，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.6 色譜條件

色譜條件：色譜柱為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相C設(shè)為乙腈，流動(dòng)相D設(shè)為水，按下表規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm，柱溫為30°C，流速1 ml/min。理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 uL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得，結(jié)果見各圖。

2 方法學(xué)考察

2.1 線性關(guān)系

分別精密吸取“1.4”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度。在上述“1.6”色譜條件下對(duì)對(duì)照品溶液進(jìn)行液相分析和測(cè)定，記錄高效液相色譜圖并記錄各對(duì)照品峰面積，以對(duì)照品濃度（ug/ml）為橫坐標(biāo)（x），以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)（y），繪制對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程。人參皂苷Rg1：y=5.8176x-26.169，R2=0.9995，、人參皂苷Rg1：y=6.2582x-20.610 ，R2=0.9996和人參皂苷Rg1：y=12.435x+10.380，R2=0.9998。結(jié)果表明范圍內(nèi)濃度與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2.2 精密度試驗(yàn)

選取同一濃度的混合對(duì)照品溶液，在“1.6”色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，并分別計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%值，結(jié)果如下：樣品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值分別為0.94%，0.57%，1.57%，，表明該方法穩(wěn)定性良好。

2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一批人參供試品溶液1ml，精密量取，按“1.5”供試品制備方法制備樣品，分別于0、2、4、8、12、24h在“1.6”色譜條件下對(duì)供試品進(jìn)行液相分析，記錄峰面積，并分別計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%值，結(jié)果如下：0.23%，1.14%，0.59%說明供試品溶液在24h 內(nèi)其化學(xué)性質(zhì)有較好的的穩(wěn)定性。

2.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批人參供試品溶液1ml，精密量取，按“1.5”供試品制備方法制備6份樣品，按上述方法測(cè)定，以峰面積計(jì)算人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1的含量，并分別計(jì)算含量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%值，結(jié)果如下：人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值分別為：0.48%，0.53%，1.28%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5 回收率試驗(yàn)

稱取0.5 g人參粗粉置于50 mL容量瓶中，加入“1.4”節(jié)中所配溶液1.0 mL，將其混勻后按“1.5”節(jié)所述處理方法進(jìn)行提取。進(jìn)樣測(cè)定Rg1，Re和Rb1，回收率分別為100.1%，98.3%，96.5%；RSD分別為1.32%，0.95%，1.26%，表明該方法回收率良好，方法可行。

3 樣品含測(cè)

按供試品溶液制備方法操作，對(duì)人參粗粉（過40目篩），超微粉碎粒徑分別為76.006～86.348 μm、29.963～30.025 μm、25.088～25.488 μm、22.163 μm的微粉進(jìn)行人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果如下。

3 小 結(jié)

超微粉碎在中藥范疇的應(yīng)用初步已經(jīng)具有規(guī)模，在單味藥生產(chǎn)中已經(jīng)應(yīng)用十分廣泛。因此超微技術(shù)在人參中的應(yīng)用會(huì)越來越多，經(jīng)試驗(yàn)證明不同粒徑的人參微粉中，隨著粉體的粒徑越小，人參中皂苷的測(cè)定量明顯增大，本文中超微粉碎粒徑為22.163 μm的微粉中人參皂苷總含量為最高，比粗粉中皂苷測(cè)定量高出55%。超微粉碎粒徑為22.163 μm時(shí)，皂苷的測(cè)定量與粗粉相近，繼續(xù)減小粒徑，皂苷的溶出率又增加。超微粉碎粒徑為25.088～25.488 μm與超微粉碎粒徑為22.163 μm的微粉中皂苷的測(cè)定量增長(zhǎng)不大，因此，出于節(jié)約時(shí)間節(jié)省物料考慮，超微粉碎粒徑為25.088～25.488μm的微粉是最佳。

參考文獻(xiàn)

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[2] 張 晶.超微粉碎對(duì)人參中皂苷測(cè)定量的影響[J].食品科學(xué). 2009，30（18）： 96-97.

[3] 何 翌，郭 琪，杜曉敏.中藥細(xì)胞級(jí)微粉碎對(duì)體內(nèi)吸收的影響[J].中成藥，1999，21（11）：601-602.

本文編輯：李 豆