俞寧 楊瓊 周大薇

摘要[目的]研究農(nóng)鳳雞新城疫和禽流感母源抗體的衰減規(guī)律，為農(nóng)鳳雞新城疫（ND）和禽流感（AI）的預防提供依據(jù)。[方法]通過血凝抑制（HI）試驗對1～37日齡的農(nóng)鳳雞進行新城疫和禽流感（H5和H9）母源抗體水平的檢測，研究農(nóng)鳳雛雞ND和AI母源抗體的衰減規(guī)律。[結果] AI H5母源抗體水平較低，AI H9和ND的母源抗體水平相對較高，但都在3～5日齡出現(xiàn)高峰，此后隨著日齡的增長，抗體水平逐漸下降。[結論] 農(nóng)鳳雞AI H5的首免日齡推薦為5～8日齡，AI H9和ND的首免日齡推薦為7～12日齡。

關鍵詞 新城疫；禽流感；母源抗體；農(nóng)鳳雞

中圖分類號 S858.31 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2017）02-0129-02

Abstract[Objective] To study the decay laws of newcastle disease（ND） and avian influenza（AI） in Xinfeng Chicken and provide basis for the prevention of newcastle disease（ND） and avian influenza（AI） in Xinfeng Chicken.[Method] The maternal antibody levels of newcastle disease（ND） and avian influenza（AI H5 and H9）in 1-37 dayold Xinfeng Chichen were detected by using hemagglutination inhibition（HI） test to study the decay laws of newcastle disease（ND） and avian influenza（AI）maternal antibodies in Xinfeng Chicken.[Result] H5 maternal antibody level of AI was lower. The maternal antibody level of AI H9 and ND was relatively higher， and they reached the maximum values in 3-5 dayold Xinfeng Chichen， and they gradually decreased with the dayold.[Conclusion] The first immunization age of AI H5 in Xinfeng Chicken was 5-8 dayold， and the first immunization age of AI H9 and ND was 7-12 dayold.

Key words Newcastle disease（ND）； Avian influenza（AI）； Maternal antibody； Xinfeng Chicken

農(nóng)鳳雞是成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學院以矮小型品系（即宮廷鳳凰雞，帶鳳頭）為母本，與正常型青脛麻羽公雞雜交，培育出帶鳳頭性狀的矮小型青脛麻羽雞，作為優(yōu)質雞母系。該品系個體矮小、矮腳、短頸、鳳頭、青脛、青喙、白膚、黑麻羽、尾羽高翹及胸肌和腿肌較發(fā)達，肉質佳，肉味極鮮，具有廣闊的發(fā)展前景。

雞新城疫（ND）和禽流感（AI）均是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)生產(chǎn)的重要疫病，其暴發(fā)將會給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失，疫苗免疫被認為是當前預防和控制這2種疫病的主要手段。母源抗體與免疫程序的合理制訂直接相關，特別是確定不同疫苗的首免日齡時是重點考慮的因素[1-2]。為了更好地進行ND和AI的防控，筆者通過對四川農(nóng)鳳雞新城疫、禽流感母源抗體水平及其衰減情況進行檢測，旨在為該品種雞制訂科學合理的免疫程序提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 抗原和血清。禽流感H5（Re-6）血凝抑制（HI）抗原、陽性血清和陰性血清，禽流感H9（Re-2）HI抗原、陽性血清和陰性血清，新城疫HI抗原、陽性血清和陰性血清，均購自中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所。

1.1.2 1%雞紅細胞懸液。采自成年健康公雞的枸櫞酸鈉抗凝血，用生理鹽水反復洗滌3次，配制成1%雞紅細胞懸液。

1.1.3 儀器與試劑。儀器有96孔V型反應板、微量移液器、微型振蕩器、恒溫培養(yǎng)箱等；試劑有3.8%枸櫞酸鈉抗凝劑、生理鹽水等。

1.2 方法

1.2.1 試驗設計。四川農(nóng)鳳雞父母代種雞按照常規(guī)免疫程序免疫，選取抗體水平較高的種雞群，取50份血清，用于父母代種雞免疫抗體檢測。1日齡健康農(nóng)鳳雛雞（自繁自養(yǎng)）90只分成6個小組，每小組15只雞，不進行任何免疫，按照常規(guī)方法進行飼養(yǎng)管理和消毒。在1、3、5、8、11、15、19、23、30、37日齡分別采集各個小組雞的血樣，6個小組輪流采血。

1.2.2 血樣處理。將采集的血液0.8～1.0 mL放入1.5 mL離心管中，待血液充分凝集后，對血液進行3 000 r/min離心3 min，分離的血清在-20 ℃下保存，每個日齡段采集的血清用自封袋裝好，做好標記，最后統(tǒng)一對所有樣品同時測定其AI H5、 AI H9和ND的HI抗體滴度。

1.2.3 血清HI效價的檢測。采用血凝（HA）試驗與血凝抑制（HI）試驗《高致病性禽流感診斷技術》（GB /T 18936—2003）及《新城疫診斷技術》（GB/T 16550—2008）。

根據(jù)AI H5、AI H9和ND的抗原血凝價，用生理鹽水稀釋，配制成4單位病毒抗原液，通過HI試驗測定血清樣品抗體效價。

2 結果與分析

2.1 農(nóng)鳳雞父母代種雞的免疫抗體檢測結果

通過血凝試驗與血凝抑制試驗進行農(nóng)鳳雞父母代種雞的免疫抗體效價檢測，結果發(fā)現(xiàn)新城疫抗體平均效價為9.98log2，禽流感H9（Re-2）抗體平均效價為10.05log2，禽流感H5（Re-6）抗體平均效價為8.12log2。

2.2 不同日齡農(nóng)鳳雛雞新城疫母源抗體

從圖1可以看出，農(nóng)鳳雛雞新城疫母源抗體水平在3日齡達到最高（7.87log2），此后隨著日齡的增長，抗體水平逐漸下降，8日齡后抗體水平已降至臨界值（6.00log2）以下，37日齡抗體水平為0.40log2。

2.3 不同日齡農(nóng)鳳雛雞禽流感H9母源抗體

從圖2可以看出，農(nóng)鳳雛雞禽流感H9母源抗體水平在5日齡達到最高（9.13log2），此后隨著日齡的增長，抗體水平逐漸下降，15日齡后抗體水平已下降到臨界值（6.00log2）以下，37日齡抗體水平為0.93log2。

2.4 不同日齡農(nóng)鳳雛雞禽流感H5母源抗體

從圖3可以看出，農(nóng)鳳雛雞禽流感H5母源抗體水平在3日齡較高（6.53log2），此后隨著日齡的增長，抗體水平逐漸下降，5日齡后抗體水平已降至臨界值（6.00log2）以下，30日齡抗體水平基本消失。

3 討論與結論

預防接種是防控禽流感和新城疫兩大疫病的重要措施，因此確定符合四川農(nóng)鳳雞實際、科學的免疫程序十分重要。若首免時間過早，來自疫苗的抗原被高母源抗體中和，使免疫達不到理想效果；若首免時間過晚，母源抗體消退，雛雞在免疫前就可能會感染強毒，風險大大增加[3]。一般認為，ND和AI的母源抗體滴度低于6.00log2時就應當進行免疫。

該試驗中農(nóng)鳳雛雞在出殼時通過父母代種雞獲得了母源抗體，足以抵抗禽流感H5（Re-6型）、H9亞型和新城疫病毒的侵襲[4-6]，并在3～5日齡母源抗體水平出現(xiàn)高峰值，均在6.001og2以上。H5（Re-6）亞型及ND均在3日齡達到高峰，H9則在5日齡達到高峰。

該試驗結果表明，農(nóng)鳳雛雞AI H5（Re-6型）母源抗體水平不高，且在8日齡己降至6.00log2左右，因此認為在該種母源抗體水平下農(nóng)鳳雛雞在5～8日齡進行禽流感病毒（AIV） H5（Re-6）亞型疫苗首次免疫較為合理。此外，推薦農(nóng)鳳雛雞AI H9和ND的首免日齡為7～12日齡。條件較好的雞場，最好根據(jù)抗體效價的監(jiān)測情況來確定最佳的首免日齡。

為保證試驗結果的準確度與代表性，試驗前對農(nóng)鳳種雞群的ND和AI抗體水平進行了檢測，在此基礎上選取抗體水平較高的種雞群及其雛雞進行試驗。采用組內(nèi)循環(huán)法采血，避免因單一個體在短時間內(nèi)采血過多而對雛雞造成不良影響。此外，為了減少人為誤差，對同一樣品、同一時間采集的紅細胞及同一批抗原，由3人獨立進行3次重復試驗[3]。

該檢測結果為農(nóng)鳳雞免疫程序的制訂提供了技術支持，同時也可為矮小型品種雞在新城疫、禽流感的免疫防制中首免日齡的確定提供參考。

參考文獻

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