李希 萬溪 高晶晶 趙層閃 劉學(xué)飛 楊麗靜 徐麗娟 田軍彪

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化濁解毒活血通絡(luò)方對腦缺血再灌注損傷大鼠ZO-1和occludin表達(dá)的影響

李希 萬溪 高晶晶 趙層閃 劉學(xué)飛 楊麗靜 徐麗娟 田軍彪

目的 觀察化濁解毒活血通絡(luò)方對腦缺血再灌注損傷模型大鼠緊密連接蛋白ZO-1和occludin表達(dá)的影響，探討其神經(jīng)保護(hù)機制。方法 以改進(jìn)后的Zea-Longa線栓法制備局部梗死性腦缺血再灌注損傷模型，以Longa評分法進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分，光鏡下觀察腦組織形態(tài)改變，免疫組化法觀察ZO-1和occludin的分布及表達(dá)，RT-PCR法評測其在各組大鼠缺血側(cè)腦組織中表達(dá)量。結(jié)果 免疫組化結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，模型組ZO-1表達(dá)水平明顯降低(P<0.05)；與模型組相比，各用藥組ZO-1的表達(dá)水平均有升高(P<0.05)，其中以尼莫地平組和中藥高劑量組最為明顯。與假手術(shù)中相比，模型組occludin表達(dá)明顯減弱(P<0.05)，與模型組相比，各用藥組occludin表達(dá)均有增加(P<0.05)；中藥低劑量組、中劑量組、高劑量組表達(dá)依次增加(P<0.05)，高劑量組與尼莫地平組差別不明顯(P>0.05)。RT-PCR法顯示：與假手術(shù)組相比，模型組ZO-1及occludin表達(dá)水平明顯降低(P<0.05)；與模型組相比，各用藥組ZO-1及occludin的表達(dá)水平均有升高(P<0.05)，其中以尼莫地平組和高劑量組最為顯著。結(jié)論 化濁解毒活血通絡(luò)方可能通過增加ZO-1和occludin的表達(dá)、調(diào)節(jié)血腦屏障通透性等機制，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。

化濁解毒活血通絡(luò)方； 腦缺血再灌注損傷； 緊密連接蛋白

腦血管疾病包括缺血性腦血管病和出血性腦血管病，約67%的腦卒中屬于缺血性腦卒中。及早溶栓是缺血性腦血管疾病發(fā)作時最有效的治療方法，若血流再通超過了時間窗便有腦缺血再灌注損傷發(fā)生的風(fēng)險?，F(xiàn)代病理生理學(xué)研究表明腦缺血再灌注損傷是缺血性腦血管病的重要病理過程。缺血再灌注損傷是一個復(fù)雜的病理過程，血腦屏障的損傷是缺血再灌注損傷的重要方面和病理階段，且血腦屏障損傷后進(jìn)一步加重腦組織損傷，形成惡性循環(huán)。因此，減輕腦缺血再灌注帶來的血腦屏障的損傷，對于臨床治療缺血性腦血管疾病有重要意義。

化濁解毒活血通絡(luò)方是根據(jù)“濁凝閉阻清竅，瘀毒損傷腦絡(luò)”的病機，以化濁解毒與活血通絡(luò)為治療大法確定的治療方法，在臨床已得到廣泛應(yīng)用。本文旨在通過研究化濁解毒活血通絡(luò)方對局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠緊密連接蛋白ZO-1、occludin的影響，探討該方對血腦屏障的調(diào)節(jié)作用及神經(jīng)保護(hù)機制。

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器

ZO-1抗體(Invitrogen)、occludin抗體(Invitrogen)、NT膜(Pall Corporation)，免疫組化試劑盒抗兔、抗小鼠(VECTOR LABORATORIES，INC.)，總RNA提取試劑、cDNA合成試劑盒、PCR反應(yīng)體系、DNA標(biāo)準(zhǔn)均由Takara公司提供，PCR基因擴增儀(PE-9600)，紫外可見分光光度計(756MC)，復(fù)日生物電泳圖像分析系統(tǒng)(FR-980)，離心機(TDL-5-A)。

1.2 實驗動物及分組

成年SD大鼠，4～5個月齡，雄性，清潔級，共54只，體重(250～300) g，購置于河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心(合格證編號：1407012)，隨機分為：假手術(shù)組、模型組、尼莫地平組、中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組，每組9只。

1.3 藥物

化濁解毒通絡(luò)方組成：石菖蒲15 g、地龍15 g、茯苓15 g、澤瀉6 g、黃連6 g、川芎9 g、丹參15 g、赤芍15 g、當(dāng)歸9 g、郁金15 g，顆粒配方；尼莫地平片(拜爾醫(yī)藥保健有限公司，規(guī)格30 mg，批號BJ27586)，均購于河北省中醫(yī)院藥房。

1.4 模型制備及干預(yù)方法

以改進(jìn)后的Zea-Longa線栓法阻斷大鼠右側(cè)大腦中動脈制造局部梗死性腦缺血再灌注損傷模型。選用直徑為0.26 mm的尼龍線，剪成長度約50 mm的線段，將頭端燒灼成直徑為0.27～0.28 mm的圓滑小球，距離小球18 mm處以黑色筆標(biāo)記。用酒精完全消毒后將線栓置于放有肝素鈉的試管中備用。

大鼠術(shù)前禁食12小時，自由飲水，用10%水合氯醛(0.35 mL/100 g)腹腔注射麻醉，沿頸部正中線在胸骨角和離大鼠下唇1 cm處之間作切口，分離出頸總動脈、右側(cè)頸外動脈和右側(cè)頸內(nèi)動脈，分別在頸總動脈近心端及分叉處、頸內(nèi)動脈近分叉處、頸外動脈近分叉處穿絲線備用。頸總動脈近心端絲線打死結(jié)，頸內(nèi)動脈和頸外動脈的近分叉處打活結(jié)，頸總動脈近分叉處剪一倒“V”型破口，將線栓插入頸內(nèi)動脈，備用絲線打結(jié)固定線栓，松開頸內(nèi)動脈上活結(jié)，輕送線栓至頸內(nèi)動脈，進(jìn)入(18.0±0.5) mm。待腦缺血2小時后拔出線栓15 mm左右，形成腦缺血再灌注模型。

造模成功后24小時分別給予模型組灌服0.9%氯化鈉溶液20 mL/kg/d，尼莫地平組灌服尼莫地平混懸液9.375 mg/kg/d，中藥高劑量組灌服化濁解毒活血通絡(luò)方25 g/kg/d、中藥中劑量組灌服化濁解毒活血通絡(luò)化濁解毒活血通絡(luò)12.5 g/kg/d、中藥低劑量組灌服6.25 g/kg/d。每天1次，連續(xù)灌服7天。

1.5 指標(biāo)檢測

1.5.1 神經(jīng)功能缺損評分 分別于造模成功后24小時和給藥后7天以Longa評分標(biāo)準(zhǔn)對每組實驗大鼠進(jìn)行肢體神經(jīng)功能缺損程度評定和比較，0分：無任何神經(jīng)功能缺損體征，活動正常，與尋常大鼠無異；1分：不能完全伸展癱瘓側(cè)(左側(cè))前肢，活動正常；2分：爬行時向癱瘓側(cè)(左側(cè))轉(zhuǎn)圈；3分：行走時向癱瘓側(cè)(左側(cè))傾倒；4分為不能自發(fā)行走，意識水平降低；5分：死亡。1～3分為有效模型，按實驗要求剔除和補足大鼠。

1.5.2 HE染色 10%水合氯醛腹腔注射麻醉，迅速斷頭取腦，取缺血側(cè)腦組織1/2置于液氮中保存?zhèn)溆茫?/2置于4%多聚甲醛固定液中保存?zhèn)溆?。將備用的腦組織做冠狀切片，常規(guī)固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片5 μm厚備用。石蠟切片常規(guī)脫蠟到水，入蘇木精染色5分鐘，自來水沖洗，1%鹽酸乙醇分色氨水返藍(lán)，間以流水沖洗10分鐘，入伊紅染色劑染色2～3分鐘，流水沖洗10分鐘，常規(guī)脫水、透明、封片。

1.5.3 免疫組化法檢測ZO-1和occludin 腦組織切片以免疫組化法進(jìn)行檢測，具體操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。低倍鏡下(100倍)染色呈棕黃色的細(xì)胞為免疫組化染色陽性細(xì)胞，于陽性細(xì)胞分布密集區(qū)(熱點)隨機選取4個不重復(fù)視野。在高倍鏡(400倍)視野下計數(shù)每個視野內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)。

1.5.4 RT-PCR法檢測ZO-1和occludin 取組織100 mg左右，RT-PCR法進(jìn)行檢測，具體操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。取每個標(biāo)本的擴增產(chǎn)物6 μL于1%的含GV核酸染料的瓊脂糖凝膠電泳，以DNA Marker(DL2000)作為標(biāo)準(zhǔn)片段標(biāo)記，電泳后于紫外透射儀觀察，并用數(shù)碼相機照相，輸入微機應(yīng)用Quantity One凝膠圖象分析軟件對目的電泳條帶進(jìn)行分析，以相應(yīng)的內(nèi)參電泳條帶作為參照，結(jié)果以兩者之積分吸光度的比值表示。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

使用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，多組均數(shù)間的比較運用單因素方差分析，組間兩兩比較使用 SNK-q檢驗；方差不齊用秩和檢驗，以P<0.05的標(biāo)準(zhǔn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組神經(jīng)功能缺損評分對比顯示

術(shù)后24小時：假手術(shù)組大鼠無明顯的神經(jīng)功能缺損，模型組及各用藥組均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能缺損。藥物治療7天后：模型組與假手術(shù)組相比較，神經(jīng)功能缺損評分升高明顯(P<0.05)；與模型組相比較，尼莫地平組與中藥高劑量組神經(jīng)功能缺損評分均出現(xiàn)明顯下降(P<0.05)，但兩組間神經(jīng)功能缺損評分無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；與模型組比較，中藥低劑量組、中藥中劑量組神經(jīng)功能缺損程度有所減輕(P<0.05)，兩組之間神經(jīng)功能缺損程度無明顯差異(P>0.05)；與尼莫地平組比較，中藥中劑量組、中藥低劑量組神經(jīng)功能缺損程度有明顯差異(P>0.05)見表1。

表1 各組腦缺血再灌注損傷模型大鼠神經(jīng)功能缺損評分比較±s，分)

注： 與假手術(shù)組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與尼莫地平組比較，cP<0.05。

2.2 各組HE染色結(jié)果

光鏡下觀察可發(fā)現(xiàn)假手術(shù)組大鼠腦組織細(xì)胞分布整齊緊湊，形態(tài)規(guī)整，胞漿圓潤飽滿，染色均勻呈紫紅色，細(xì)胞核淡染呈藍(lán)色；模型組大鼠缺血側(cè)腦組織缺血中心區(qū)可見細(xì)胞結(jié)構(gòu)溶解破壞，大量壞死神經(jīng)元細(xì)胞腫脹，細(xì)胞核破裂或溶解，其余給藥各組大鼠大腦缺血區(qū)也可見上述病理改變，其中中藥低劑量組及中劑量組與模型組比較缺血壞死區(qū)有所減少，尼莫地平組與中藥高劑量組與模型組比較缺血壞死區(qū)明顯減少。見圖1。

圖1 各組腦缺血再灌注損傷模型大鼠HE染色比較(×400)

2.3 免疫組化法檢測結(jié)果

2.3.1 免疫組化法檢測ZO-1表達(dá)的變化 光鏡下陽性表達(dá)細(xì)胞的細(xì)胞漿染色呈棕黃色，細(xì)胞核呈圓形或類圓形，大多數(shù)陽性細(xì)胞于缺血區(qū)周圍集中分布。假手術(shù)組ZO-1持續(xù)表達(dá)，呈現(xiàn)連續(xù)分布狀態(tài)；與假手術(shù)中相比，模型組ZO-1表達(dá)明顯減弱，僅呈散在的點狀陽性染色(P<0.05)；與模型組相比，尼莫地平組與中藥高劑量組ZO-1表達(dá)量都有明顯增加(P<0.05)， 連續(xù)表達(dá)與間斷表達(dá)并存， 兩組之間差異不明顯(P>0.05)；與模型組比較，中藥低劑量組、中藥中劑量ZO-1表達(dá)量均有所增加(P<0.05)，呈間斷表達(dá)，兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意(P>0.05)。 與尼莫地平組比較，中藥中劑量組、中藥低劑量組ZO-1表達(dá)減少(P<0.05)見表2、圖2。

表2 各組腦缺血再灌注損傷模型大鼠缺血腦組織ZO-1與occludin陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)比較

注： 與假手術(shù)組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與尼莫地平組比較，cP<0.05。

圖2 各組腦缺血再灌注損傷模型大鼠免疫組化法檢測ZO-1表達(dá)比較(×400)

2.3.2 免疫組化法檢測occludin 表達(dá) 光下陽性表達(dá)細(xì)胞胞漿染色呈棕黃色，細(xì)胞核呈圓形或類圓形，大多數(shù)陽性細(xì)胞于缺血區(qū)周圍集中分布。假手術(shù)組occludin 持續(xù)表達(dá)，呈現(xiàn)連續(xù)分布狀態(tài)；與假手術(shù)中相比，模型組occludin 表達(dá)明顯減弱，僅呈散在點狀陽性染色，(P<0.05)；與模型組相比，尼莫地平組與中藥高劑量組occludin 表達(dá)量均增加明顯(P<0.05)，連續(xù)表達(dá)與間斷表達(dá)并存，兩組之間無明顯差異(P>0.05)；與模型組比較,中藥低劑量組、中藥中劑量occludin 表達(dá)量均有所增加(P<0.05)，呈間斷表達(dá)，中藥中劑量組較中藥低劑量組增加明顯(P<0.05)。與尼莫地平組比較，中藥中劑量組、中藥低劑量組occludin表達(dá)量明顯減少(P<0.05)。表2、見圖3。

圖3 各組腦缺血再灌注損傷模型大鼠免疫組化法檢測occludin表達(dá)比較(×400)

2.4 RT-PCR法檢測結(jié)果

2.4.1 RT-PCR法檢測ZO-1表達(dá) 模型組與假手術(shù)組比較，ZO-1表達(dá)量明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，尼莫地平組與中藥高劑量組ZO-1表達(dá)量明顯升高(P<0.05)；尼莫地平組與中藥高劑量組之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；中藥低劑量組、中藥中劑量ZO-1表達(dá)量均有增加(P<0.05)，中藥低劑量組、中藥中劑量組之間無明顯差異(P>0.05)。見表3。

表3 各組腦缺血再灌注損傷模型大鼠缺血腦組織ZO-1蛋白與occludin蛋白表達(dá)比較

注： 與假手術(shù)組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與尼莫地平組比較，cP<0.05。

2.4.2 RT-PCR法檢測occludin表達(dá) 模型組與假手術(shù)組比較，occludin表達(dá)量明顯降低(P<0.05)；與模型組相比，尼莫地平組與中藥高劑量組occludin表達(dá)量均升高(P<0.05)；尼莫地平組與中藥高劑量組之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；與模型組比較，中藥低劑量組、中藥中劑量組occludin表達(dá)量均有增加(P<0.05)，中藥低劑量組、中藥中劑量組之間無明顯差異(P>0.05)。與尼莫地平組比較，中藥中劑量組、中藥低劑量組occludin表達(dá)量明顯減少(P<0.05)。見表3。

3 討論

腦缺血再灌注損傷是缺血性腦血管病一個常見和重要的病理過程，屬于中醫(yī)中風(fēng)證范疇，中風(fēng)高發(fā)人群為老年人，臟腑衰微，脾無運力，對精微物質(zhì)和水液布散功能減弱，久則痰濁內(nèi)生，在上蒙蔽清竅，在體壅阻氣機，致血行不暢，血瘀與痰濁互結(jié)化生濁毒，久而腐化凝聚于腦，損傷腦之絡(luò)脈，故其基本病機為“濁凝閉阻清竅，瘀毒損傷腦絡(luò)”[1]。根據(jù)這一病機，以化濁解毒與活血通絡(luò)為治療大法，擬定了化濁解毒活血通絡(luò)方，方中石菖蒲化濁開竅，黃連祛濁解毒，郁金行氣活血，三藥合而為君，共奏化濁解毒活血通絡(luò)之功；地龍性善走竄、通經(jīng)活絡(luò)，丹參、赤芍、當(dāng)歸養(yǎng)血活血化瘀，合為臣藥；茯苓健脾利濕、澤瀉利濕泄熱，共為佐藥；川芎活血行氣、引藥上行頭目為使藥。該方中單味藥物經(jīng)現(xiàn)代藥理研究多有神經(jīng)保護(hù)作用，如石菖蒲中揮發(fā)油可有效抑制腦缺血再灌注后Glu、Asp、γ-氨基丁酸含量的異常升高，減輕神經(jīng)損傷[2]；黃連中黃連素具有一定的抗腦缺血缺氧作用[3]；丹參中丹參酮通過減少自由基產(chǎn)生，抑制過氧化反應(yīng)、提高腦血流量等減輕腦損傷[4]；赤芍中的芍藥總苷能通過提高Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase的活性起到腦保護(hù)作用[5]。尼莫地平對腦缺血再灌注后的血腦屏障有保護(hù)作用，已廣泛用于腦卒中的治療[6]。

血腦屏障的損傷及通透性的異常改變是腦缺血再灌注損傷的一個重要環(huán)節(jié)。腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞之間形成的緊密連接(tight junctions，TJ)是大分子物質(zhì)經(jīng)細(xì)胞旁途徑轉(zhuǎn)運的屏障[7]，對限制血液和腦組織間大分子的運動、維持大腦內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)、保持細(xì)胞的極性、維持血管通透性有重要的作用，是保持血腦屏障完整性的重要因素。所以，腦缺血再灌注后如何保持緊密連接成為保護(hù)血腦屏障的關(guān)鍵[8]，而緊密連接蛋白ZO-1和occludin是血腦屏障非常重要的標(biāo)志性蛋白。

ZO家族包括ZO-1、ZO-2、ZO-3，其中ZO-1的作用最為重要，是第一個被確定的緊密連接相關(guān)蛋白。ZO-1在構(gòu)成緊密連接中的作用是：(1)溝通橋梁[3]，是構(gòu)成TJ支持結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)。(2)使上皮細(xì)胞具有極性；(3)參與細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)；(4)參與細(xì)胞的增殖與分化；(5)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移；(6)參與細(xì)胞內(nèi)外分子信號的傳導(dǎo)。ZO-1既是緊密連接的主要結(jié)構(gòu)蛋白，也是緊密連接的功能蛋白，其表達(dá)量變化可以影響其他緊密連接蛋白結(jié)構(gòu)功能改變，其水平的下降和活性的降低均會影響細(xì)胞間緊密連接結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定和細(xì)胞功能的完整性[9]。

occludin蛋白是第一個被分離的緊密連接相關(guān)蛋白，occludin在腦血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的緊密連接中表達(dá)最高。其作用為：(1)緊密連接的重要結(jié)構(gòu)蛋白，是BBB通透性明顯低于其他血組織屏障的重要原因[10]，且已證實它直接參與腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞上緊密連接的形成，行使重要的屏障功能。(2)調(diào)節(jié)功能，occludin是緊密連接中關(guān)鍵性的一個調(diào)節(jié)性蛋白。(3)減震功能，occludin蛋白可能存在類似關(guān)鍵性減震器功能，用以調(diào)節(jié)血管動力學(xué)中緊密連接蛋白對緊急變化的反應(yīng)。(4)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[11]，occludin蛋白的C端同時還有信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能，調(diào)節(jié)occludin蛋白的二聚體化。(5)協(xié)同作用，occludin與另一種跨膜蛋白Claudins的共聚作用對緊密連接的穩(wěn)定性方面起到很重要的作用[12]。occludin表達(dá)水平能夠代表BBB的結(jié)構(gòu)狀態(tài)，其下降程度可作為BBB損傷程度的標(biāo)志。

本研究發(fā)現(xiàn)化濁解毒活血通絡(luò)方可能通過調(diào)控緊密連接蛋白ZO-1、occludin的表達(dá)水平、調(diào)整緊密連接的結(jié)構(gòu)和功能、調(diào)節(jié)血腦屏障通透性，發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)作用。但本研究對ZO-1、occludin蛋白定量所采用的方法屬于半定量，存在一定的主觀性，不夠精確，仍需進(jìn)一步研究。

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(本文編輯： 董歷華)

Effects ofHuazhuoJieduHuoxueTongluoprescription on expression of tight junction ZO-1 and occludin in rats with cerebral ischemia reperfusion injury

LIXi，WANXi，GAOJingjing，etal.

HebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050011，China

TIANJunbiao,E-mail:jbt1965@sina.com

Objective To investigate the effects ofHuazhuoJieduHuoxueTongluoprescription on expression of tight junction protein ZO-1 and occludin in rats with Cerebral ischemia reperfusion Injury, and explore the neuroprotective mechanism. Methods The rat model of cerebral ischemia-reperfusion injury(CIRI) was induced by Zea-Longa method. The neurological severity score was assessed by longa grade point standard, the change of ischemic brain tissue was observed under light microscope, and the expression of ZO-1 and occludin was detected by immunohistochemistry and RT-PCR method. Results The immunohistochemical results showed that compared with sham operation group, the expression of ZO-1 in model group was lower (P<0.05). Compared with the model group, the expression of ZO-1 in drugs group was obviously higher (P<0.05), the nimodipine group and high dose group was increased most obviously(P<0.05). Compared with sham operation group, the expression of occludin in model group was lower (P<0.05). Compared with model group, the expression of drugs group was obviously higher (P<0.05), the expression of middle dose group was higher than that in the low dose group(P<0.05), lower than that in the high dose group(P<0.05). There was no significant difference between nimodipine group and high dose group (P>0.05). The RT-PCR method showed that compared with sham operation group, the expression of ZO-1 and occludin in model group were lower (P<0.05). Compared with the model group, the expression of ZO-1 and occludin in drugs group was obviously higher (P<0.05), the nimodipine group and high dosegroup were increased most obviously(P<0.05). ConclusionHuazhuoJieduHuoxueTongluoprescription may play a neuroprotective role by increasing the expression of ZO-1 and occludin and regulating the permeability of blood-brain barrier.

HuazhuoJieduHuoxueTongluoprescription； Cerebral ischemia reperfusion injury； Tight junction protein

河北省自然科學(xué)基金面上項目(H2013206393)；河北省科技支撐計劃(15277748D )；河北省省級中醫(yī)藥類重大醫(yī)學(xué)科研課題(zyzd2013004)；河北省中醫(yī)藥管理局科研計劃(2014039)

石家莊 050011，河北醫(yī)科大學(xué)研究生院[李希(碩士研究生)、萬溪、高晶晶、田軍彪]；河北省衡水市中醫(yī)院(趙層閃)；河北省中醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(楊麗靜、徐麗娟、田軍彪、劉學(xué)飛)

李希(1989- )，女，2014級在讀碩士研究生。研究方向：中西醫(yī)結(jié)合臨床與研究。E-mail：948977428@qq.com

田軍彪(1964- )，博士，主任醫(yī)師，教授，博士生導(dǎo)師。研究方向：中西醫(yī)結(jié)合臨床與研究。E-mail：jbt1965@ sina.com

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2017.07.005

2016-02-22)