江明金，曹端文，周 健，呂燕妮，裘雅玲，溫金華，魏筱華

(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，江西 南昌 330006)

miR-124抑制GluR2參與甲基苯丙胺PC12細(xì)胞成癮

江明金，曹端文，周 健，呂燕妮，裘雅玲，溫金華，魏筱華

(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，江西 南昌 330006)

目的 探討miR-124表達(dá)在甲基苯丙胺成癮PC12細(xì)胞模型中的變化及其可能參與的調(diào)控機(jī)制。方法 培養(yǎng)PC12細(xì)胞，隨機(jī)分為6組：① 正常對(duì)照組;② 甲基苯丙胺組;③ agomir Negative Control組;④ miR-124 agomir組;⑤ agomir Negative Control+甲基苯丙胺組;⑥ miR-124 agomir+甲基苯丙胺組。處理結(jié)束后，提取細(xì)胞總RNA和蛋白，Real time PCR檢測(cè)miR-124表達(dá)，Western blot檢測(cè)谷氨酸受體2亞單位(ionotropic glutamate receptor AMPA alpha 2，GluR2)蛋白表達(dá)。結(jié)果 與正常對(duì)照組相比，甲基苯丙胺處理組PC12細(xì)胞中miR-124表達(dá)明顯降低，GluR2蛋白表達(dá)明顯升高；與agomir Negative Control+甲基苯丙胺組相比，miR-124 agomir+甲基苯丙胺組PC12細(xì)胞中miR-124表達(dá)明顯升高，GluR2蛋白表達(dá)明顯降低。結(jié)論 miR-124可能通過(guò)抑制GluR2參與了甲基苯丙胺誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞成癮。

miR-124；GluR2；過(guò)表達(dá)；甲基苯丙胺；PC12細(xì)胞；成癮；AMPA

甲基苯丙胺，俗稱“冰毒”，是當(dāng)前最為流行的一種新型合成毒品，其精神依賴性強(qiáng)、復(fù)吸率高、神經(jīng)毒性大，不僅給成癮者自身造成嚴(yán)重?fù)p害，而且引起嚴(yán)重社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和公共衛(wèi)生問(wèn)題。大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(rat pheochromocytoma cells，PC12)起源于神經(jīng)嵴，因其在神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor，NGF)誘導(dǎo)下，形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能都類似于交感神經(jīng)細(xì)胞，已成為一個(gè)廣泛使用的神經(jīng)元體外細(xì)胞模型[1]。微小核糖核酸(microRNAs，MiRNAs)是一類長(zhǎng)度約18～25個(gè)核苷酸的內(nèi)源非編碼小分子RNAs，通過(guò)與靶基因mRNA的互補(bǔ)配對(duì)，在轉(zhuǎn)錄后水平上對(duì)基因的表達(dá)進(jìn)行負(fù)調(diào)控，從而導(dǎo)致靶基因mRNA的降解或翻譯抑制。miRNA agomir是經(jīng)過(guò)特殊化學(xué)修飾的miRNA激動(dòng)劑，通過(guò)模擬內(nèi)源性miRNA進(jìn)入miRNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體來(lái)調(diào)節(jié)靶基因mRNA的表達(dá)而發(fā)揮作用，適合進(jìn)行長(zhǎng)期的miRNA過(guò)表達(dá)功能研究。miRNAs已被發(fā)現(xiàn)存在于哺乳動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)中并且部分在腦部富集，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、神經(jīng)元分化和突觸可塑性發(fā)揮重要的調(diào)控作用[2]。關(guān)于miRNAs參與藥物成癮調(diào)控的研究自2008年P(guān)ietrzykowski等[3]首次報(bào)道后迅速增多。越來(lái)越多的證據(jù)顯示，成癮性物質(zhì)能誘導(dǎo)miRNAs表達(dá)水平的變化，而成癮相關(guān)腦區(qū)miRNAs表達(dá)的改變直接參與了對(duì)成癮行為的調(diào)節(jié)。目前，對(duì)于miRNAs與可卡因、酒精、尼古丁及阿片類成癮性藥物的研究報(bào)道較多，而對(duì)miRNAs在甲基苯丙胺成癮中的調(diào)控作用所知甚少，處于起步階段。因此，研究miRNAs在甲基苯丙胺成癮中的調(diào)控作用，對(duì)進(jìn)一步揭示新型毒品的成癮機(jī)制及發(fā)現(xiàn)新的藥物作用靶點(diǎn)具有重要意義。

miR-124是一個(gè)高度保守、大腦中特定表達(dá)的miRNA，占整個(gè)大腦中miRNAs的25%～48%[4]。作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)表達(dá)最豐富的miRNA，miR-124與藥物成癮密切有關(guān)。Chandrasekar等[5]報(bào)道顯示，慢性可卡因處理可導(dǎo)致中腦腹側(cè)被蓋區(qū)和海馬區(qū)miR-124表達(dá)明顯下調(diào)，過(guò)表達(dá)miR-124可抑制可卡因誘導(dǎo)的條件性位置偏愛(ài)效應(yīng)的形成[6]。Qiu等[7]發(fā)現(xiàn)嗎啡處理能明顯上調(diào)小膠質(zhì)細(xì)胞中miR-124表達(dá)，Xu等[8]報(bào)道氯胺酮給藥可導(dǎo)致海馬miR-124表達(dá)明顯升高。與成熟的神經(jīng)細(xì)胞中表達(dá)類似，miR-124在PC12細(xì)胞表達(dá)豐富。先前有研究顯示，神經(jīng)元中谷氨酸受體2亞單位(ionotropic glutamate receptor AMPA alpha 2，GluR2)是miR-124的一個(gè)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控靶基因[9]。GluR2是α-氨基羥甲基異惡唑丙酸型谷氨酸受體(alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionate，AMPA)的一個(gè)重要亞型，AMPA受體作為腦內(nèi)的一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì)受體，在藥物依賴形成過(guò)程中起著十分重要的作用。本研究通過(guò)觀察甲基苯丙胺處理PC12細(xì)胞后miR-124和GluR2的表達(dá)情況，探討miR-124參與甲基苯丙胺誘導(dǎo)PC12細(xì)胞成癮的可能的調(diào)控機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞 NGF誘導(dǎo)分化的PC12細(xì)胞，由中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)提供。

1.1.2 藥品與試劑 鹽酸甲基苯丙胺，國(guó)家麻醉品實(shí)驗(yàn)室，批號(hào)1212-9802。RPMI medium 1640 basic(1×)、FBS(fetal bovine serum，Qualified)、HS(horse serum，Qualified)、胰酶及Penicillin-streptomycin(pen strep)，美國(guó)Gibco(life technologies)公司；二甲基亞砜(DMSO)，天津市大茂化學(xué)試劑廠；噻唑藍(lán)(MTT)，Sigma公司；micrONTMrno-miR-124 agomir、micrONTMagomir Negative Control #22，廣州市銳博生物科技有限公司；miRNeasy Mini Kit，QIAGEN公司；SYBR?PrimeScriptTMmiRNA RT-PCR Kit，TaKaRa公司；兔抗GluR2多克隆抗體，Millipore公司；兔抗β-actin單克隆抗體、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔二抗，博士德公司；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒，碧云天生物技術(shù)研究所。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 BCM-1000A超凈臺(tái)，蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；HERAcell 240i二氧化碳培養(yǎng)箱，美國(guó)Thermo Scientific公司；IX53熒光倒置顯微鏡，日本OLYMPUS公司；HC-3018R高速冷凍離心機(jī)，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；HVE-50高壓滅菌鍋，HIRAYAMA MANUFACTURING公司；Stratagene Mx3005P型Real-time PCR儀，美國(guó)安捷倫公司；Bio-Rad梯度PCR儀、Mini-PROTEAN 3垂直電泳及轉(zhuǎn)移槽，美國(guó)Bio-Rad公司；ChemiImager 5500凝膠成像儀，美國(guó)Alpha Innotech公司。

1.2 方法

1.2.1 PC12細(xì)胞培養(yǎng) 將PC12細(xì)胞置于預(yù)先配制好的完全培養(yǎng)基(RPMI 1640+10%滅活馬血清+5%胎牛血清+0.5%雙抗)，在飽和濕度，37℃恒溫的5% CO2濃度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天換液，待細(xì)胞匯合至70%后傳代培養(yǎng)。

1.2.2 MTT檢測(cè)甲基苯丙胺處理的PC12細(xì)胞活力 將PC12細(xì)胞接種于96孔板中，培養(yǎng)48 h后，吸凈培養(yǎng)基，加入梯度稀釋好的甲基苯丙胺(10、50、100、200 μmol·L-1)各100 μL，每個(gè)藥均設(shè)置空白對(duì)照，每個(gè)濃度6個(gè)復(fù)孔。96孔板于培養(yǎng)箱中孵育48 h，每孔加入20 μL 0.5% MTT，培養(yǎng)箱孵育4 h，顯微鏡下觀察，水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臢沉積在細(xì)胞中，停止孵育，盡量棄去板內(nèi)液體，各組每孔加入100 μL DMSO，水平搖床搖幾分鐘，使結(jié)晶充分溶解，酶標(biāo)儀490 nm波長(zhǎng)測(cè)OD值。

1.2.3 甲基苯丙胺處理PC12細(xì)胞 將PC12細(xì)胞接種于96孔板中，接種1×105個(gè)細(xì)胞至含有1 mL完全培養(yǎng)基的12孔板中，當(dāng)細(xì)胞匯合度大于50%(使給藥時(shí)的細(xì)胞密度在50%～80%)時(shí)，棄去孔中的培養(yǎng)基，加入含甲基苯丙胺的培養(yǎng)基，加藥后將12孔板繼續(xù)放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，提取細(xì)胞的總RNA和蛋白。

1.2.4 PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-124 agomir 接種1×105個(gè)細(xì)胞至含有1 mL完全培養(yǎng)基的12孔板培養(yǎng)皿孔中，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度大于50%時(shí)，棄去孔中的培養(yǎng)基，加入含miR-124 agomir或agomir Negative Control的培養(yǎng)基，輕輕吹打、混勻后，將12孔板繼續(xù)放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染成功后，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，棄去12孔板中的培養(yǎng)基，加入含甲基苯丙胺的培養(yǎng)基，繼續(xù)放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，提取細(xì)胞的總RNA和蛋白。

1.2.5 Real-time PCR檢測(cè)PC12細(xì)胞中miR-124表達(dá) 按照QIAGEN公司的RNA提取試劑盒miRNeasy Mini Kit說(shuō)明書進(jìn)行PC12細(xì)胞總RNA提取。RNA濃度、純度和完整性檢測(cè)合格后，參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行Poly(A)加尾和反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。Poly(A)加尾和反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件為：50℃ 60 min，85℃ 5 s。按照Real-time PCR引物設(shè)計(jì)原則設(shè)計(jì)引物，以U6作為內(nèi)參對(duì)照，引物的序列見(jiàn)Tab 1，所設(shè)計(jì)的引物用于大鼠來(lái)源的基因。所有PCR引物均由寶生物工程(大連)有限公司合成。按照SYBR?PrimeScriptTMmiRNA RT-PCR試劑盒的操作說(shuō)明書配制Real-time PCR反應(yīng)體系。Real-time PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性10 s；95℃ 5 s，60℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)。分別擴(kuò)增miR-124和U6的DNA片段。采用2-ΔΔCT法對(duì)Real-time PCR結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)算ΔCT(域循環(huán)數(shù))=CT(目的基因)-CT(內(nèi)參基因)，ΔΔCT=ΔCT(甲基苯丙胺或過(guò)表達(dá)處理組)-ΔCT(正常對(duì)照組)，差別倍數(shù)=2-ΔΔCT，其中正常對(duì)照組的數(shù)值均為1。

Tab 1 Primers of polymerase chain reaction

1.2.6 Western blot檢測(cè)PC12細(xì)胞中GluR2蛋白表達(dá) 按照每孔PC12細(xì)胞加相應(yīng)比例的RIPA裂解液進(jìn)行裂解，4℃，14 000×g離心后取上清(蛋白)分裝于0.5 mL離心管中，BCA法檢測(cè)蛋白濃度，其余-80℃保存。取總蛋白30 μg進(jìn)行8%聚丙烯酰胺凝膠電泳；濕轉(zhuǎn)100 V，90 min將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜；5%脫脂奶粉封閉2 h，一抗4℃孵育過(guò)夜，洗膜后二抗室溫孵育2 h。用Image-Pro Plus 6.0圖象處理軟件分析目的條帶的積分光密度(IOD)，與相應(yīng)加樣孔內(nèi)參β-actin IOD的比值表示目的蛋白的表達(dá)強(qiáng)度。以對(duì)照組灰度值設(shè)為1。

2 結(jié)果

2.1 甲基苯丙胺對(duì)PC12細(xì)胞活力的影響 觀察了PC12細(xì)胞施加不同濃度甲基苯丙胺48 h后細(xì)胞的活力，發(fā)現(xiàn)當(dāng)甲基苯丙胺濃度超過(guò)50 μmol·L-1以后，細(xì)胞活力開(kāi)始下降，當(dāng)濃度達(dá)到100 μmol·L-1后，細(xì)胞活力明顯降低(Fig 1)。因此，接下來(lái)實(shí)驗(yàn)中，我們以50 μmol·L-1的終濃度作為甲基苯丙胺的最大安全劑量。

Fig 1 Effect of methamphetamine on PC12 cell viability(±s,μmol·L-1)

**P<0.01vs0 μmol·L-1

2.2 PC12細(xì)胞中miR-124的表達(dá) 與正常對(duì)照組比較，甲基苯丙胺處理組PC12細(xì)胞中miR-124表達(dá)明顯降低(P<0.01)。與agomir Negative Control組比較，miR-124 agomir組PC12細(xì)胞中miR-124表達(dá)明顯升高(P<0.01)，表明PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-124 agomir后，成功使miR-124過(guò)表達(dá)。與agomir Negative Control組比較，agomir Negative Control+甲基苯丙胺組PC12細(xì)胞中miR-124的表達(dá)明顯降低(P<0.01)；與agomir Negative Control+甲基苯丙胺組比較，miR-124 agomir+甲基苯丙胺組PC12細(xì)胞miR-124表達(dá)明顯升高(P<0.01)(Fig 2)。

Fig 2 Measurement of miR-124 expressionin PC12 cells by Real-time PCR(±s)

1:control group;2:methamphetamine group;3:agomir Negative Control group;4:miR-124 agomir group;5:agomir Negative Control+methamphetamine group;6:miR-124 agomir+methamphetamine group.**P<0.01vscontrol group;##P<0.01vsagomir negative control group;△△P<0.01vsagomir negative control+methamphetamine group

2.3 PC12細(xì)胞中GluR2蛋白的表達(dá) 與正常對(duì)照組比較，甲基苯丙胺處理組PC12細(xì)胞中GluR2蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.01)。與agomir Negative Control組比較，agomir Negative Control+甲基苯丙胺組PC12細(xì)胞中GluR2蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.01)；與agomir Negative Control+甲基苯丙胺組比較，miR-124 agomir+甲基苯丙胺組PC12細(xì)胞GluR2蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.01)(Fig 3)。

Fig 3 Detection of expression of GluR2 protein in PC12 cells by Western blot(±s)

1:control group;2:methamphetamine group;3:agomir negative control group;4:agomir negative control+methamphetamine group;5:miR-124 agomir+methamphetamine group.**P<0.01vscontrol group;##P<0.01vsagomir negative control group;△△P<0.01vsagomir Negative control+methamphetamine group

3 討論

大量的研究表明，苯丙胺類導(dǎo)致PC12細(xì)胞興奮成癮的作用時(shí)間約在48 h左右[10-11]。時(shí)間太短無(wú)法建立起成癮模型，太長(zhǎng)又因本身的細(xì)胞毒作用易導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的衰亡，因此本實(shí)驗(yàn)中我們?cè)O(shè)計(jì)甲基苯丙胺作用細(xì)胞的時(shí)間為48 h，以模擬細(xì)胞成癮的時(shí)間。首先我們考察了不同濃度甲基苯丙胺處理48 h對(duì)細(xì)胞活力的影響，發(fā)現(xiàn)當(dāng)甲基苯丙胺濃度超過(guò)50 μmol·L-1后，細(xì)胞活力開(kāi)始下降，當(dāng)濃度達(dá)到200 μmol·L-1后，細(xì)胞活力明顯降低，因此接下來(lái)實(shí)驗(yàn)中，我們以50 μmol·L-1的終濃度作為甲基苯丙胺的最大安全劑量，排除由于甲基苯丙胺本身的興奮性毒性使細(xì)胞死亡而對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。

miRNAs在甲基苯丙胺成癮中的作用日益受到關(guān)注[12]。miR-124作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量最豐富的miRNA，在甲基苯丙胺成癮形成過(guò)程中可能發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，甲基苯丙胺處理48 h能使PC12細(xì)胞中miR-124表達(dá)明顯降低。實(shí)驗(yàn)中，我們觀察發(fā)現(xiàn)，甲基苯丙胺處理PC12細(xì)胞后，細(xì)胞突起變短，有聚集成團(tuán)現(xiàn)象。先前有研究顯示，miR-124能促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞突起生長(zhǎng)[13]，因此我們推測(cè)甲基苯丙胺使PC12細(xì)胞突起變短是由于其下調(diào)miR-124表達(dá)所致。對(duì)miR-124靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)miR-124與GluR2的3′UTR保守區(qū)域存在多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。先前有研究報(bào)道，額顳癡呆關(guān)聯(lián)的社會(huì)行為學(xué)損傷小鼠皮層miR-124表達(dá)明顯降低，進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-124通過(guò)調(diào)控Gria2(即GluR2)參與了其損傷機(jī)制[9]。GluR2是AMPA受體的一個(gè)重要亞型，其在AMPA受體中的相對(duì)含量決定了AMPA受體的功能特性。在成癮性藥物作用下，中腦邊緣多巴胺系統(tǒng)及相關(guān)腦區(qū)神經(jīng)元AMPA受體功能或數(shù)量早期即發(fā)生了一系列的變化，從而進(jìn)一步介導(dǎo)了許多后續(xù)效應(yīng)的發(fā)生與維持，AMPA受體的改變可能是觸發(fā)藥物成癮的“扳機(jī)”。因此，我們利用Western blot檢測(cè)GluR2蛋白表達(dá)，與miR-124表達(dá)結(jié)果剛好相反，甲基苯丙胺處理使PC12細(xì)胞中GluR2蛋白表達(dá)明顯升高，這與先前研究[14]報(bào)道甲基苯丙胺可誘導(dǎo)大鼠紋狀體和前額葉皮層GluR2表達(dá)明顯升高相一致。

為了進(jìn)一步驗(yàn)證miR-124是否通過(guò)抑制GluR2參與了甲基苯丙胺誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞成癮，我們通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-124 agomir使PC12細(xì)胞中miR-124過(guò)表達(dá)。結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染miR-124 agomir 24 h后，觀察到PC12細(xì)胞中miR-124表達(dá)明顯升高，表明PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-124 agomir后，成功使miR-124過(guò)表達(dá)。并且我們觀察發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染agomir對(duì)PC12細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)沒(méi)有明顯影響。因此，轉(zhuǎn)染成功后，我們進(jìn)一步給予甲基苯丙胺處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與甲基苯丙胺處理的PC12細(xì)胞相比較，過(guò)表達(dá)miR-124能使PC12細(xì)胞中GluR2蛋白表達(dá)明顯降低。因此，本研究結(jié)果表明，miR-124可能通過(guò)抑制GluR2參與了甲基苯丙胺誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞成癮。

綜上所述，我們利用50 μmol·L-1甲基苯丙胺處理PC12細(xì)胞48 h，模擬甲基苯丙胺成癮細(xì)胞模型，發(fā)現(xiàn)甲基苯丙胺處理可使PC12細(xì)胞中miR-124表達(dá)明顯降低，并且其作用可能與其抑制GluR2表達(dá)相關(guān)。但miR-124參與甲基苯丙胺成癮的具體分子機(jī)制仍待體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步研究闡明。

(致謝：本實(shí)驗(yàn)在南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床藥理研究室實(shí)驗(yàn)室完成，感謝全體實(shí)驗(yàn)室人員在實(shí)驗(yàn)中給予的幫助和支持！)

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MiR-124 involves in methamphetamine addiction in PC12 cells by inhibiting GluR2

JIANG Ming-jin, CAO Duan-wen, ZHOU Jian, LYU Yan-ni, QIU Ya-ling, WEN Jin-hua,WEI Xiao-hua
(DeptofPharmacy,theFirstAffiliatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang330006,China)

Aim To investigate the change of miR-124 expression in methamphetamine-induced addiction in PC12 cells and the possible regulatory mechanism that it involves.Methods PC12 cells were randomly divided into 6 groups as follows: control group, methamphetamine group, agomir Negative Control group, miR-124 agomir group, agomir Negative Control+methamphetamine group and miR-124 agomir+methamphetamine group. After the treatment, the total RNA and protein were extracted in PC12 cells. The expression of miR-124 was measured by Real-time PCR and the expression of GluR2 was determined by Western blot in PC12 cells.Results Compared with those in the control group, the expression of miR-124 was remarkably decreased and the expression of GluR2 was significantly increased in the methamphetamine group in PC12 cells. Compared with those in the agomir Negative Control+methamphetamine group, the expression of miR-124 was remarkably increased and the expression of GluR2 was significantly decreased in the miR-124 agomir+methamphetamine group in PC12 cells.Conclusion MiR-124 might involve in methamphetamine-induced addiction in PC12 cells by inhibiting GluR2.

miR-124; GluR2; overexpression; methamphetamine; PC12 cells; addiction; AMPA

2017-02-09；

2017-05-23

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81660591，81560632)

江明金(1988-)，男，博士，藥師，研究方向：中藥及其有效成分抗藥物成癮的分子機(jī)制，E-mail：comity2006@126.com； 魏筱華(1964-)，女，主任藥師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：臨床藥理學(xué)，通訊作者，E-mail：wxh-hello@163.com

時(shí)間：2017-6-7 19:04 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170607.1904.038.html

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.07.019

A

1001-1978(2017)07-0982-05

R329.24；R392.11；R749.61；R971.7；R971.93；R977.9